【商检行业标准(SN)】 进出口动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法 液相色谱－质谱/质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1924—2007
进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林残留量的检测方法液相色谱-质谱质谱法Dctcrmination of elenbutcrol,ractopamine, salbutamol andterbutalin rcsiducs in foodstuffs of animal origin for import andexport-HPIC-MS/MSmethod
2007-05-23发布
中华人民和国
国家质量监督检验检疫总局
2007-12-01实施
本标准的附求A和录为资料性附求，本标准由区家认证认可监督管理委员会提出并力口，SN/T1924—2007
本标滩起查单位：中华人民共和：海出入境检验检疫局、中华人民共和内河南山入境检验检疫局、中华人员共和国湖南阳人境检验检疫局、中华人民共和目江弥山入境检验检疫局。本标滩主起草人：邓晓军怪、郭德华李波、杨冀州、薇华、陈恋“、郭俊峰、十美玲、陈睾莲。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准1范围
进出口动物源食品中克伦特罗
莱克多巴胺，沙了胺醇、特布他林残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法SN/T1924—2007
本标准规了动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙」胺萨、特布他林残留量的制样和测定房法
本标雅适庄：动物源性食品肌肉和内斯牛克伦特岁、莱克多凸胺、沙门接醇，特布他林残留量的检测.
2试样制备与保存
2.1试样制备
从所政全部栏品中取山有代表性样品号，充分绞降，混勾，总分成两份，分别装人洁净容器内，密封作为试样·标标记：在制样的损作过程；.应防正样品受到污染或发残留物含量的变化：2.2 试样保存
将试样于1a℃保行
3方法提要
试栏中的药物残留采用p][.2的乙酸铵缓冲率液提取,同时加人3盐酸需现醛贰酶-片片疏酯醇进行酶解后,提取液经和SCX双SPF杜净化，波相乌谱政谱进行测定，内标法定中。4试剂和材料
除非另有规定，均使用分析纯试剂,水为超纯水4.1中醇：液树仁谱级。
乙晴；澈相色谱缀。
乙酸铵，
乙酸乙酯。
4.5氢氧化铵
4.6盐酸。
4.7啦。
4.8冰乙酸bzxz.net
4.9β3盐酸葡萄糖醛成酶芳基硫酸酷酶:含 3盐酸葡粪糖醛代酶 134 60C U/rL.芳基硫酸酯酶5 20c t./ml..
4.1C乙酸铵缓汁溶液：0.02mml/1.:pl[-2。溶解.:4%乙酸铵丁ml.水中，用冰乙酸凋节pI1到5.2+0.「,晟后用水稀穆到「「，」十4℃存,使月期为「个』。4.11乙蔽乙确氢氧化铵（07一3.体积比）：使用前搅拌.同时用超声波水浴超声使成均相：4.12盐酸溶液：0.031rl/L～取39m,1nol/L的盐酸溶液用水稀释到1.4.13标滩品：特布他林（分子式：：H#NO，CAS号：23031 25 6）、克伦特岁（分子式：（H#ClN.()CAS :37148-27-9),D,-克伦特罗,沙」胺醇(分了式:CI1N0,CA5 号:18559-92-9),D,-」胺醇SN/T 1924—2007
