【国家标准】 食品添加剂 酸性红

中华人民共和国国家标准
GB283092012
食品安全国家标准
食品添加剂
2012-04-25发布
酸性红偶氮玉红）
2012-06-25实施
中华人民共和国卫生部
1范围
食品安全国家标准
食品添加剂
酸性红 （偶氮玉红）
GB28309—2012
本标准适用于1-萘胺-4-磺酸钠经重氮化后与1-萘酚-4-磺酸钠偶合而制得的食品添加剂酸性红（偶氮玉红)。
2化学名称、结构式、分子式和相对分子质量2.1化学名称
1-羟基-2-（4-偶氮萘磺酸）-4-萘磺酸二钠盐2.2结构式
2.3分子式
C20Hi2N2Na20-S2
2.4相对分子质量
502.43（按2007年国际相对原子质量）3
技术要求
感官要求：应符合表1的规定。
红褐色至暗红褐色
粉末或颗粒
理化指标：应符合表2的规定。
表1感官要求
检验方法
取适量样品置于清清、干燥的自瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态
酸性红（偶氮玉红）含量，w/%
干燥减量、氯化物（以NaCI计））及硫酸盐
（以Na2S04计）总量，w/%
水不溶物,w/%
副染料，w/%
未反应原料总和,w/%
未磺化芳族伯胺（以苯胺计），w/%总砷（以As计)/（mg/kg）
铅（Pb）/（mg/kg）
理化指标
GB28309—2012
检验方法
附录A中A.3
附录A中A.4
附录A中A.5
附录A中A.6
附录A中A.7
附录A中A.8
GB/T5009.11
GB5009.12
A.1一般规定
附录A
检验方法
GB28309—2012
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682一2008规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液，A.2鉴别试验
A.2.1试剂和材料
A.2.1.1硫酸。
A.2.1.2乙酸铵溶液：1.5g/L。
A.2.2仪器和设备
A.2.2.1分光光度计。
A.2.2.2比色血：10mm。
A.2.3鉴别方法
A.2.3.1称取约0.1g试样，精确至0.01g，溶于100mL水中，溶液为澄清红色A.2.3.2称取约0.1g试样，精确至0.01g，加10mL硫酸，溶液显红色，取此溶液2～3滴于5mL水中，溶液显红色。
A.2.3.3称取约0.1g试样，精确至0.01g，溶于100mL乙酸铵溶液中，取此溶液1mL，加乙酸铵溶液至100mL，该溶液的最大吸收波长为516nm+2nmA.3酸性红（偶氮玉红)含量的测定A.3.1三氯化钛滴定法（仲裁法）A.3.1.1方法提要
在酸性介质中，酸性红（偶氮玉红）中的偶氮基被三氯化钛还原分解，按三氯化钛标准滴定溶液的消耗量，计算酸性红(偶氮玉红)的含量。A.3.1.2试剂和材料
A.3.1.2.1柠檬酸三钠。
A.3.1.2.2三氯化钛标准滴定溶液：c(TiCl3)=0.1mol/L(现配现用，配制方法见附录B)。A.3.1.2.3
二氧化碳。
A.3.1.3仪器和设备
见图A.1。
锥形瓶（500mL)：
棕色滴定管(50mL)：
包黑纸的下口玻璃瓶（2000mL）：装有100g/L碳酸铵溶液和100g/L硫酸亚铁溶液等量混合液的容器(5000mL)；活塞：
空瓶：
装有水的洗气瓶。
图A.1三氯化钛滴定法的装置图
A.3.1.4分析步骤
GB28309—2012
称取约0.5g试样，精确至0.0001g，置于500mL锥形瓶中，加入50mL新煮沸并冷却至室温的水，溶解，加入15g柠檬酸三钠和150mL新煮沸并冷却至室温的水，振荡溶解后，按图A.1装好仪器，在液面下通入二氧化碳的同时，加热至沸，并用三氯化钛标准滴定溶液滴定到其固有颜色消失为终点。A.3.1.5结果计算
酸性红(偶氮玉红)含量以质量分数W计，数值以%表示，按公式(A.1)计算：w = V/1000M /4×100%
式中：
三氯化钛标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升（mol/L）；滴定试样耗用的三氯化钛标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升（mL）；1000
体积换算因子，
