【行业标准】 出口食品中烯酰吗啉残留量检测方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2917—2011
出口食品中烯酰吗啉残留量检测方法Determination of dimethomorph residues in foodstuffs for export2011-05-31发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-12-01实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2917—2011
本标准起草单位：中华人民共和国河南出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局本标准第一法主要起草人：郭俊峰、杨冀州、王素方、彭涛、魏蔚、张守杰。本标准第二法主要起草人：彭云霞、马晓刚、王建华。TYKANYKAa
1范围
出口食品中烯酰吗嘛残留量检测方法SN/T2917—2011
本标准规定了出口食品中烯酰吗啉残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法和气相色谱-质谱测定方法。
本标准第一法适用于葱、大蒜、菠菜、豌豆、番茄、马铃薯、苹果、柑橘、猪肉、猪肝、牛肾和牛奶中烯酰吗啉残留量的检测和确证，第二法适用于荷兰豆、白菜、鲜山葵、萝卜下、脱水洋葱、干姜、大米、芸豆、核桃、普洱茶、猪肉、蜂蜜中烯酰吗啉残留量的检测和确证。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3第一法液相色谱-质谱/质谱法
3.1方法提要
样品经乙睛提取，经分散固相萃取净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。3.2试剂和材料
除特别规定外.所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.2.1
乙睛：液相色谱纯。
3.2.2正已烷：液相色谱纯，使用前先用乙睛饱和。3.2.3甲酸：液相色谱纯。
3.2.4氯化钠。
3.2.5无水硫酸镁：研磨后在650℃下烘4h，干燥器中冷却后备用。3.2.6
固相萃取吸附剂：PSA（primarysecondaryamine，伯仲胺）。3.2.7
固相萃取吸附剂：C1s型。
固相萃取吸附剂：石墨碳吸附剂GCB（graphitizedcarbonblack）。3.2.9甲酸溶液：0.1%（体积分数）。将1mL甲酸（3.2.3)用水稀释至1000mL。3.2.100.1%甲酸-乙睛溶液：（6十4，体积比）。将6体积的0.1%甲酸溶液（3.2.9）与4体积的乙混匀后备用。
3.2.11烯酰吗啉标准物质（dimethomorph，CAS编号：110488-70-5.分子式：Cz.H22CINO,）：纯度大于等于98%。
3.2.12烯酰吗啉标准储备液：准确称取烯酰吗啉标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至100mL，浓度为100mg/L。0～4℃中保存。
3.2.13烯酰吗啉基质标准工作液：根据需要吸取一定量的标准储备液（3.2.12）用空白样品基质溶液稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制。1
TKANYKAa
SN/T2917—2011
3.2.14微孔滤膜：0.22um，有机相。3.3仪器和设备
3.3.1液相色谱-质谱/质谱联用仪，配有电喷雾（ESI）源。3.3.2
组织捣碎机。
天平：感量分别为0.1mg和0.01g3.3.4均质器。
3.3.5涡旋振荡器。
5离心机。
3.3.7氮吹仪。
3.4试样制备与保存
3.4.1葱、大蒜、菠菜、豌豆、番茄、马铃薯、苹果、柑橘从所取全部样品中取出有代表性可食部分约500g，充分捣碎均质，均分成两份，分别装人洁净容器内。密封作为试样，标明标记。于一18℃以下保存。3.4.2猪肉、猪肝、牛肾
从所取全部样品中取出有代表性可食部分约500g，充分捣碎均质，均分成两份分别装人洁净容器内。密封作为试样，标明标记。于一18℃以下保存。3.4.3牛奶
从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分均匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密封作为试样，标明标记。于一18℃以下保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化3.5测定步骤
3.5.1提取
称取5g试样（准确至0.01g）于50mL离心管中，加人10mL水和10mL乙晴，均质2min，加人1.5g氯化钠（3.2.4）和2g无水硫酸镁（3.2.5），涡旋振荡器上剧烈振荡2min，4000r/min离心3min，上清液转移至25mL容量瓶中。残渣用10mL乙睛重复提取一次，合并上清液，用乙睛定容至刻度，待净化。
3.5.2净化
猪肉、猪肝、牛肾、牛奶
