【行业标准】 柑桔溃疡病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国人境检验检疫行业标准SN/T 2622--2019
树精清病潮宠整定方法
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除非男有说明，在本源直中仪说剂的从的全沙冲流年和点谐兴惠大离了水战租纯度的水，3.1分离用试剂
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5实验空检验
症状观察
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5.1分离培券
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无菌条件下原下，取样品病安不处约：“T“：：小换纠织放人3.2I，无载水小用灭菌改胸棒搞：在室站下爱鸿5mn0n证.积中的非人小中宽点浮股将景浮液全照糖蛋白服培券基平板上划线，28培养?c：.炒蜜多瓶示性1盒动证，相精费物病菌菌落影态和尚体待征参站菌求A第A.旁
5、2 2欧瘤性测定
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5.3PCR捡测
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制样及检油方法见维策：
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6.2违过FCR成司接FI.JS）检期的，F或闲接ELISA整测结兴为F生，样品判定带有机遗疡辆菌否测不情有种活造疡病菌。
7样品保存及处理
检出带菌样品以及新分离菌株至少保存3个1一做好记录，以各复验，谈判和仲裁之用。其他不需保的样品及检测过程中产生的齿，委水等应集中创毁，用具应进行火活处理、群品及菌株保存期满做灵沂处理http
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非洲利摩零创贝、科特润用马烈息、鼠求斯真柔比克、留尼胜岛好得里格斯路，赛市东桑科业
北为湖：美国
中美洲及竭比腰英属维尔流群善南美浒：阿根廷、坡科记尔、巴西、压拉马拉，大产洲澳大米密罗尼间平联、世济新川：劳群岛布新儿内亚：A.4寄戏围传播欢式
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5推精清端病典塑症状
A，5.1片症状
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A.5.2核象症就
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根瑞病菌常用培养配方
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酵母法
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.1试剂及配制
1.1灭菌超纯木c
C.1.2PCR级御藏X01
3特所物50/
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C.1.5微化镁L23 rm/
C1.6Tmq 5 p-.
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、数审资隆靠
根菇溃源高检验摄序
C，.B制纤液：合0.3业梳酸销（aS的水溶渗。1电冰级净液T3×1在：1水中热人s就54名+谢胶275，20m.0.5m/0TA（8.0），使附释为1」作液。
：1.10味脂耕凝胶1.5141×T131:工炸液中加入2%的琼脂糖：融化前在每100ml.脂滴漆液市行5DN荧光染料（V）冷切余倒人辅人梳子的制胶槽中冷知凝固店点样泳。
1.11样品缓汁液bzxz.net
2制样
.2.1无症样器
症样（叶1020片，枝条实剪成：10mm大0100块）放人片讨式驱料袋心，灿人1m.制样液振荡滤约后，能于25C-23末！娠荡培券3h,吸取漫泡液2rml经8000g离心5min。弃宏上清液以燕管底部约200凌，振荡混约最！5作为待测模被.2.2典认病状惑可疑症状样品
将病斑7个~2个没人0.n1.制样整中1南习签报价后牢温没范15m，静肾上消液占接作劳待测模极办可按常期方法提收NA古分洲2.3纯培养菌株
州接种环挑取少量纯培养离供的简祥翼：节：1\（1/ml.），在离心管中用0.5ml制群激剂混约厨作待测极：
3店检测
3. 1没特异性引物
1游物(XAeP)EACACAAA\
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P游物XA.R：PTTGAGAGATRGATAGGAB2检測体落
诚雪溃瘾病P检测体系品表！新息管带密瑞病荫朗强检测体累
anal/1.4 物对
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港样品液成技NA
总体积
斑反成
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o. 2 mrol:f.