酸性红(偶氮玉红)的摩尔质量数值，单位为克每摩尔（g/mol）[M（CoHi2N2Na2O,S2）=502.43]:
浓度换算因子：
-试样质量的数值，单位为克（g）。(A.1)
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于1.0%。
A.3.2分光光度比色法
A.3.2.1方法提要
将试样与已知含量的酸性红(偶氮玉红)标准品分别用水溶解，用乙酸铵溶液稀释定容后，在最大吸收4
波长处，分别测其吸光度值，然后计算其含量。A.3.2.2试剂和材料
A.3.2.2.1乙酸铵溶液：1.5g/L。A.3.2.2.2酸性红（偶氮玉红)标准品：≥85.0%（质量分数，按A.3.1测定）。A.3.2.3仪器和设备
A.3.2.3.1分光光度计。
A.3.2.3.2比色皿：10mm。
A.3.2.4分析步骤
A.3.2.4.1酸性红(偶氮玉红)标准溶液的制备GB28309—2012
称取约0.25g酸性红（偶氮玉红）标准品，精确到0.0001g，溶于适量水中，移入1000mL容量瓶中，加水稀释并定容至刻度，摇匀。吸取10mL，移入500mL容量瓶中，加乙酸铵溶液稀释并定容至刻度，摇匀，备用。
A.3.2.4.2酸性红（偶氮玉红)试样溶液的制备称量与操作方法同A.3.2.4.1标准溶液的配制。A.3.2.4.3测定
取适量酸性红(偶氮玉红)标准溶液和酸性红(偶氮玉红)试样溶液，分别置于10mm比色皿中，同在最大吸收波长（516nm±2nm）处用分光光度计测定各自的吸光度值，用乙酸铵溶液作参比液。A.3.2.5结果计算
酸性红(偶氮玉红)含量以质量分数W2计，数值以%表示，按公式(A.2)计算：W2
式中：
酸性红（偶氮玉红）试样溶液的吸光度值：酸性红（偶氮玉红)标准品质量的数值，单位为克（g）：-酸性红（偶氮玉红）标准溶液的吸光度值：Ao
试样质量的数值，单位为克（g）：m
酸性红(偶氮玉红)标准品含量的数值，%。（A.2）
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于1.0%。
A.4干燥减量、氯化物(以NaCI计)及硫酸盐（以Na2SO4计)总量的测定A.4.1干燥减量的测定
A.4.1.1分析步骤
称取约2g试样，精确至0.001g，置于已在135℃±2℃恒温干燥箱恒量的称量瓶中，在135℃土2℃恒温干燥箱中烘至恒量。
A.4.1.2结果计算
干燥减量以质量分数W3计，数值以%表示，按公式（A.3）计算：W
式中：
mz-m=x100%
试样干燥前质量的数值，单位为克（g）；·（A.3
m3—试样干燥至恒量后质量的数值，单位为克（g）。GB283092012
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.2%。
A.4.2氯化物（以NaCI计)的测定A.4.2.1试剂和材料
A.4.2.1.1硝基苯。
A.4.2.1.2活性炭：767针型。
A.4.2.1.3硝酸溶液：1+1。
A.4.2.1.4硝酸银溶液：c(AgNO3)-0.1mol/L。A.4.2.1.5硫酸铁铵溶液：称取约14g硫酸铁铵，溶于100mL水中，过滤，加10mL硝酸，贮存于棕色瓶中。
A.4.2.1.6硫氰酸铵标准滴定溶液：c(NH4CNS)=0.1mol/L。A.4.2.2分析步骤
A.4.2.2.1试样溶液的制备
称取约2g试样，精确至0.001g，溶于150mL水中，加约15g活性炭，温和煮沸2min～3min，加入1mL硝酸溶液，不断摇动均匀，放置30min(其间不时摇动)。用干燥滤纸过滤。如滤液有色，则再加5g活性炭，不时摇动下放置1h，再用干燥滤纸过滤（如仍有色则更换活性炭重复操作至滤液无色）。每次以10mL水洗活性炭三次，滤液合并移至200mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。用于氯化物和硫酸盐含量的测定，A.4.2.2.2测定
移取50mL试样溶液，置于500mL锥形瓶中，加2mL硝酸溶液和10mL硝酸银溶液（氯化物含量多时要多加些)及5mL硝基苯，剧烈摇动至氯化银凝结，加入1mL硫酸铁铵溶液，用硫氰酸铵标准滴定溶液滴定过量的硝酸银到终点并保持1min，同时以同样方法做一空白试验。A.4.2.3结果计算
氯化物(以NaCI计)含量以质量分数w4计，数值以%表示，按公式（A.4)计算：.-0M0..