莱克多胺(分子式（IN0CAS号：97825-25-7)、D-莱克多卫胺纯度298%。4.14标准储备渡的配制(1./:mL):分别称取约) ng一0.「mg)的特布他林、莱克多巴胺、克伦特罗、沙」胺学标准品于5m.容量粘，用少量甲爵溶解，然后用中博配戒1.Cmg/m.标准储备落。低于5℃保存，有效期为1年，4.15同位素内标标雅冬液的配制（1.0mg/mL)：分别秘取约59rg（一0.1mg）的1。克伦特岁、1)，沙丁胺醇,1莱克彩正胺称滩品于50㎡-1.容早瓶牛，用少早醇浒解，然后用甲醇配成1.0mg/mI标准储各辫毅。低丁5℃保存，有效期为「年：4.1E混合标准中间游液的配置：用醇分别稀释标准储备液至终浓度约为1.0μg/ml.和100.CngmL,低于5℃保存，有效期为6个片，4.17混合同位索内标标准中间溶液的配置：币巾醇分别稀释同位索内标标准诺备液牟终浓度约为100,0 rg/ml,低于5℃保存，有效期为6个月，4.18标准1.作液的配芦:根据需要,临用时坡-是量的混合标准守间落液(4.:6)和混个同位素内标中间标准溶液（-、17），月水稀释配制成适当浓度的混合标准1准溶液（参考线性浓度范围为0.：nT～1G/mT),有毫升该据台标准工作落液含有间位索内标各1.：依于5%保在,有效期为6个H4.19CiaSPE代：LC18SepPak500m，3nL或相当名4.2csCx SPE#:lc stx Sep Pak500 rmg.3 ml 或相者.4.21水相滤膜：0.15m。
5仪器和设备
液相亿谱-串联质谱仪：配有电喷募（ESI)离广源：5.2满旋混合器：
离心机：转速1000r/min。
5.4整转蒸发器：
5.5天（c.」rng0.01g)
5.6超声波发牛器：
5.7恒温箱
其空过柱装置,
5.9吹氮浓缩装置，
5.1C粉碎机，
6测定步骤
6.1提取
称取10 g(精至C.1 g)试样：于5c ml.塑料离心管中,加人20 ml.pll为5.2的乙腰铵缓冲溶液（1.10）,布2oc0r/min下涡旋泥合2m.n。添209.ul.同位素内标物（4.17）丁待测样品中：0&l.的3盐酸葡带卵醛献酶-片本硫醋酶，灿蔬超声提股1：mit：。在恒温箱中」37C酶解「6 h：以380 r/min离心1 mit:,将「清液过.45m滤膜（4.21)取5ml.滤液于3 .带刻度的玻璃试管。
6.2净化
将(u小(. 19)和SX(1. 20)小按从上到下的次序装好。依次用5 ml.水、5 n-1. 甲醇和5 ml.0.03 mol/1.盐酸(1.12)落凌以1.1 ml./min的流途连柱活化，转移过滤后的提圾液至固相层析杜的顶部，以0.：tnl./tmi:流速过固相层析柱，此操诈至少需要lrmin，用：tml.水，nl.甲醇淋洗小杜，在较强的负玉下拍1min：取下C小：用12ml.滤合均匀的乙酸乙酯氢氨化铵落液（=).洗SCX柱了1的待分析成分并收集洗脱液，并在吹氮浓缩装置1于1G℃一5℃的温度下热干。加人2
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1.0ml.乙情水(119)振荡解残洽后过0.1um滤赖，滤液供液相白谱-质谱测定。6.3测定
6.3.1高效液相色谱条件
色谱柱：C性，150mm（代长）x2.1mm（内径）粒变5umh）
流动析：A:乙一c.1%十腹，B:2mmol/L艺峻铵水溶液+0.1为叫峻：流速：200μI/mi=1梯度洗脱程序贝表1：
表1：
梯度洗脱程序表
梯及时间/mi
柱温：35℃;
进样量：3CL，
质谱条件
离一源：喷露JESI，止离子；
打措方式：多反底监测MRM；
流动相A
流动相比《泽）
流动相B
穿化气压力(SI)气征气压力(CIR)辅功气流速(S2)均为高纯氮气或共他合后气本：使用前成调节各气本流量以及离了源温度(TF)使质谱灵敏度达倒检测要求·详细条件参考附求A：d）电喷电压（S）、碰撞电压（CE）、去簇心压（I）撞室人口心压（E）、御撞室出口电压(XP)应优化牟最排灵敏度,测离一对和定是离子等说细条件参考附录A，定量测定
根据试样中被测物的药物含量，选收响应值机近的标准工作液（4.18)同压过行分析。标准1.作液和待测液中四种药物的响应估均应在仪器线性响应范匝内：如果合量赶运标准曲线范匝·应用艺晴十水(1十9)稀释划合适浓度后分析：在.「:连色谱条件下的待测药物的参考保留时间分别为 3.Crrin(沙丁安酵）3.1 min(特布它林）、9.4 min(求克多巴胺)利9.9 min（克伦特罗）,标准溶液的选择叫离了流图参无附录13。