1cc/i.j/m
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每普州些
装次将R缓计滚物剂d计和待测板按照袭，体浓度瑟求加人R这混合图政人单假。聚度感为Ssin4 s0 83072：303个循环：72：？1e？保存，年次检测时时设阴性对照所对照及含对照微，
联出成管：新产物8，刘品沙液醒合，圳人晾脂糖凝胶内点中间时设Aladr作为片段小的标满，在上浓落神糖宝/~：Vcm山电泳0in40mil
凝腔成像观察与训！景
限山款端链滋胶放人凝致成像系牵案心按样品1A.增条带，阳性产物大小为78bp证款遵察结思，民了文消在消各在，61.6结果刻宽
祥品汽限书增产物经凝腰成像数组的誉纤单下迎家，断胶上单降对照出现条278特导性条带防性剂照战空自对照没有该，A带，典试洋品现与隔性对照和司人小的特牌性测A条带，定为阳性皮应，焦译品来出州调大小特异性条聚判知为雨性度应2
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试剂短配制
11祥品提取滴
莱性渐绿
在精激痴端菌尚搬服检验粮
取11磷最气二的（H）#t（）02g磷家钟（KI民）8氯化钠(C)2员释氮化钠N）用m爱溶榔准调值到1.1.2洗涤液
取、1磷酸卸钩”：新钾K酸钾(K用P、B新化(a)叶2「m教学洛朋到
职1.谢阅凝
最5无脂努粉、片30m）.样比#的深.1.4包被液
取263微氧锅N1复年M6？蛋阅化销aN用00蒸帘解，调节到
.。5抗体稀释液
取8说脂奶粉加10.济察液薄新
.1.6抗萍
效价为主：002的负抗料情影性本呼径：11将稀整度为110，1.7酶标抗体
市律碱性磷暖标汇的羊院免院依家生！酸。1,8底物缓冲液
H 8 mIK菌蒸馆水等3 化.3.2 管氮化钠(NaN)97 ml.之蝶NCOH 溶群调 pH H到 n
9底物溶液
将5m对硝苯核留3.物爱泽液中底物溶液制备普在孵育缩案前10 min内·涯光条件下制色
13, 1. 10路,上液
将翁氧化(Na生等
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2销物样品
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将供我祥语剪小片装准小中：照供底祥品所原（）：祥品提最澈体版（）1：6的比例加人出捷股没用武管家部中品的产池证1品授山液丁离心管中1080/mn离心2mim-齐净，」舒度接1ml,总浮流经[0 0/mn离心2mn穿清，黄复”次。
32病原蘭南梯
用接环提心环病票成利熟人1品原滋中包浮源游约/m离心i，液3
个创备好的样出中人倍家密冲满食的！吸加人联板名原最中全洋品设次出复，没：灾活离波为目对临利堂食印纠很熟藏和包被续冲液为阴性对照13、3.#封间
洛随或板空于的添教：司设产单能及品真中的样品家全干媒。每个反应用加人闭下30m
33洗板
将设赢科中的教体倒川深降凌理个是乱静器了mm后将洗涤液倾而亚洗源？次，洗完成广火得卖数倒留呼准求然！，股度应孔中的求分。4数合杭
4。加梳体
健业人家休#详股的单体中器中您商4. 2
在个这应孔薄满微滤，创，！定满决双学，的置3目将济茶液创出，可抓象2次。洗板完我层格降航极倒小平净股求组成路水分3.5绩预标抗像
1酶标抗依
有租用人10以慢声智瓶深产体了要家器半路销标折东，联作方法同3.5.2洗
m n. 3. 3.
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每孔加人oo底物溶液。2密自mmmin，常性对照显色).7终止后应
最居在律中点人叫终止
E.8结渠判斑
.3。1靠鱼判断
肉限观素以SA显向反质结用.在确定件计照实桔宽色、别性对照无的前疑下检验样品反应孔中个量复为显系为黄色，待测样品效性降冷样品技成孔没有颜色变化为阳件反应。光密魔值（)判断
在酶标仪40nm波长下测定汇流复值在阴性对照，即性对照析空自对照的光密度值衍合设定值重复样品的光寄度征敏的前是下样品2.0入性对照（判定为性样品（32.0阴非对照00光为谢性：
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