【国家标准(GB)】 食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法

ICS 67.050
华人民共和国家标
GB/T23377-2009
食品中脱氢乙酸的测定
高效液相色谱法
Determination of dehydroacetic acid in food-High perlormance liquid chromatography2009-04-08发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由青岛市质显技术监督局提出，本标游中国标滩化研究院归口
GB/T23377—2009
本标准主要起草单位：背岛市产品质苣监督检验所、国家食品质氧安全监督检验中心。本标崔主要起草人：杨红梅、张辉珍、李惠颖、正晓滨、刘艳琴、王浩、李昭勇、谭燕、闽龙宝。http://foodmate.net.
1范围
食品中脱氢乙酸的测定
高效液相色谱法
GB/T 23377---2009
本标规定了黄油酱菜、发薛豆制品、面包、糕点、焙烤食品箱料、复合调味料、果蔬汁中脱乙殿含景的高效液相色谱測定方法。本标准适用下黄油、酱菜，发酵点制品、面包、糕点、焙烤食品馏料、复合调味料、果蔬汁中脱艺跋含量的测定，其他食品可参照执行。本标准定量限为5mg/kg
2规范性引用文件
下列文件中的条款证过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘识的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成办议的各方研究是否可使用这些文件的设新版本，凡是不注片期的引用文件，其最新版木适用于本标滩。GB/T6682分折实验室用水规格和试验方祛GB/T6682--2008.ISO3696:1987M0D）3原理
用氢氧化钠漆液提取试样中的脱氢乙酸，经脱脂，去蛋白处理后，用高效羧相色谱紫外检测器测定，外标法定量，
4试剂和材料
除男有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/6682规定的一级水：1.1甲醇:色纯。
4.2正已烧。
4.37.酸铵：优级纯。
4.4中酸溶液：10%。胶10mL甲酸，加水90ml.混勾。4.5乙酸铵溶液：0.02mol/L称取1.54g乙酸铵，用水溶解并定穿至1L，4.6氢氧化钠溶液：20%/L。称取20.0氧化钠，用水溶解并定容至1I..4.7硫酸锌溶液：120g/1.。称取120.0g七水硫酸锌，用水溶解并定容至1L。4.8中醇溶液：70火，取70mL甲醇（4.1）.加30ml.水，混匀。4.9脱氢7酸标准样品：纯度98%。4.10脱氛乙酸标储备液:1000mg/L：准确称取100mg脱氛艺酸标推样品,用10ml.20g/L的氢氙化钠溶液溶解,用水定容至 100 ml,配戒1 000 mg/I. 的标推备液,4 ℃保存,可使用 3个月,4.11脱乙酸标难工作液：分别吸取0.1mL、1.CmL、5.0ml.10.0mL、20.0ml的脱氢乙酸储备液，用水稀释至100mE.，得到浓度为1.0mg/1、10.0mg/150.0ug/L、100.0mg/L.200.0ng/L的标准工作液,4℃保存,可使用1个月。5仪器和设备
5.1高效波色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。1
GH/T 23377—2009
5,2本锈钢高速均质器。
5.3粉碎机。
5.4分析天平：感量0.cc01g和感量0.01g，5.5超波发生器：功率大于180W。5.6涡旋混合器。
5.7离心机。
5.8C:固相萃敢柱：500mg，6mL（使用前用5mL的甲醇、10ml水活化，使柱子保持泥润状态）。6分析步骤
6.1试样的制备与提取
6.1.1果蔬汁准确称2g~5g试样，精确至0.01g：置于5CmL容量瓶中，加人约10mL水，用氢氧化钠溶液(1.6)调pH俏至7～8,姚水释歪刻度,摇,置于离心管中,4 000 /mtn离心10 min。取20mL上消液用10%的中酸（4.4)调pHI值系4~6,定容到25mL。取5mL过已经活化的质相取柱.用5L水淋洗,用2mL7C%的甲醇溶液（4,8)洗脱，收集洗脱液，过0.45#m滤膜.供高效液相色谱测定。