m4（50/200）
式中：
硫氰酸铵标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升（mol/L）；滴定空白溶液耗用硫氰酸铵标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升（mL）：滴定试样溶液耗用硫氰酸铵标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升（mL）；体积换算因子：
氯化钠的摩尔质量数值，单位为克每摩尔（g/mol）[M（NaCI）=58.4]：试样质量的数值，单位为克（g）；稀释因子。
50/200
（A.4）
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.3%。
A.4.3硫酸盐（以Na2S04计）的测定A.4.3.1试剂和材料
A.4.3.1.1氢氧化钠溶液：0.2g/L。A.4.3.1.2盐酸溶液：1+99。
A.4.3.1.3氯化标准滴定溶液：c(1/2BaCl2)-0.1mol/L（配制方法见附录C)。A.4.3.1.4酚酞指示液：10g/L。A.4.3.1.5玫瑰红酸钠指示液：称取0.1g攻瑰红酸钠，溶于10mL水中(现用现配)。6
A.4.3.2分析步骤
GB28309—2012
吸取25mL试样溶液（A.4.2.2.1），置于250mL锥形瓶中，加1滴酚酰指示液，滴加氢氧化钠溶液呈粉红色，然后滴加盐酸溶液至粉红色消失，摇匀，溶解后在不断摇动下用氯化钡标准滴定溶液滴定，以玫瑰红酸钠指示液作外指示液，反应液与指示液在滤纸上交汇处呈现玫瑰红色斑点并保持2min不褪色为终点。同时以相同方法做空白试验。
A.4.3.3结果计算
硫酸盐（以Na2SO4计）含量以质量分数ws计，数值以%表示，按公式（A.5)计算：c2[(V2-V)/1000](M,/2)
×100%
ms(25/200)
式中：
25/200
氯化锁标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升（mol/L）：滴定试样溶液耗用氯化锁标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升（mL）；滴定空白溶液耗用氯化钡标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升（mL）；体积换算因子；
硫酸钠的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）[M2（Na2SO4）=142.04]：浓度换算因子：
试样质量的数值，单位为克（g）：稀释因子。
（A.5）
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.2%。
A.4.4干燥减量、氯化物（以NaCI计)及硫酸盐（以Na2SO.计）总量的结果计算干燥减量、氯化物(以NaCI计)及硫酸盐(以NazSO4计)的总量以质量分数w计，数值以%表示，按公式(A.6)计算：
W= w,+w4 +ws
式中：
干燥减量，%：
氯化物(以NaCI计)含量，%：
硫酸盐(以Na2SO4计)含量，%
A.5水不溶物的测定
A.5.1仪器和设备
A.5.1.1玻璃砂芯埚：G4，孔径为5μm~15μm。A.5.1.2恒温干燥箱。
A.5.2分析步骤
（A.6）
称取约3g试样，精确至0.001g，置于500mL烧杯中，加入50℃～60℃热水250mL，使之溶解，用已在135℃土2℃烘至恒量的G4玻璃砂芯过滤，并用热水充分洗涤到洗涤液无色，在135℃土2℃恒温干燥箱中烘至恒量。
A.5.3结果计算
水不溶物以质量分数W计，数值以%表示，按公式（A.7）计算：w,=\sx100%..