准确移取5.0mL提取液至10mL试管中，加入2mL乙睛饱和的正已烷（3.2.2）.振荡1min，4000r/min离心1min，弃去正已烷层。加人300mg无水硫酸镁、250mgPSA（3.2.6）和100mgCls（3.2.7），剧烈振荡1min，4000r/min离心3min，取2.5mL上清液在低于50℃下氮气吹至近干，用0.1%甲酸-乙睛溶液（3.2.10）溶解并定容至1mL，0.22μm滤膜（3.2.14）过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。
3.5.2.2葱、大蒜、菠菜、豌豆、番茄、马铃薯、苹果、柑橘准确移取5.0mL提取液至10mL试管中，加人300mg无水硫酸镁、100mgPSA、200mgCis，剧2
TTKANYKAa
SN/T2917—2011
烈振荡1min，4000r/min离心3min，若已经无色澄清，则无需再加入石墨炭吸附剂，若仍有明显色泽，则需要加人50mg石墨炭吸附剂（3.2.8），剧烈振荡1min，4000r/min离心2min，取0.5mL上清液用0.1%甲酸溶液定容至1mL，0.22μm滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。3.5.3测定
液相色谱条件
色谱柱：C18，150mmX2.0mm（内径），5μm，或性能相当者。3.5.3.1.1
3.5.3.1.2
柱温：室温。
3.5.3.1.3流动相：0.1%甲酸-乙腈（6+4，体积比）。3.5.3.1.4
流速：0.25mL/min。
3.5.3.1.5进样量：10μL。
3.5.3.2质谱条件
3.5.3.2.1离子源：电喷雾离子源。3.5.3.2.2扫描方式：正离子扫描。3.5.3.2.3检测方式：多反应监测模式（MRM）3.5.3.2.4雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集镁电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见表A.1。
3.5.3.2.5监测离子对、定量离子对见表1。表1烯酰吗啉的监测离子对和定量离子对被测物
烯酰吗啉
液相色谱-质谱/质谱测定
3.5.3.3.1定性测定
监测离子对（m/z)
388.0/301.1
388.0/165.2
定量离子对（m/2)
388.0/301.1
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和基质标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品保留时间相差不超过士5%，定性离子对的相对丰度（是用相对于最强离子丰度的强度百分比表示)与浓度相当基质标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%
允许的最大偏差/%
3.5.3.3.2定量测定
>20~50
>10～20
根据试样中被测物的含量情况，选取响应值相近的基质标准工作液一起进行色谱分析。基质标准3
TIKANYKACA
SN/T 2917—2011
工作液和待测液中烯酰吗啉的响应值应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下烯酰吗啉两种异构体的参考保留时间分别为8.6min、9.5min。采用两种异构体峰面积的加和进行定量。烯酰吗啉的标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见图B.1。3.5.4空自试验
除不加试样外，均按上述步骤进行3.6结果计算
样品中烯酰吗啉残留量按式(1)计算X=cx
式中：
试样中被测组分含量（以两种异构体峰面积之和计），单位为微克每千克（μg/kg)；从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；最终定容体积试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值。
测定低限和回收率
测定低限
对于蔬菜和水果，本方法的测定低限为10.0ug/kg；对于动物肌肉、肝脏、肾脏和奶，本方法的测定低限为2.0μg/kg。回收率
不同基质在不同添加水平下的回收率见表3和表4。表3蔬菜和水果在不同添加水平下的回收率样
马铃薯
10 μg/kg
75.2~88.1
86.1~95.4
73.8~81.6
85.6~95.7
85.2~93.2
85.9~96.6
90.8~97.7
83.8~100.4
添加水平
50μg/kg
77.6~87.8
84.2~94.0
73.8~83.4
85.0~96.6
90.0-~98.6
90.2~99.0
89.6~99.2
90.8~98.0
KANYKACa-
100μg/kg
75.6~83.6
83.6~94.3
73.6~82.6
84.6~95.3
87.6~98.1
87.3~96.2
86.2~98.3
90.0~98.9
.（1)
第二法
表4动物肌肉、肝脏、肾脏、奶在不同添加水平下的回收率添加水平
2 μg/kg
80.0~97.5
79.5~94.5
82.5~95.5
气相色谱-质谱法
4.1方法提要
10μg/kg
