【行业标准】 囊(尾蚴)虫病检疫技术规范

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2864—2011
囊（尾）虫病检疫技术规范
Quarantineprotocolforcysticercosis2011-05-31发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-12-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009和SN/T12252007给出的规则起草，SN/T2864—2011
本标准参照国际动物卫生组织（OIE）公布的《ManualofDiagnosticTestsandVaccinesforTerres-trialAnimals》（2008版）中2.9.5章Cysticercosis，结合我国囊（尾坳）虫病检疫工作实践编写。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国河南出入境检验检疫局、中华人民共和国重庆出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局本标准主要起草人：张巨洲、张子宏、徐超、李应国、郑腾、李国全、苗丽、李辑、杨向莹、杨娜、刘生峰。1
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1范围
囊（尾坳)虫病检疫技术规范
SN/T2864—2011
本标准规定了动物囊（尾）虫病宰后检疫，病原检查、鉴定和囊（尾坳）虫病抗体检测（ELISA）方法。
本标准适用于动物（猪、牛、羊）的囊（尾蝴）虫病检疫。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18544猪囊尾蝴病诊断技术
NY/T467畜禽屠宰卫生检疫规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
囊尾蝴Cysticercus
虫（tapewvorm)的中终期幼虫称为囊尾。参见附录A。3.2
猪囊尾蝴Cysticercuscellulosae猪囊尾蝴，是猪带终虫（Taenia solium）的中期幼虫。成熟的猪囊尾蝴，外形椭圆，呈白色半透明的囊泡状，约黄豆，长径6mm10mm，短径约5mm，囊内充满液体，囊壁为一层薄膜，壁上有一个圆形黍粒大的乳白色小结，其内有一内翻的头节，头节上有四个圆形的吸盘，前端顶突上有许多个角质小钩.分为两圈排列。
牛囊尾Cysticercusbovis
牛囊尾蚜（Cysticercusbouis），是牛带综虫（Taeniasaginata）的中期幼虫。外形与猪囊尾坳相似，半透明椭圆形囊泡，囊泡白色，长约7.5mm～9mm，宽3mm～6mm。内有一个乳白色头节，头节上有四个吸盘，但无顶突和钩。3.4
羊囊尾蝴Cysticercusovis
羊囊尾蝴（Cysticercusouis），是羊带缘虫（Taeniaouis）的中絲期幼虫。呈囊泡状，豌豆至鸡蛋大小，内含透明液体，囊壁上附有一个乳白色且具有细长颈部的头节。4动物宰后检疫
4.1囊尾坳在宿主体内的嗜生部位4.1.1猪囊尾蜘：猪囊尾蚜主要嗜生部位为咬肌、深腰肌和隔肌，其他可检部位为心肌、肩脚外侧肌和TYKAONTKACa
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股部内侧肌等
4.1.2牛囊尾蚜：牛囊尾蝴的主要嗜生部位为咬肌、舌肌、深腰肌和隔肌。小于6周或小于32kg特牛通常不检查，
4.1.3羊囊尾蝴：主要嗜生部位为膈肌、心肌、肝脏。羊在肠系膜和胃肠浆膜等腹腔浆膜上可见大小不一的成熟囊尾蚜囊泡。严重时，一只羊可见儿十甚至上百个囊泡，成串悬挂在腹腔浆膜上，并可见局部腹膜炎。
4.2动物宰后检查程序
4.2.1对切开的畜体肌肉表面和内脏器官进行观察4.2.2检查咬肌、两侧腰肌、隔肌和股内侧肌。必要时剖检肩肿外侧肌。每侧需作一个或两个切口。4.2.3观察、触摸舌部，必要时纵向切开舌根检查。4.2.4心包膜和心脏检查。心脏先检查外部，沿心间隔切开后反转检查内部。4.2.5去除腹膜后，观察横隔膜，必要时切开检查。4.2.6食道和肝脏的观察。囊尾蚜在肝内移行时，破坏肝组织，形成孔道，在肝被膜下和实质内，可见直径1mm～2mm的弯曲索状病灶，初期呈暗红色，后期转为黄褐色。肝脏表面可见数量不等、大小不一并被包膜包裹的虫体，
4.2.7根据屠宰动物的种类，按照囊尾蝴在不同宿主体内的嗜生部位，重点检查。如果发现畜体有可疑囊泡，该批次畜体则需取样进行实验室检测。4.3结果判定
如果猪、牛、羊酮体及脏器内发现有疑似囊（尾坳）虫结节者，可进行初判并采集样品送实验室确诊。5实验室诊断技术
5.1样品处理与病原鉴定