式中：
干燥后水不溶物质量的数值，单位为克（g）：试样质量的数值，单位为克（g）。GB28309—2012
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留两位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.05%。下载标准就来标准下载网
6副染料的测定
A.6.1方法提要
用纸上层析法将各组分分离，洗脱，然后用分光光度法定量。A.6.2试剂和材料
A.6.2.1无水乙醇。
A.6.2.2正丁醇。
A.6.2.3丙酮溶液：1+1。
A.6.2.4氨水溶液：4+96。
碳酸氢钠溶液：4g/L。
A.6.3仪器和设备
A.6.3.1分光光度计。
层析滤纸：1号中速，150mm×250mm。A.6.3.2
A.6.3.3层析缸：Φ240mm×300mm。A.6.3.4
微量进样器：100μL。
纳氏比色管：50mL有玻璃磨口塞。玻璃砂芯漏斗：G3，孔径为15μm40μm。A.6.3.6
A.6.3.750mm比色皿。
A.6.3.810mm比色皿l。
A.6.4分析步骤
A.6.4.1纸上层析条件
A.6.4.1.1展开剂：正丁醇+无水乙醇+氨水溶液=6+2+3。A.6.4.1.2温度：20℃~25℃。
A.6.4.2试样溶液的制备
称取1g试样，精确至0.001g，置于烧杯中，加入适量水溶解后，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用，该试样溶液浓度为1%。A.6.4.3试样洗出液的制备
用微量进样器吸取100μ试样溶液，均勾地注在离滤纸底边25mm的一条基线上，成一直线，使其在滤纸上的宽度不超过5mm，长度为130mm，用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，滤纸底边浸入展开剂液面下10mm，待展开剂前沿线上升至150mm或直到副染料分离满意为止。取出层析滤纸，用冷风吹干。用空白滤纸在相同条件下展开，该空白滤纸必须与上述步骤展开用的滤纸在同一张滤纸上相邻部位裁取。
副染料纸上层析示意图见图A.2。8
副染料(1)
主染料
副染料(2)
图A.2副染料纸上层析示意图
GB28309—2012
将展开后取得的各个副染料和在空白滤纸上与各副染料相对应的部位的滤纸按同样大小剪下，并剪成约5mm×15mm的细条，分别置于50mL的纳氏比色管中，准确加入5mL丙酮溶液，摇动3min～5min后，再准确加入20mL碳酸氢钠溶液，充分摇动，然后分别在G3玻璃砂芯漏斗中自然过滤，滤液必须澄清，无悬浮物。分别得到各副染料和空白的洗出液。在各自副染料的最大吸收波长处，用50mm比色皿，将各副染料的洗出液在分光光度计上测定各自的吸光度值。在分光光度计上测定吸光度时，以5mL丙酮溶液和20mL碳酸氢钠溶液的混合液作参比液A.6.4.4标准溶液的制备
吸取2mL1%的试样溶液移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，该溶液为标准溶液。A.6.4.5标准洗出液的制备
用微量进样器吸取标准溶液100μL，均匀地点注在离滤纸底边25mm的一条基线上，用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，待展开剂前沿线上升40mm,取出用冷风吹干，剪下所有展开的染料部分，按A.6.4.3的方法进行萃取操作，得到标准洗出液。用10mm比色血在最大吸收波长处测吸光度值。
同时用空白滤纸在相同条件下展开，按相同方法操作后测洗出液的吸光度值。A.6.4.6结果计算
副染料的含量以质量分数Ws计，数值以%表示，按公式(A.8)计算：We
式中：
[(A, -b,)++(A, -b,)]/5
(A,-b,)(100/2)
各副染料洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值；各副染料对照空白洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值：标准洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值：标准对照空白洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值：折算成以10mm光径长度的比数：（A.8)
100/2一标准洗出液折算成1%试样溶液的比数；Ws
三试样中酸性红（偶氮玉红）的质量分数，%。GB28309—2012
实验结果以平行测定结果的算术平均值为准（保留一位小数）。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于0.2%。
A.7未反应原料总和的测定
A.7.1方法提要
采用反相液相色谱法，用外标法分别定量各未反应中间体，最后计算未反应中间体总和的质量分数。A.7.2试剂和材料
A.7.2.1乙睛。
A.7.2.2乙酸铵溶液：15g/L。
A.7.2.31-萘胺-4-磺酸钠。
A.7.2.41-萘酚-4-磺酸钠。
A.7.3仪器和设备