83.8~95.2
83.1~94.0
SN/T 2917—2011
50μg/kg
85.2~96.0
88.6~97.2
试样中的烯酰吗啉经丙酮-正已烷-乙酸乙酯提取，经活性炭柱/氟罗里硅土柱固相萃取净化，气相色谱-负化学离子源质谱法测定与确证，外标法定量。4.2试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。4.2.1
乙酸乙酯：农残级。
正已烷：农残级。
丙酮：农残级。
甲苯：农残级。
乙睛：农残级。
甲苯-乙睛（1十3，体积比）。
丙酮-正已烷（1+1.体积比）。
提取液：移取100mL乙酸乙酯加人900mL丙酮-正已烷（4.2.7)中，混匀后备用。氟罗里硅土固相萃取柱：Florisil,1o00mg.6mL，或相当者。石墨化炭固相萃取柱：ENVI-Carb.500mg.6mL，或相当者。中性氧化铝固相萃取柱：N-Al,O3，1000mg.6mL，或相当者。烯酰吗啉标准物质（dimethomorph，C2H22CINO,，CAS编号：110488-70-5）：纯度大于等于98.0%。
4.2.13烯酰吗啉标准储备溶液：准确称取适量的烯酰吗啉标准品，用丙酮稀释配制成100μg/mL的标准储备液，4℃下保存。
4.2.14烯酰吗啉标准工作液：根据需要用丙酮稀释成适当浓度的标准工作溶液，临用时配制微孔滤膜：0.22um，有机相
4.3仪器和设备
气相色谱-质谱仪：配有负化学离子源（NCI）。4.3.2组织捣碎机。
4.3.3粉碎机。
4.3.4均质器。
氮吹仪。
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4.3.6旋转蒸发仪。
4.4试样制备与保存
4.4.1蔬菜或水果类
取代表性样品500g，或去壳、去籽、去皮、去茎、去根、去冠（不可用水洗涤），将其可食用部分切碎后，依次用捣碎机将样品加工成浆状。混匀，均分成两份作为试样，分装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于一18℃以下保存。
4.4.2茶叶、坚果及粮谷类
取代表性样品500g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛。混匀，分装人洁净的容器内，密闭并标明标记，于4℃以下保存。
4.4.3肉及肉制品
取代表性样品500g，将其切碎后，依次用捣碎机将样品加工成浆状，混勾，分装人洁净的盛样袋内，密封并标明标记，于一18℃以下保存4.4.4蜂产品
取有代表性样品500g，对无结晶的蜂蜜样品将其搅拌均匀；对有结晶析出的蜂蜜样品，在密闭情况下，将样品瓶置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，在融化时应注意防止水分挥发。制备好的试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记，室温保存在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。4.5测定步骤
4.5.1提取
对于含水量较低的或油脂含量较高的样品（坚果、肉及肉制品、蜂产品等），准确称取5g均匀试样（精确至0.01g）。对于含水量较高的试样（蔬菜、水果等），准确称取10g均匀试样（精确至0.01g）。对于脱水蔬菜、茶叶和蜂蜜样品，准确称取5g均匀试样（精确至0.01g），并加人10mL水，混匀，浸泡半小时或溶解。
将称取的样品置于250mL的具塞锥形瓶中，加人50mL提取溶剂（4.2.8），放置于振荡器中振荡60min.过滤于150mL浓缩瓶中。再加人30mL提取溶剂重复提取一次，合并提取液，60℃下氮吹仪浓缩至干。用2mL甲苯-乙睛（1十3）溶解，待净化4.5.2净化
4.5.2.1蔬菜、茶叶等植源性食品样品自上而下将石墨化炭固相萃取柱（4.2.10）与氟罗里硅土固相萃取柱（4.2.9）串联连接，使用前用10mL甲苯-乙睛（4.2.6）预淋洗，弃去流出液。将样品提取液倾人上述串联柱中，用20mL甲苯-乙睛进行洗脱。收集洗脱液于250mL浓缩瓶中，于40℃水浴中浓缩至近干。用丙酮溶解并定容至1.0mL.供气相色谱-质谱测定和确证。4.5.2.2肉类等动源性产品
自上而下将中性氧化铝固相萃取柱（4.2.11)与氟罗里硅土固相萃取柱串联连接，使用前用10mL6
TKANYKAa
SN/T2917-—2011
甲苯-乙睛预淋洗，弃去流出液。将样品提取液倾入柱中，用20mL甲苯-乙睛进行洗脱。收集全部洗脱液手250mL浓缩瓶中，于40℃水浴中浓缩至近十。用内酮溶解并定容至1.0mL，供气相色谱-质谱测定和确证。
4.5.3测定
4.5.3.1气相色谱-质谱条件
色谱柱：石英弹性毛细管柱DB-5ms.30mX0.25mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者。4.5.3.1.1
色谱柱温度：100~℃20℃/m280℃(2min)。4.5.3.1.2
进样口温度：280℃。
4.5.3.1.3
色谱-质谱接口温度：250℃。
4.5.3.1.4
4.5.3.1.5
4.5.3.1.6
4.5.3.1.7
