【农业行业标准(NY)】 生物防治用赤眼蜂

ICS65.100
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1166-2006
生物防治用赤眼蜂
Trichogramma for biological control2006-07-10发布
2006-10-01实施
中华人民共和国农业部
本标准中的附录A为资料性附录。前言
本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。本标准主要起草人：鲁新、王承纶、李丽娟、毛刚、朱兴友、张国红。NY/T1166—2006
1范围
生物防治用赤眼蜂
本标准规定了赤眼蜂工厂化生产的定义，生产规程和产品检验方法。NY/T11662006
本标准适用于以作蚕（AntheraeapernyiGuerin-Meneville）卵为中间寄主卵的松毛虫赤眼蜂（Tri-chogrammadendrolimiMatsumura）工厂化生产和产品检验。2术语及定义
下列术语和定义适用于本标准。2.1
种蜂Founderpopulation
从自然界采集或人工复壮的用于工厂化繁殖的松毛虫赤眼蜂。2.2
寄主卵 Host eggs
指田间目标害虫卵。
pFactitious host eggs
中间寄主卵
指供工厂化繁蜂用的作蚕蛾剖腹卵。2.4
接蜂Inoculation
指将种蜂引接到中间寄主卵上的生产环节。2.5
产卵寄生Oviposition andparasitization种蜂引接到中间寄主卵上后，雌蜂探测到适宜的部位用产卵管刺人卵内产卵寄生的过程。2.6
发育Development
指中间寄主卵内寄生的蜂卵在适宜条件下，发育到幼虫、预蛹、、成蜂的过程。2.7
幼虫前期Earlylarvalstage
体呈长椭圆形，头部略尖，有上题1对，均集聚于中间寄主卵的卵黄内。2.8
幼虫中期Intermediatelarval stage体呈椭圆形略膨大，有上颚颗1对，寄主卵黄减少2.9
幼虫后期Latelarval stage
体前端狭小，后端膨大，呈囊状，体不分节，寄主卵黄已被吸尽。2.10
预蛹期 Prepupastage
体略分节，前宽后小，透明，腹背出现梅花斑。1
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蛹前期Earlypupastage
复眼微红色，体乳白色，胸足出现，腹部出现分节。2.12
蛹中期Intermediate pupa stage体色浅黄，复眼红色，单眼和翅芽出现。2.13
后期Late pupa stage
体色深黄，足和翅露于体外，生殖器及其他器官均已发育完成，产卵器形成。2.14
单卵蜂数Number waspsper factitioushostegg指每粒中间寄主卵内所寄生的赤眼蜂数。2.15
寄生率Percentage of parasitism指被寄生的中间寄主卵占其总接蜂卵的比例。2.16
Percentage of factitious host eggs with emergence outlet羽化破壳率
指有羽化孔的中间寄主卵占总寄生卵的比例。2.17
羽化出壳蜂率Percentage of pupae to emergeas adults指从中间寄主卵内羽化出壳的成蜂占所寄生总蜂数的比例。2.18
雌蜂遗留蜂率Percentage of femalewasp remain in factitious hosteggs指滞留在中间寄主卵内的雌成蜂占总雌成蜂的比例。2.19
生殖力Fertility
指羽化出壳的雌蜂繁衍后代的能力。2.20