5.1.1样品采集与处理
5.1.1.1样品采集
采集猪、牛、羊的咬肌、舌肌、内腰肌、隔肌、肋间肌、肩脚肌等，亦可采集脑、心、肝、肺等组织。5.1.1.2样品处理
将有疑似囊尾坳的组织样品，用手术刀和镊子剥离疑似囊尾蝴，生理盐水洗净后滤纸吸干。5.1.2病原鉴定
5.1.2.1压片制备
用剪刀剪开囊壁，取出完整的头节，再以滤纸吸干囊液后，将其置于两张载玻片之间，于两张载玻片间加入1滴2滴生理盐水，压片后置于显微镜下镜检。5.1.2.2镜检
以低倍（物镜8倍、目镜5倍）观察囊尾蚜头节的完整性。5.1.2.3结果判定
成熟的猪囊尾坳为椭圆形，（6mm10mm）×5mm，半透明的囊壁内充满液体，上有一个黍粒大2
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小的白色小结节即为头节和颈节。脑内寄生的则为圆球形。低倍镜检，可见到头节的顶部有顶突，顶突上有内外两圈排列整齐的小钩，顶突的稍下方有四个均等的圆盘状吸盘。牛囊尾蝴外形与猪囊尾相似，半透明椭圆形囊泡，囊泡白色，长约7.5mm~9mm，宽3mm~6mm。内有一个乳白色头节.头节上有四个吸盘，但无顶突和钩。羊囊尾蝴囊壁上附有一个乳白色且具有细长颈部的头节。具有以上特征者即可判定为囊（尾蝴)虫病。5.2酶联免疫吸附试验（ELISA）5.2.1器材
ELISA反应板、酶联免疫检测仪、加样器、洗板机、10cmX1cm普通滤纸条等。5.2.2试剂
猪囊尾蝴层析抗原、葡萄球菌A蛋白（SPA)辣根过氧化物酶（HRP)标记物（HRP-SPA）、猪囊尾蚓标准阳性全血滤纸片、猪囊尾蚜标准阴性全血滤纸片。囊（尾坳）虫病酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测动物囊（尾坳）虫抗体，因动物种类和定性或定量检验目的的不同，允许按照试剂的说明书操作并进行结果判定。5.2.3被检猪全血血片
将10cmX1cm普通滤纸条的一端标记被检猪号码，另一端吸取被检猪任何部位血液1滴～2滴。于室内阴干后，置于4℃冰箱内保存。5.2.4溶液配制
抗原包被液、稀释液、底物溶液、终止液等溶液配制方法见附录B。5.2.5操作方法
5.2.5.1抗原包被
首先用抗原包被液（见B.1）洗涤ELISA反应板各孔三次。用抗原包被液将抗原按使用说明书稀释至工作浓度。用加样器加工作浓度抗原至ELISA反应板各孔内，每孔100uL，加盖后置于室温11℃～29℃）过夜，
注：包被过夜的ELISA反应板加盖后置于冰箱冷冻室内（可保存6个月）。或将包被过夜的ELISA反应板按5.2.5.2方法洗涤后，晾于，装人塑料袋内密封置于4℃冰箱内（可保存1个月）。5.2.5.2洗涤
弃去包被过夜的ELISA反应板孔内的抗原包被液，每孔加入洗涤液（见B.2）300μL，浸泡3min后，奔去洗涤液，并用滤纸吸去残留的洗涤液和驱除孔内气泡，重新加入洗涤液，按同样方法共洗涤3次。
5.2.5.3血片的处理
将被检血片、标准阴性血片及标准阳性血片均剪成1cmX1cm大小，分别置于青霉素瓶内，每1cmX1cm血片加人稀释液（见B.2)300μL，浸泡20min，血片变白后即可5.2.5.4加样、处理
每份被检血片浸液加两孔，每孔100uL。标准阴性、标准阳性对照孔加相应血片浸液两孔，每孔3
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100μL。空白对照孔加稀释液两孔，每孔100uL。加样后加盖，室温（11℃～29℃）放置30min后洗涤。洗涤方法同5.2.5.2。加酶标SPA，HRP-SPA标准物按使用说明书以稀释液稀释至工作浓度。被检孔、标准阴性孔和标准阳性孔每孔加HRP-SPA标记物100μL。空白对照孔亦加100μL。加盖，室温（11℃~29℃）放置30min后洗涤。洗涤方法同5.2.5.2。每孔加现配制的底物溶液（见B.3）100μL，于室温（11℃～29℃）放置10min后，每孔加终止液（见B.4)50μL.以终止反应，5.2.6判定
在对照孔成立的前提下，即标准阳性孔呈深黄色，标准阴性孔呈无色或浅黄色，空白孔呈无色。判定结果。用酶标仪以490 nm波长测定。以空白对照孔调零，测定被检孔透光(OD)值。当OD≤0.22，判定为ELISA法阴性（一）；当OD值≥0.26.判定为ELISA法阳性（+）；当0.23≤OD值≤0.25，判定为ELISA法结果疑似（土），疑似者用该份血清复检一次，仍为疑似则判为阳性。
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A.1囊（尾蝴）虫病简介
附录A
（资料性附录）
囊（尾蝴）虫病概述