6.3.4定性测定
按照波相色谱-半联质谱条件测定样品和标准：作落液，如尽检测的质母色谱锋保留时间与标准品致·定性离了对的杆对卡度，是用州对于最强离了十度的强接百分比表示，成当与浓虚相当标准工作溶液的柜对卡·敏，相对十度允许愉差不超过表2舰定的范国·则口，判闲品小存在对应的被测物表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子十度八元）
充许的相对偏关（）
6.4空白试验
除不训试样外，均按兰泾操作步骤避行。结果计算和表述
用色谱数据处归机或接式(1)计算样品待测药物残留量：计算结头需扣除空口值10
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XeXAXA,xV
cxA.XA.XmX1 000
样品得测组分留量、位为毫克念千克(I/kg)：标二作溶液中药物的浓变，单位为纳克得毫(/)；样液户内物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml.）；A
样液守药物的峰而积；
标准一作落液守内标物的峰而积；样品溶液最终定容体积，单位为毫升（mL)：标准二作溶液中内标物的浓度：单位为纳克每升（ng/nI.）：样液它内标物的峰面积；
标推．作落液药物的峰面积：
最终样液代表陷诚样质量，总位为克（\）：注：并汇药将采压机对应的同位素作为内标,特布仙林采用同位紊标的沙」肢醇准为内标，8测定低限,回收率
8. 1测定低限(L0Q)
本方法肉和肝的测定低限为0.co05mg/kg8.2回收率
因它克伦特罗,莱克多巴胺,沙「胺醇,持布他松添浓度技回收率试验数据见表3表 3肉中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林回收率数据表药密名称
克伦特罗
莱克多巴胺
添加波度
(ug/kg)
改率范用以
73.-~-965. 4
08.5~-26.3
86. 5--_02. C
93. 6~-8. 8
31. 7--.08.9
93. 6~-08. 8
药物名积：
沙二胺醇
特年他林
添加浓度
(ug/kg)
口改率控围(路)
80.8--91.6
102.7-113. 9
73. 5 ~-78. 3
83. 6-:08. 0
90. 0 ~-07. 3
83. 6~- .08. 0
肝守克伦特罗，莱克多巴胺，沙丁胺醇,特布他校添加小平及[收率试验数拆见表1。表 4肝中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇,特布他林回收率数据表药窃名称
克伦特罗
莱克多巴胺
添加浓度，
(ux/ke)
向改萃范用：
94. 6.-..00.3
75.3--98.4
9:.5.-.93.0
26. *~-100. 1
95. 5~.-22. C
02. 0~--08. 3
药物名称
沙：按鲸
特独称
添加浓度/
(ux/k)
向受率花用;
77.2~-89.3
77.3---92.(
73. 5---80. (
77.2--90. 6
80.5-.92.9
73. 0~-79. 3
电喷雾压(IS):5 CO V
雾化气力(GSI),50 P&;
气帘气压力(CUR):20 Pil;
销助流速（GS2)：39Pa;
离了源温度(TEM):55CT;
附录A\
(资料性附录）
质谱参数
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微撞中乐（C）去簇巾压(I)P)见表A.所示：能撞家人口中床（FF)为V、能撞牢山中压(CxP)为 13 V。
表A.1β-兴奋剂及内标碰拉电压、去簇电压参数表母离(Q1)m:
克伦特罗
莱克多巴
沙丁胺悦
特布它林
-克伦特婴
-来克多巴胺
I)-沙丁胺丽
为定是离广对，
「离Q3)m?