可育率Percentage of female with oviposition capacity新羽化雌蜂具有产卵能力的个体占供测雌蜂的比例。2.21
平均单雕产卵量 Numbereggslaidperfemalewasp在25℃，RH60%70%条件下，以米峨卵为寄主对新生雌蜂进行单雌产卵量检测，得出供测雌蜂的寄生米蛾卵的数量。
性比Sex rate
指赤眼蜂雌性成蜂（早）占成蜂总数的百分率。2.23
成蜂寿命Longevityof Trichogramma wasp指成蜂在25℃，RH60%～70%条件下，从出壳到死亡的时间。2.24
畸形蜂率Percentage of deformed Trichogramma wasp2
指体形异常的成蜂数（如大肚子蜂、无翅蜂等成蜂）所占总蜂数的比例。2.25
感病卵率Percentage of contaminated host eggs with moldNY/T11662006
指在中间寄主卵内赤眼蜂发育到幼虫中期后发病的中间寄主卵占总接蜂卵的比例。2.26
绿卵率Percentage of under development eggs指椎蚕蛾部腹卵中绿卵（未成熟卵）所占的比例2.27
蜂卡Eggcard
将经赤眼蜂产卵寄生后发育到某一阶段的中间寄主卵，用无毒胶粘在规定面积的软纸或硬纸上制成的卡片。
3生产监测
3.1产前监测
此阶段主要包括两项技术要点：赤眼蜂种蜂的采集、中间寄主卵的筹集。3.1.1种蜂采集和贮存
3.1.1.1种蜂采集
松毛虫赤眼蜂蜂种必须采自目标害虫卵内寄生的松毛虫赤眼蜂，要求在不同纬度和不同地理生境广泛采集。
3.1.1.2种蜂提纯和优选
将采自寄生于目标害虫卵内的松毛虫赤眼蜂置于25℃、RH60%～70%条件下发育，羽化出蜂后，转接到中间寄主卵上，连续繁殖1代一2代后去杂提纯，并通过对寄生率、羽化出蜂率、繁殖力、性比、存特性和对自标害虫卵的搜紧能力检测试验，进行种蜂优选，确定优良种蜂。3.1.1.3种蜂贮存
优良种蜂确定后经过一代繁殖，当赤眼蜂幼虫发育到幼虫中期时，立即贮人1℃~3C、RH50%～60%的低温库。此阶段要经常检查，务必保证库内温、湿度稳定，每隔30d转代一次。3.1.2中间寄主卵的筹集
此阶段主要包括三项技术要点：椎蚕生产，重革收购、蚕黄赔存。3.1.2.1椎蚕的生产
3.1.2.1.1选养优质种蚕
要以造即质优而量多，卵粒大小适中，以单抱卵量300粒以上、105粒/g115粒/g为标准。3.1.2.1.2养蚕场选择
要选择线虫、寄生蝇和微粒子病发生极轻的场地放养。3.1.2.1.3放养管理
稚蚕单蛾区和壮蚕混区的管理做到一、二稀、三集中，摘早萤、提晚蚕，早、中、晚分批管。一匀：收蚁时留1/4空墩，收蚁当天取样蚕，淘汰病蛾区后，将蚕分开。二稀：三眠前移蚕，撒蚕宜稀，若干区装一筐，撒在同一片，便于管理。三集中：见黄后集中窝蚕，留15场地待提晚蚕用。3.1.2.2蚕收购
3.1.2.2.1防止混杂
应严格区分原种董、生物董和普通大。原种董最佳，但价高，影响生产成本，以收购生物茧为宣，严防普通大混人。
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3.1.2.2.2保证革重
选董时必领注意董重，一股革重与雌董率的高低成正比，收购的蚕董千粒重达11.5kg～12.0kg、雕董率82%~85%为宜。
3.1.2.2.3区分病
选革要严格区分健萤与病革
3.1.2.2.4分批选择
在选茧过程中必须经过初选、复选、精选三次选择。初选：将易鉴别的雄茧的70%选除，要求雕率达65%：复选：初选后10d~15d，此时蚕基本化确，将雕蛋率选到75%：精选：复选后10d~15d，此时将伤蛳、畸形蛹和死蛹除掉，雌茧率达82%85%。3.1.2.3蚕苗贮存