6。1.？酱菜、发酵豆制品：样品用不锈钢高速均质器均质，准确称取一5品均匀试样，精确系0.C1 g。置于25 tnL容昼瓶中.加人约10 mL.水,5 mL碲酸锌溶液（4.7）,用氢氧化钢溶液（4.6)调p值至7~5,加水定穿全刻度，趋通摄坡10 min，瑕适量置于10 m离心管中，000r/mm 离心10min,取上清进0.45μm滤膜，供高效相色谱测定6.1.3黄油、面包、糕点、焙烤食品馅料、复合调味料：样品用粉机磨碎或不诱钢高速均质器均质。准确称取 2 岛~5 离每试弹,精硫至 0. 01 名:下 25 mL 容量瓶(如需过间相萃收样则府 50 mL 容最瓶中,加入约1C mL水、5mL硫酸锌猝液(4.7),用氢氧化钠溶液（4.6)调pH值至 7-~8,加水容至刻度，超尚提取10 min,转移到分液满-巾，灿入10 m.止巴烷，振摇1uin,静置分层，弃去正凹烷层，再圳人10 ul.正已烷重复进行一次,取下层水祖置于离心管中，4 000 r/inin离心10 rmi取1清液过0.45m滤膜，供高效液相色谱测定，若高效液相色谱分离效果不理想时，可取20ml上清，用10%的甲峻(4.4)调PH值至4-6,定容到25ml..取5mI.过已经活化的固相萃取往，用5ml.水淋洗，用2m1.70%的甲醇溶液（4.8）洗脱，收集洗脱液，过0.45\n滤膜，供高效液相色谱测定.6.2离效液相色谱参考条件
色谱柱：Cs往,5μm250 mmx4.6mm(内径）或相当者：a)
b）流动相：甲醇10.02mol/17.酸铵（10190，体积比）；）
流速;l.0 mL/min;
）柱温:30\℃；
e）进样量：1℃ μ；
f）检测波长：293nm
6.3定性分析
依据保留时间-致性进行定性识翔的方法，根据脱氛艺鞍标谁样品的保留时间，确定样品中脱愈艺酸的色潜峰（参见附录A）。必要时应采用其他方法进一步定性确证。6.4定量测定
以脱氢乙酸标准1作溶液浓度为模坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对试样进行定量，标雅工作溶液和试样溶液中脱氢乙酸的响应值均应在仪器检测线性范围内。在上还色谱条件下，脱氢乙酸标推样品色谱图参见附录A，6.5空自试验
除不加试样外，空白试验应与样品测定恶行进行，并采用相同的分析步骤，取相同量的所有试剂。2
hWww.bzxZ.net
6.6平行试验
按以上步骤，对问试样进行平行试验测定。6.7回收率试验
样品中添加标邪游液,按步骤6.1~6.6操作,测定后计算样品的添娜收率。7结果计算
样品中脱氢乙酸的含景按式（1)计算：X=- s-c0)xx10*×f
武中：
X---样品中脱氢z.酸的合量，单位为克千克/kg)；南标准曲线查得试样溶液中脱氛乙骏的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；GB/T 23377—2009
i由标准曲线查得空白试样溶液中脱氢乙酸的浓度，单位为毫克升（mg/L)；V试样溶液总体积，单位为升(ml);f-过固相萃取换算系数（F-0.5)；样出的质量，单位为克（g），
计算统果保留至小数点后3位。
8回收率
在添加浓度5mg/kg~100cmg/kg范围内，叫收率在80%~110%之间，相对标准偏差小了10%。9允许差
在章复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术采均值的10%3
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波长-293 nm
这长293m
附录A
（资料性附录）
脱氢乙酸液相色谱图
脱氢乙酸标准样品的液相色谱图图A.
空白样品的液相色谱图
22.5· min
汝长=293m
空白样品中添加脱氢乙酸的液相色谱图http://foodmate.net8123377—2009
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食品中脱氢乙酸的测定
高效液相色谱法
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开本 880×1230 1/16
2009年4月第版
印张 C.75
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2G09 年里月第-次印刷
书#: 155066 -1-36951
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