硅撞电反/V
去欲电压V
附录就参数足在AP0质谱仪完反的.此处列昌试验月仪据型号仅足为了提供参号，并人涉及育亚口的鼓购标使用者尝试不同厂家和划的仪器。3
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附录Ｒ
(资料性附录）
标准品MRM图谱
Xlc: ot'1 MN. 13 pairs : 277.3/2b9. 2 airL -rom Sanple 3 (std 3) ot.2utau61120. wit (ltrbo Sa:ay)2. 51
277/259克伦婴
X[ orI MRN (13 mirs) : 277.2/203 0 im-: tom 5ummpl:3 (sld 3) oT7u861120. iT (Th rhr Sgy)sr.s
sdasau
sdarjsl
277/203克伦特数
XIC'ufI MRM (IH sin) : 2H6. 3/2. 0 ant rin Sample3 (sld 3) arua61120. wiT (t rluS:ay)2. 704
rne(in'n)
285/20113g克伦特岁
XIC oT+MRM. (13 pais) : 302. 3/282. 3 ant -rom Sample 3 (sid s) or=aau61120. mi) (Ttrbo S2a,)3. te4-
302/284来克多胺
Mux.2. 7e4 9.
Mas E. le4 t
Mas .74 t
XIC urI MRM (13 jsis) : 302. 3/1G4.2 arL jom Sumple 3 (sd33 ur3atac6120. wi.r (Turbu Sgu)8.9.
:502/164 某克多1:按
XIC of+MRn. (13 pirs) : 307. 2/l0r. 2 ant 2rom Sample 3 (std 3) of2anu61120. iT (Ttrbo S2a,)3780
ne(m'n)
307/16713-乘点多巴胺
克仑特罗,莱克多巴胺标准品的多反应监测(MRM)图谱10.0
Mix.3. le4 u3s
Mux.2. le
vlax.3780. n c38.
X1Cn1 VRM 613 prir): 226. a/152. 1 smu inm Seml:3 (nl 3) nr-am081120. m g-1:rh: 57g)
226/1h2特布他述
XICn1 VRM (13 prir) : 226. a/107.1 amu Im Sxmlks3 (sil3) or-ala081120. r (rh: 5g)7840
Inc(min)
SN/T1924—2007
V . M4 ps
226/107特布征味
- XJe u:+Mk3 (13 puirs) : 210. 2/222. 1 tmu (rom Sxmple :sd 3) of _alaJ81120, wi : .trl Saray)2. 0e1,
240/222沙丁胺转
xlc:o:1 MRM (1 pairs) : 240. 2/[4h.1 amu Iram Samrle3 (ld 3) nl aiao81121. 1l 3.rh: S:'a)6.04
240/148萨
x1Cn*1 vRM (13 prir) : 243. a/151.1 amu lom Sxmle: 3 (shl 3) or-an081120. wm -:h: 5g.)818
Tims(min>
沙胺醇
特布他林、沙丁胺醇标准品的多反应监测(MRM)图谱10.0
M4+ 7RA0. D tp%
Max 2. 0e1 cps
ux 6. 4u4 cpy
Max.681E. J eps.