董库温度要求保持在0℃C~3℃，贮存期间要经常翻动，严防鼠害。3.2产中监测
此阶段主要包括三项工作：种蜂铲繁、商品蜂生产商品蜂存及管理3.2.1种蜂扩
按种蜂世代增长倍数和商品蜂生产上所需的种蜂量进行计划扩繁。3.2.1.1蚕加温
按全年商品蜂生产量制定周密的用萤计划。然后按计划分批、分期地从低温库提取相应数量的蚕董，在18℃～25C，RH70%80%的条件下加温发哦。此期间务必进行定期详细调查，根据蚕董积温和解剖观察结果，妥善安排种蜂加温。当蚕董加温后积温达110日度时，解剖茧蟠时如见中胃缩短、变软，此时距出峨还有14d，一周后即可安排种蜂加温。
当积温达200日度时，中胃液化，略缩小，卵粒形成一串，此时距出蛾还有4d，应关注加温种蜂的发育情况，适当调整出蜂期，做到蜂种出蜂期与作蚕蛾羽化期相吻合。3.2.1.2收蛾
在样蚕蛾羽化期，每天清晨人工抓蛾一次，下午再抓一次，用于当天繁蜂或贮存在一2℃～2℃的冷库中待用。
3.2.1.3采卵
首先用人工方法将样蚕蛾腹部与头胸部分开，采用特制的机械将蛾腹绞碎，然后将蛾腹破碎物收集到容器中。
3.2.1.4洗卵
将绞碎的腹加人清水反复漂洗数次，除去杂物，留下蛾卵，然后用挤卵机挤碎绿卵，再用清水反复漂洗数饮。
3.2.1.5蚕蛾剖腹卵表面消毒
采用0.1%新洁尔灭漫泡5min，进行卵表面消毒3.2.1.6晾卵
将洗好的蛾卵装人纱盘内，在无菌、通风的房间内晾干。3.2.1.7.种蜂消毒
种蜂在出蜂前应实施消毒灭菌，按1米3体积的消毒空间用5多高锰酸钾加10ml甲醛的用量消毒，消毒持续15mina
3.2.1.8铺卵、接蜂
蜂卵盘内盛中间寄主卵的厚度以4mm为宜，引接种蜂的蜂、卵比按0.8～1:1。4
3.2.1.9接蜂时间
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接蜂24h后，及时处理种蜂卵壳和卵表面的遗蜂，随即送进种蜂发育室进行发育。3.2.1.10发育温、湿度
发育室内保持25C~27℃RH65%~75%。3.2.1.11种蜂贮存
当作蚕卵内的寄生蜂发育至幼虫中期时，及时移进1C～3℃，RH50%左右的冷库贮存待用，贮存时间不得超过10d。
3.2.2商品蜂生产
3.2.2.1蚕茧加温
按3.2.1.1执行。
3.2.2.2蚕蛾剖腹卵表面消毒
按3.2.1.5执行。
3.2.2.3种蜂消毒
按3.2.1.7执行。
3.2.2.4铺卵、接蜂
蜂卵盘内盛中间寄主卵的厚度以4mm为宜，引接种蜂的蜂、卵比按1.5~2：1撒均匀。3.2.2.5接蜂时间
接蜂36h~48h后，及时处理种蜂卵壳和卵表面遗蜂，随即送进发育室。3.2.2.6发育温、湿度
白天25℃，夜间18～20℃RH60%～70%。3.2.2.7发育进度检查
经常翻动卵粒，促使发育均勾，常剖检卵内蜂体，当发育到幼虫中期，立即送进低温库贮存。3.2.3商品蜂贮存
3.2.3.1贮存虫态
赤眼蜂发育至幼虫中期为适宜的贮存虫态。3.2.3.2冷库内环境条件
温度1C～3℃、RH50%左右，保证温、湿度稳定，不与有毒、有害物品混合存放3.2.3.3贮存管理
适时对贮存的寄生卵进行翻动，防止需变。3.2.4虫态检测
3.2.4.1样品提取方法
按所需检测的样品分别提取，置于培养Ⅲ内，编号、注明批次和日期。3.2.4.2样品提取时期
根据赤眼蜂在作蚕卵内各发育阶段的内部特征，可将样品提取、检测分为两步进行。3.2.4.2.1幼虫前、中期
接蜂结束后72h以内，寄生卵内还含有卵液，寄生卵具有较大的弹力（此时不能区别寄生卵和非寄生卵），此时提取样品，适于幼虫前期和幼虫中期的检测。3.2.4.2.2幼虫后期、预和蜻期
接蜂结束后100h后，寄生卵内卵液已完全吸尽，寄生卵已完全丧失弹力（此时能够区别寄生卵和非寄生卵），此时提取样品，适于幼虫后期、预蛳期和蛹期的检测。3.2.4.3样品制备与检测