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囊（尾坳）虫病（cysticercosis）是猪、牛、羊等几十种哺乳动物和人的常见人畜共患寄生虫病。其病原为扁形动物门终虫纲（ClassCestoda）的各种终虫（cestode）的中絲期幼虫囊尾（Cysticercus）。该病在世界范围内均有发生·但主要在非洲、拉丁美洲、高加索地区、南/中亚、东地中海国家和许多欧洲国家。在国内，常见的是人畜共患的猪囊（尾蝴）虫病和牛囊（尾蚜）虫病。多数囊尾蝴不引起或仅仅引起轻微的病变。但个别囊尾蛎能引起严重症状。囊（尾哟）虫寄生在人和家畜的肌肉组织和眼部则会引起皮下或肌肉囊（尾蜘）虫病和眼囊（尾）虫病。如：猪囊尾蝴可能导致人的脑囊（尾蝴）虫病，严重时导致视觉损伤、神经失调，甚至有致死风险。销毁感染囊尾虫病动物的]体及内脏会导致巨额的经济损失。
囊尾蝴是终虫的中终期幼虫。成年絲虫背腹扁平，长度从20cm～50cm到几米。头节上有四个吸盘和可能有一个顶突。顶突周围常有两圈小钩。小钩的长度和数量与品种特征有关。头节后是颈节，其后是由未成熟节片、成熟节片和最后的孕节组成。囊尾蚜由一个充满液体的囊球组成，头节的构造和成虫一样。囊尾坳在死后和肉类检查中变得粗天可见，但是轻微感染常被漏检。中枢神经感染可通过成像技术诊断。
A.2囊（尾蝴)虫病临床症状
A.2.1猪囊（尾蜘）虫病
一般无明显症状，严重感染的猪营养不良、生长受阻、贫血和肌肉水肿等。由于病猪不同部位的肌肉水肿，导致两肩显著外展，或臀部异常肥胖宽阔，或头部呈天胖脸形或前胸、后驱及四肢异常肥大，体中部窄细。整个猪体从背面观呈哑铃状或葫芦形，前面看呈狮子头形。病猪走路前肢僵硬，后肢不灵活，左右摇摆，似“酵酒状”，不爱活动·反应迟钝。严重感染时器官可出现相应的症状，如呼吸困难，声音哑与吞咽困难，视力消失及一些神经症状，有时产生急性脑炎而突然死亡。外观患猪的舌底、舌的边缘和舌的系带部有突出的白色囊泡，触摸猪的舌底和舌的系带部可感觉到游离性的米粒大小的硬结。生前诊断比较困难，只有当舌部浅表寄生时，触诊可发现结节，但阴性者不能排除感染A.2.2牛囊（尾蜘）虫病
除个别感染特别严重的外，一般均无明显症状。特牛则常有明显的症状。盲眼、肌肉僵硬，肩部肌肉水肿，两肩增宽，臀部隆，咀嚼、吞咽困难，声音嘶哑，出现肌肉痉挛、震颤，行走不稳等疑似症状。A.2.3羊囊（尾蝴）虫病
成年羊除个别特别严重的感染外，一般均无明显症状。羔羊常表现为虚弱、消瘦、黄疽；如有急性腹膜炎时，体温升高并有腹水，约2周后可转变成慢性病程。羊囊尾蝴俗称水铃铛，呈囊泡状，豌豆至鸡蛋大小，内含透明液体，囊壁上附有一个乳白色且具有细长领部的头节。主要侵害绵羊（2月龄～12月龄的羊感染率最高）。
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A.3常见终虫的幼虫示意图
裂头始
原居嫩
常见终虫的幼虫示意图
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峦尾蝴
多头蝴
辣球螂
B.1抗原包被液（碳酸盐缓冲液，pH9.6）A：碳酸钠（NazCO：）
蒸馏水
B：碳酸氢钠（NaHCO，）
蒸馏水
附录B
（规范性附录）
溶液配制
A，B两液混合即为抗原包被液，测pH（现用现配）。2稀释液（吐温-磷酸盐缓冲液，pH7.4）B.2
A：磷酸氢二钠（NazHPO·12H,O)蒸馏水
B：磷酸二氢钠(NaH,PO·2H,O)
蒸馏水
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A，B两液混合后，加氯化钠（NaCI)19g和少许蒸馏水，溶解后加蒸馏水至2500mL，然后再加入吐温-20（Tween-20)1.25mL即为稀释液，测pH（现用现配）。该试剂既是被检猪抗体的稀释液，又是洗涤液。B.3底物溶液（磷酸盐-柠檬酸缓冲液·pH5.0）A：柠蒙酸（无水）
蒸馏水
B：磷酸氢二钠(Na,HPO4·12HO）蒸馏水
取A液24.3mL，B液25.7mL和蒸馏水50mL，混合后加邻苯二胺0.04g，避光溶解后，加30%过氧化氢（H,O2)0.45mL，混匀后立即使用。B.4终止液[2mol/L硫酸（H,SO）A：蒸馏水
B：浓硫酸（96%~98%）
B缓慢加入A中，并用玻璃棒不断搅拌，混勾即可。TTKANTKAca
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囊（尾蝴）虫病检疫技术规范
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本880×12301/16
2011年11月第一版
印张0.75
字数15千字
2011年11月第一次印刷
印数1—1600
8定价16.00元
书号：155066·2-22618
TKANTKAca-
110982/
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