A.7.3.1液相色谱仪：输液泵-流量范围0.1mL/min~5.0mL/min，在此范围内其流量稳定性为土1%。A.7.3.2检测器：多波长紫外分光检测器或具有同等性能的紫外分光检测器。A.7.3.3色谱柱：长为150mm，内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C18，粒径5μm。A.7.3.4色谱工作站或积分仪。
A.7.3.5超声波发生器。
A.7.3.6定量环：20μL。
A.7.4参考色谱条件
A.7.4.1检测波长：254nm。
A.7.4.2柱温：30℃。
A.7.4.3流动相：A.乙酸铵溶液；B.乙睛。浓度梯度：35min线性浓度梯度从A：B（100：0）至A：B（60:40），再5min线性浓度梯度从A：B（60：40）至A：B（0：100）。A.7.4.4流量：1.0mL/min。
A.7.4.5进样量：20uL。
可根据仪器不同，选择最佳分析条件，流动相应摇匀后用超声波发生器进行脱气。A.7.5试样溶液的制备
称取约0.1g酸性红(偶氮玉红)试样，精确至0.0001g，加乙酸铵溶液溶解并定容至100mL。A.7.6标准溶液的制备
分别称取约0.01g，精确至0.0001g，置于真空干燥器中干燥24h后的1-萘胺-4-磺酸钠标准品和4-羟基-1-奈磺酸钠标准品。用乙酸铵溶液分别溶解并定容至100mL。然后分别吸取10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0mL上述各标准溶液，用乙酸铵溶液定容至100mL，制备成系列浓度的标准溶液。A.7.7分析步骤
在A.7.4参考色谱条件下，分别用微量注射器吸取试样溶液及系列浓度的标准溶液，注入并充满定量环进行色谱检测，待最后一个组分流出完毕，进行结果处理。测定各标准溶液物质的峰面积，分别绘制成各标准曲线。测定试样溶液中的1-萘胺-4-磺酸钠和1-萘酚-4-磺酸钠的峰面积，根据各标准曲线求出1-茶胺-4-磺酸钠的含量（wg）和1-萘酚-4-磺酸钠的含量（W1o）。（参考色谱图见附录D）。A.7.8结果计算
未反应原料总和以质量分数Wii计，数值以%表示，按公式（A.9）计算：Wii=Wg +Wio
式中：
（A.9）
Wg-—1-萘胺-4-磺酸钠的含量，%；Wio
1-萘酚-4-磺酸钠的含量，%。
A.8未磺化芳族伯胺（以苯胺计)的测定A.8.1方法提要
GB283092012
以乙酸乙酯萃取出试样中未磺化芳族伯胺成分,将萃取液和苯胺标准溶液分别经重氮化和偶合后再测定各自生成染料的吸光度予以比较与判别。A.8.2试剂和材料
A.8.2.1乙酸乙酯。
A.8.2.2盐酸溶液：1+10。
A.8.2.3盐酸溶液：1+3。
A.8.2.4溴化钾溶液：500g/L。
A.8.2.5碳酸钠溶液：200g/L。
A.8.2.6氢氧化钠溶液：40g/L。A.8.2.7氢氧化钠溶液：4g/L。
A.8.2.8R盐溶液：2-萘酚-3,6-二磺酸二钠盐溶液，浓度为20g/L。A.8.2.9亚硝酸钠溶液：3.52g/L。A.8.2.10苯胺标准溶液：0.1000g/L。用小烧杯称取0.5000g新蒸馏的苯胺，移至500mL容量瓶中，以15CmL盐酸溶液（A.8.2.3）分三次洗涤烧杯，并入500mL容量瓶中，用水稀释至刻度。移取25mL该溶液至另一250mL容量瓶中，用水定容。此溶液苯胺浓度为0.1000g/L。A.8.3仪器和设备
A.8.3.1分光光度计。
A.8.3.240mm比色血。
A.8.4试样萃取溶液的配制
称取约2.0g试样，精确至0.001g，置于150mL烧杯中，加100mL水和5mL氢氧化钠溶液（A.8.2.6），在温水浴中搅拌至完全溶解。将此溶液移入分液漏斗中，少量水洗净烧杯。每次以50mL乙酸乙酯萃取两次，合并萃取液。以10mL氢氧化钠溶液（A.8.2.7）洗涤乙酸乙酯萃取液，除去痕量色素。再每次以10mL盐酸溶液（A.8.2.3）对乙酸乙酯溶液反萃取三次。合并该盐酸萃取液，然后用水稀释至100mL，摇匀。此溶液为试样萃取溶液。
A.8.5标准对照溶液的制备
吸取2.0mL苯胺标准溶液至100mL容量瓶中，用盐酸溶液（A.8.2.2）稀释至刻度，混合均勾，此为标准对照溶液。
A.8.6重氮化偶合溶液的制备
吸取10mL试样萃取溶液，移入透明洁净的试管中，浸入盛有冰水混合物的烧杯内冷却10min。在试管中加入1mL溴化钾溶液及0.5mL亚硝酸钠溶液，稍用力摇匀后仍置于冰水浴中冷却10min，进行重氮化反应。另取一个25mL容量瓶移入1mLR盐溶液和10mL碳酸钠溶液。将上述试管中的苯胺重氮盐溶液加至盛有R盐溶液的容量瓶中，边加边略振摇容量瓶，用少许水洗净试管一并加入容量瓶中，再以水定容。充分混匀后在暗处放置15min。该溶液为试样重氮化偶合溶液。标准重氮化偶合溶液的制备，吸取10mL标准对照溶液，其余步骤同上。A.8.7参比溶液的制备
吸取10mL盐酸溶液（A.8.2.2）、10mL碳酸钠溶液及1mLR盐溶液于25mL容量瓶中，用水定容。该溶液为参比溶液。
A.8.8分析步骤
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