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将检测样品（寄生卵）逐粒用解部针挑开，将挑出的虫体放在载玻片上，滴上一滴70%酒精，放到显微镜载物台上供检测。
检测不同虫期时，样品的制备方法略有不同。分述如下：3.2.4.3.1幼虫前期
寄生卵打开后，立即将已破蜂卵放在载玻片上，滴上一滴70%酒精，用镊子将卵液压出，并用解部针将卵液打散，使在卵液内的幼虫充分散开，放到显微镜载物台上供观察。3.2.4.3.2幼虫中期
寄生卵打开后，立即将已破寄生卵放在载玻片上，滴上一滴70%酒精，用解剖针将卵液打散，放在显微镜载物台上供观察。
3.2.4.3.3幼虫后期至蛹期
此时期寄生卵内的卵液已完全吸尽，只需将所检测样品用解剖针打开，挑出虫体，将虫体放在载玻片上，滴上一滴70%酒精，放在显微镜载物台上供观察。3.3产后监测
此阶段主要是针对大量生产的商品蜂，在制卡前后至出售前进行严格的科学管理。3.3.1发育、精选与制卡
3.3.1.1发育
制卡前一周，分批从低温库提取存蜂，经过18C下过渡2h，然后移人变温发育室（白天25C夜间18℃～20C，RH60%～70%），其间务必经常翻动寄生卵粒，使其发育均匀。3.3.1.2精选
当发育至幼虫后期或预蛹期时，精选和去杂，使商品蜂的寄生率达90%以上，然后立即送进1℃～3C低温库暂忙待用。
3.3.1.3散卵购存
库内贮蜂卵盘(60cm×45cm×5cm）盛卵应控制在2/5处，不宜多也不宜过少，适中为好。盘内蜂卵要经常翻动，防止盘内温度不均而使蜂卵霉变。3.3.1.4制卡
按时分批提取精选后的寄生卵，送进发育室发育，当有70%的个体进人前期，即可制卡。蜂卡用纸为70g～80g书写纸，黏着剂采用无毒乳白胶。3.3.1.5包装
待新制蜂卡晾干即可收集、包装，选用洁净，无异味的包装物包蜂卡，注明批次，日期和核查人。随即送进低温库贮存待售。
3.3.2贮存管理
3.3.2.1冷库温湿度
按3.2.3.2执行。
3.3.2.2蜂卡贮存
送进低温库的新制蜂卡，务必冷却后再装架，以免温度不均会出现滞育现象而影响出蜂。同时，经常检查库温是否适宜，防止库温出现不正常而影响蜂卡质量，库存时间以不超过15d为宜。3.3.3运输
要求运输工具清洁、无异味、通风、防热，运输过程中严禁烈日暴晒、雨淋和与有毒物品混运。4产品质量检验
通过下列项目检验的结果，根据检验项目指标值（见附录A）确定产品级别。6
4.1寄生率检验
4.1.1样品提取
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各批次生产的赤眼蜂产品均需抽取样本，即从每批产品中随机确定若干蜂卵盘（供中间寄主卵内赤眼蜂发育的特制盘），每盘取少量样品，当时标记批次、接蜂日期和抽样日期。4.1.2检测容器
通常采用培养皿、试管、指形管和小型接蜂盒，容器要求清洁无毒、无异味、干燥。4.1.3样品分装
将同一抽样日期和批次的样品收集在一起，混合均匀后随机选取400粒，以每100粒分装一试管，重复4次，贴上标签供检测。
4.1.4样品处置
将所选并标记好的样品，放置在25℃、RH60%～70%条件下，发育到能充分分辨出寄生的中间寄主卵与非寄生的寄主卵状态（一般为幼虫后期或预蛹期)。4.1.5样品检测
当样品发育到能较充分分辨寄生卵与非寄生卵时，统计非寄生卵粒数量，依照公式（1）计算寄生率。N-e
式中：
P—寄生率；
N——供检测卵数：
一非寄生卵数。
4.2羽化出壳蜂率检验
4.2.1样品提取
按4.1.1执行。
4.2.2检测容器
按4.1.2执行。
4.2.3样品分装