载气：氮气，纯度大于等于99.999%；流速，1.0mL/min。进样量：1μL
进样方式：不分流进样1.5min后开阀。电离方式：NCI。
4.5.3.1.8
电离能量：125eV。
4.5.3.1.9
离子源温度：150℃。
4.5.3.1.10
4.5.3.1.11
4.5.3.1.12
4.5.3.1.13
4.5.3.1.14
四极杆温度：106℃
反应气：甲烷，纯度大于等于99.99%，反应气流速：2mL/min。检测方式：选择离子监测方式（SIM）。选择监测离子（m/z）：定量离子387；定性离子388.389，390。5溶剂延迟时间：10min。
4.5.3.1.15
4.5.3.2气相色谱-质谱检测及确证根据样液中烯酰吗啉含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，对标准工作液和样液等体积参插进样。标准工作溶液和样液中烯酰吗啉的相应值均应在仪器的线性范围内。如果样液与标准工作溶液的选择离子色谱图中，在不大于士5%保留时间处有色谱峰出现·并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选离子均出现，所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在充许范围内（充许范围见表5）。在4.5.3.1条件下，烯酰吗琳的Z体和E体保留时间是18.31min和19.16min，其监测离子（m/z)丰度比为387：388：389：390=100：64：70：58对其进行确证；根据定量离子mz387对其进行外标法定量。4.5.3.1条件下，烯酰吗啉标准物的气相色谱质谱选择离子流色谱图和全扫描质谱图参见图C.1和图D.1。表5使用定性气相色谱-质谱时相对离子丰度最大充许误差相对丰度（基峰)/%
GC-MS/NCI相对离子
丰度最大允许误差/%
4.5.4空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。6结果计算和表述
>20~50
用色谱数据处理机或按式（2）计算试样中烯酰吗啉残留量：TTKANYKAa
>10~20
SN/T 2917—2011
式中：
试样中烯酰吗啉残留量，单位为微克每千克（pg/kg）；样液中烯酰吗啉定量离子的峰面积；标准工作液中烯酰吗啉的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）；样液最后定容体积，单位为毫升（mL)；标准工作液中烯酰吗啉定量离子的峰面积；最终样液所代表的试样质量，单位为克（g）。测定低限、回收率
测定低限
..............
本方法的测定低限荷兰豆、白菜、萝卜、鲜山葵等为2μg/kg，干姜、普洱茶、芸豆、猪肉、大米、核桃仁、蜂蜜等为4μg/kg。
回收率
见表6、表7。
6食品中烯酰吗嘛的回收率数据（一）样品名称
荷兰豆
鲜山葵
样品名称
脱水洋葱
核桃仁
普洱茶
2 μg/kg
85.2~105.6
63.4~89.4
67.4~78.8
71.6~83.0
添加水平
10 μg/kg
78.8~95.7
75.6~93.7
7食品中烯酰吗啉的回收率数据（二）添加水平
4μg/kg
94.6109.2
65.4~81.8
90.2~102.6
85.4~104.8
60.6~84.2
93.4~108.2
10ug/kg
67.2~84.2
87.6~114.8
66.8~88.4
72.4~94.3
74.5~91.4
62.6~81.6
79.0~91,4
72.4~94.3
TKANYKAa
20 pug/kg
77.3~108.0
68.2~75.0
81.1~94.1
89.1115.2
20μg/kg
62.8~74.9
89.5~115.6
84.4~99.0
72.6~84.3
73.6~81.4
71.4~89.4
66.4~76.1
72.6~84.2
附录A
（资料性附录）
液相色谱-质谱/质谱法参考质谱参数表A.1
液相色谱-质谱/质谱法参考质谱参数质谱参bzxz.net
雾化气/MPa
气帘气/MPa
辅助加热气/MPa
碰撞气
辅助加热气温度/℃
喷雾电压/V
解簇电压/V
碰撞能/eV
SN/T2917—2011
27(m/z388.0/301.1)
42(m/z388.0/165.2)
非商业性声明：附录A所列参数是用API4000质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并1
不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。9
SN/T 2917—2011
附录B
（资料性附录）
烯酰吗啉标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图（液相色谱-质谱/质谱法）100%
烯酰吗嗽
388. 0 301.
388. (0 - 165. 2
烯酰吗啉标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图13
14 /min
14 t/min
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