【农业行业标准(NY)】 饲料中氟哌酸的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1457-—2007
饲料中氟哌酸的测定
高效液相色谱法
Determination of norfloxacin in feeds-High-performance liquid chromatography2007-12-18发布
2008-03-01实施
中华人民共和国农业部
本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。言
本标准负责起草单位：中国农业科学院饲料研究所。本标准起草人：满晨、干小英、刘庆生、邱华勇。NY/T1457—2007
1范围
饲料中氟哌酸的测定此内容来自标准下载网
高效液相色谱法
本标准规定了饲料中氟哌酸的测定方法。NY/T1457—2007
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氟哌酸含量的测定。方法检出限0.005g/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
3原理
在酸性条件下，饲料中的氟哌酸用乙酸和甲醇的混合溶液液液萃取，经固相萃取柱净化，HPLC仪测定。
4试剂和材料
以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂。水为符合GB/T6682的二级水。4.1氟哌酸标准品：1-乙基-6-氟-1,4-二氢-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸（含量≥99%）。4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙腈：色谱纯。
50%甲醇溶液：取50mL甲醇（4.2)用水稀释至100mL。4.535%甲醇溶液：取35mL甲醇（4.2)用水稀释至100mL。4.64%乙酸溶液取4mL乙酸用水稀释至100mL。4.7
提取液：取50mL50%甲醇溶液（4.4）与50mL4%乙酸溶液（4.6）混合。4.8碳酸钠溶液：100g/L。
4.9盐酸溶液：C(HCI)=0.1mol/L。4.10氢氧化钠溶液：20g/L。
4.1120%氨水：取8mL氨水用水稀释至100mL。4.12磷酸二氢钾溶液：C(KHzPO.）=100mmol/L，称取13.6g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调至pH3~4，过0.45um滤膜。4.13MAX洗脱液：35%甲醇溶液（4.5)用4%乙酸溶液（4.6)调至pH3~4。4.14MCX洗脱液（10%氢氧化铵甲醇溶液)：取40mL氨水用甲醇(4.2)稀释至100mL。4.15HPLC流动相：取850mL磷酸二氢钾溶液（4.12)与150mL乙腈（4.3)，混合均匀。NY/T1457—2007
4.16氟哌酸标准贮备液：
称取0.0250g氟哌酸标准品，用甲醇（4.2)溶解并定容至100mL，该溶液的浓度为250μg/mL（2℃～8℃保存，有效期一个月）。4.17氟哌酸标准工作液：
准确移取标准贮备液（4.16)2.0mL，用甲醇（4.2)稀释并定容至25mL，该溶液的浓度为20μg/mL(2℃～8℃保存，有效期7d）。
4.18氟哌酸标准系列溶液：
移取氟哌酸标准工作液（4.17)0.2mL，0.5mL，1.0mL，4.0mL，8.0mL，10.0mL分别用甲醇(4.2)稀释并定容至10mL。其相应浓度分别为：0.40μg/mL，1.00μg/mL，2.00μg/mL，8.00μg/mL，16.00μg/mL，20.00μg/mL。现配现用。5仪器设备
常用的实验室仪器设备：
5.1分析天平：感量0.1mg。
5.2离心机：离心力4000×g。
5.3恒温水浴和氮吹仪。
5.4旋涡混合器。
5.5超声波清洗器。
5.6带盖塑料离心管：50mL。
5.7广泛pH试纸。
5.8高效液相色谱仪。
5.9阴离子交换固相萃取柱，3mL/60mg，30μm。5.10阳离子交换固相萃取柱，3mL/60mg，30μm。6试样制备
按GB/T14699.1采集实验室样品约500g，粉碎，使之全部过0.28mm筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。
7分析步骤
7.1提取
称取适量试样（配合饲料2g~5g、浓缩饲料1g~2g、添加剂预混合饲料1g~2g),精确至0.001g。置离心管中，加人提取液（4.7）10mL，轻摇约10s，加盖密封，旋涡混勾约10s，放气，旋涡混匀30s两次，4000r/min离心10min，上清液置于100mL容量瓶中。再分别用10mL提取液（4.7）重复提取两次，合并上清液，用碳酸钠溶液（4.8)调至pH6～7。用甲醇（4.2)稀释并定容，摇匀，并通过中速定性滤纸，待用。
配合饲料用移液管量取滤液4.0mL于60℃水浴中用氮气吹至约1mL（浓缩饲料、添加剂预混合饲料用移液管量取滤液2.0mL于60℃水浴中用氮气吹至约0.5mL),加2mL盐酸溶液(4.9)溶解，置超声波中超声30s，并旋涡混合约10s，备用。7.2净化
备用液（7.1)注入已用1mL甲醇（4.2）、1mL氢氧化钠溶液（4.10）和1mL水活化过的MAX小柱，流速不超过1mL/min，先用0.5mL2%氨水（4.11)淋洗，再用0.5mL甲醇（4.2)淋洗，然后用MAX2
NY/T1457—2007
洗脱液（4.13)6mL洗脱，挤干；收集洗脱液，注人已用3mL甲醇处理过的MCX小柱，流速不超过1mL/min，用6mL甲醇（4.2）淋洗，MCX洗脱液（4.14)1.5mL洗脱，挤干，收集洗脱液，用MAX洗脱液（4.13)中和至pH6~7,用甲醇（4.2)稀释并定容至10mL，摇匀，过0.45μm滤膜，备用。7.3测定
7.3.1HPLC色谱条件
色谱柱：Cl型柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5μm或性能类似的分析柱。柱温：30℃。
流动相：取850mL磷酸二氢钾溶液（4.12)与150mL乙睛（4.3），混合均匀，流速：1.0mL/min。检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。检测波长：278nm。
进样量：20μL。
7.3.2定量测定
按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，向液相色谱柱中注入欲测定的氟哌酸标准系列溶液（4.18)和试样溶液（7.2），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。8测定结果的计算
8.1试样中氟哌酸的含量(W.)，以质量分数毫克每克(mg/g)表示，按式(1)计算：w,- Pxyxcxy.
式中：
P试样溶液蜂面积值；
V-—试样的总稀释体积，单位为毫升(mL)；C——标准溶液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；V—标准溶液进样体积，单位为微升(L)；标准溶液峰面积值；
试样质量，单位为克(g)；
V—试样溶液进样体积，单位为微升(μL)。8.2平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。9重复性
同一分析者对同一试样于同一实验室的同一台仪器同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。