将同一抽样日期和批次的样品收集在一起，混合均匀后随机选取400粒，确认为寄生卵粒后，把100粒生卵装一个试管，重复4次，贴上标签供检测。4.2.4样品处置
确认为寄生的寄主卵粒装管后，放置在25℃、RH60%～70%条件下，发育到羽化出蜂。4.2.5样品检测
样品羽化结束后2d一3d检测，检测样品时，必须逐粒检查羽化孔，并记录羽化孔数、羽化出蜂数和卵内遗留蜂量。依照公式（2）计算羽化破壳率，依照公式（3）计算羽化出壳蜂率，依照公式（4）计算雌蜂遗留蜂率。
式中：
B—羽化破壳率：
H—有羽化孔的卵数；
N——供检测卵数。
（2）
（3）
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武中：
羽化出壳蜂率；
-羽化出壳蜂数；
R——卵内遗留蜂数。
式中：
雌蜂遗留蜂率；
一卵内滞留雕蜂数：
D羽化出壳雌蜂数。
4.3性比检验
4.3.1样品提取
按4.1.1执行。
4.3.2检测容器
按4.1.2执行。
4.3.3样品分装
从提取的样品中随机取出100粒寄生卵，再从其中随机取10粒，每指形管装1粒，用棉球塞好，重复10次。
4.3.4样品处置
按4.2.4执行。
4.3.5样品检测免费标准下载网bzxz
当样品羽化出蜂结束后进行，首先逐管将羽化出的蜂全部倒在硬质白纸上，同时，还应将该管内卵壳内的成蜂挑出，最后分别记录雌蜂数和雄蜂数，供统计分析。依照公式（5）计算性比。No
P草=N车+N
式中：
P享——性比；
N草—雌蜂数：
N.—雄蜂数。
4.4可育率和生殖力检验
4.4.1提取样品
按4.1.1执行。
4.4.2检测容器
按4.1.2执行。
4.4.3样品分装
选用50粒寄生卵，每指形管装1粒，贴上标签供检测。4.4.4样品处置
4.4.4.1样品发育
将分装后的寄生作蚕蛾卵放置在25℃C，RH60%70%条件下发育到羽化出蜂。4.4.4.2引蜂寄生
从每管羽化出蜂的群体中每次随机捕提一头雕蜂，引人已经装有米蛾卵（200粒左右）的指形管内，以棉球封口。每次处理捕提50头雕蜂，重复4次，标记编号。引接雌蜂人指形管后，应随时逐管检查引8
人管内的雌蜂是否健在，如有死蜂要及时补足。4.4.5样品检测
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引接雌蜂后一周，按标定的指形管号，逐管检查管内有无寄生米蛾卵（黑色），区分可育和不育，最后统计管内黑色米蛾卵的管数，得出可育率。依照公式（6）计算可育率。=S
式申：
K——可育率：
S-—变黑米蛾卵管数
G—供检总管数。
将可育管内的米蛾卵全部倒在硬质白纸上，仔细地将寄生米蛾卵（黑色）和乳白色米蛾卵分开，计算各自的卵粒数，最后统计平均每头雌蜂的产卵量，以平均单雌产卵量衡量生殖力。依照公式（7）计算平均单雌产卵量。
式中：
M平均单雌产卵量；
1变黑熏的米蛾卵数：
X—供测雌蜂数。
4.5其他指标的检验
其他指标包括单卵蜂数，感病卵率、绿卵率和畸形蜂率。单卵蜂数、感病卵率和绿卵率在赤眼蜂羽化出壳前随机抽样进行检测。畸形蜂率在赤眼蜂羽化出壳后，随机抽样进行检测。o
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抽样检验项目
赛生率，%
羽化出壳蜂率，%
单卵蜂数，头
雕蜂遗留峰，%
性比，享%
感病卵率，%
绿卵率，%
畸形蜂率，%
松毛虫赤眼蜂产品抽样检验后的质量分级标准(资料性附录】
产品级别
80-100
75~100
80~110
90以上
不合格
60以下
65以下
60以下、110以上
15以上
80以下
10以上
5以上
8以上
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