SN/T1924—2007
Foreword
AnnexAand B of this standard are informative annexesThis standard was proposed by and is under the charged of certification and accreditation administa-tion of thc Pcople's Rcpublic of China.This standard was drafted by Shanghai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China,Henan Entry-Exit Inspeotion and Cuarantine Bureau of the People s Republic ofChina,Hunan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic of China.JiangsuEntry-Exit Inspection and Quarantine Bureau ol the People's Republic ol ChinaThe staridard was mainly drafted by Denig Xiaojun,Zhu Jian,Guo Dehua, Li Bo, Yang Jizhou,Dai Hua.Chen Huilan,Guo Junfeng. Wang Meilin,Chen Molian,This standard is a profassional standard for cntry-cxit inspcction and quarantinc pramulgated for thcfirst time
Nule: Lhis Eriglish versiull,a Lranslalivri frorti the Chirese text,is solely for guidearice.S
SN/T 1924—2007
Determination of clenbuterol,ractopaminesalbutamol and terbutalin residues in foodstuffs otanimal origin for import and exportHPLC-MS/MSmethod
1Scope
The staridard specifies the methods of sample prepafatiori and determination of clerbuterol, racto.pamine, salbutamol and terbutalin residues in foodstuffs of animal origin by HPLC-MS/MS.This standard is applicable to the determination of clenbuterol.ractopamine, salbutamal and terbutalinresidues in meat and viscera of animal oringin by HPLc-MS/Ms.2 Preparation and storage of test sample2. 1 Preparation of sample
Thc cambined primary samplc is rcduccd ta 5o0 g which is totally minced and dividcd into two cqualportions.each portior is placed inta a clear vessel as a test sample, which is then sealed. In thecourse of sampling and sample preparation,precaution should be taken to avoid contamination or anyfactor that may causcs thc chango of rcsidue contcnt.2. 2 storage of sample
The test sample should be stored at18℃.3Principle
Clenbuterol, ractopamine,salbutamol and terbutalin residues are extracted from the test sample withpH5. 2 ammonium acelate buffers followed by hydrolysis with glucosidase. The exlract is cleaned upby SCX and Cia solid phase column. Four residues are determined by HPLC-MS/MS,and quantified byisotope internal standard mcthod.4Reagents and materials
Unless othcrwisc specificd,all the rcagcnt uscd should bc analytical grade,watcr is dcionizcd watcr.SN/T 1924—2007
4. 1Methanol.
Acetonitrile:HPLC grade,
Ammoniumacetate
4.4 Acetic ether.
Ammonium hydroxide
Hydrochloric acid
4.7 Formic acid.
4.8Acetic acid.
4.9 β-glucuronidase:100 U/mL.4. 10Ammonium acetate buffer:0. 02 nol/ L.pH- 5. 2. Weigh 1. 54 g Arrmorium Acetate in 900 mLwater,adjust pH to 5. 2 =0. 1 with acetic acid and add water to final volume of 1 L.Acetic cther-ammanium hydroxidc solution (97 -3, V/ V). Mix to homogcncous phasc bcforc4.11
4. 12 0, 03 mol/L HCl, Dilute 30 mL 1 mol/L HCl to final volume of 1 L with water.4. 13 Clenbuterol (C12H-: Cl2 N, 0 CAS:37148-27-9), ractopamine (C1: H23 NO: CAS:97825-25-7).salbu-[arnal (Ci:H,NO, CAS:18559-94-9) and (erbulalin (Cr2 Hu NO: ,CAS: 23031-25-6). Dy-Clenbulerol, D,-ractopamine.D.-Salbutarnol standards:purity98%4.14 Stock standard solution of clenbuterol.ractopamine, salbutamol,terhutalin (1.0 mg/mL): ac-curately wcigh 5o mg ( ±a. 1 mg? standard in volumic flask,add to the battlas a known amount ofwater to produce a solution containing compounds all at 1.D mg/mL and store refrigerated at -.5C.assign a shelflife of 12 months4.15Stock internal standards solution of Dg-clenbuterol.D,-ractopamine,Dg-salbutamol (1.0 mg/mL);accurately weigh 50 mg (. ± 0. 1 mg) standard in volumic flask, add to the bottles a knowrarnaunt of waler lo produce a solulion conlaining cormpounds all al 1. o mg/mL and store refrigeraiedat 5 c.assign a shelflife of 12 months.4. 16 Mixture intermediate standard solution: dilute stock standard salution of clenhuteral, racto-paminc, salbutamol,tcrbutalin(1. 0 mg/mL) to 1. 0 μg/mL and 100. 0 ng/mL in methanol, storc refrig-erated at .5' .assign a shelflife of 6 months10
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