【国家标准(GB)】 日本沼虾

ICS 65. 150
中华人民共和国国家标准
GB20555-2006
日本沼虾
Oriental river prawn
2D06-09-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准花管理委员会
2006-12-01实施
本标准的第4章为强制性条款，其余为推荐性条款：本标准的录 B,附录 C 为规范性附录,附录 A 为资料性附录;本标雅由中华人民共和国农业部提出：本标滩用全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。GH205552006
本标准起草单位农业部淡水鱼类种质监督检验测设中心.中国水产科学研究院长江水产研究所。本标主要起草人：邹凹平、许映势、伍刚、汪登驱、徐忠法、固瑞琼、陈华彬。1范围免费标准bzxz.net
日本沼虾
GB 20555—2006
本标推给出了H本沼虾[Macrnhrachiumnippunense（cleHaan）的学名与分类、主要形态构造特征、生长与繁雍、遗传学特性和检测方法。本标推适用于日本治虾的种质检测与鉴定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标谁，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注口期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T18654.1养殖鱼类种质检验第1部分：检验规则GB/T18654.12养殖鱼类种质检验：第12部分：染色体纽型分析3学名与分类
3.1学名
H本沿虾 [Macrobrachium nippanense (de Haan)]3.2别名
青虾、河虾。
3.3分类地位
节肢动物门（Arthrapadla），甲壳纲（Crustacca）、十足日（Decapoda）、游泳亚目（Natatia）、长臂虾科(Palaemanidae)，沼虾属（Macrobrachiwm)。4主要形态构造特征
4.1外部形态特征
4.1.1外形
体形圆简形，分头胸部和腹部两部分。头胸部较粗大，往后渐细，腹部后部更为狭小。体外披一层坚硬的几丁质外骨骼，头胸甲前端中央延伸出乎点锐利的额角，其上，下缘均有排列整齐的呈锯齿状的额角齿，额角基部两侧各有一具柄的复眼，其下方有两刘触角。头胸中的两侧各具两个刺。一个位于第二触角基部称触角刺，另一个位于触角刺的后下方称肝刺。腹部第二腹节的侧甲前后缘复盖在第一和第三腹甲上。依节20个：头部5节，胸部8节，头胸部的体节愈合在一起，腹部7节。除腹部第七节外，转个体节各有附肢一对。头部附肢特化为第一、第二触角（第二触角的鳞片长约为其宽的：三倍）人额（具有二节的题须）和第一、第二小颚；胸部附肢前兰对为题足，后五对为步足。题显为双义股型，步足为单肢型，第一，第一步足为状，第一对比第二对细小；腹部附肢分化为6对游泳足，双肢型，日本涩虾的外部形态见函1和图2。璇雄H本沼虾的外形区别参见附录A。1
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4.1.2体色
色常随橘总环境而变化，
4. 1. 3可数性凝
4.1.3、1额角爆
信额角齿瓷
4.1.3.2体节：美
4. 1.3. 3附肢:头
4. 1. 4 可量性状
，胸部
日本沼虾(雄性)的外部形态
日本沼虾主要可靠性测见表！。表
日本沼虾主要可量性状出
第二步足/体长
长/第工步是基部距
颜弟长/头胸臣长
：4.2内部构造特征
胃为衰状胃里具有角质膜和角质窦起。4. 2.2鳃
1. 30. 24
位于头刚部两侧的鳃腔里，为头胸甲所短盖，腔内有8对叫状的鳃小片。4.2.3性腺
0.81±0.07
23. 97±3, 2#
0. 55±0. 03
位于头扇部心肌和消化腺之间，肝映脏的上方。雄虾的精巢罕户色，衰面多皱纹，前端分在右两叶，2
GR 20555—2006
两侧各有一根曲折的输精管，向外开口于第五步定的基部内侧，雄虾的卵巢呈椭圆形，前端狭窄，分成左右两叶，后端愈合，两侧各有。根输卵管通向第三步足基部内侧的生殖孔，5生长与繁殖
5.1生长
5.1.1幼体阶段
在幼体变态阶段，每相隔1~3d蜕一次度，每蜕皮一次则进人一个新的生长期。约经9次蜕皮幼协即进人外形与成休相似的幼虾阶段。纫体阶段生长实测值见表2。表2零沼虾幼体生长实测值
幼体发育期
幼虾至成
成虾阶段。
5.1.3寿命
横阶段
价段，在水温
日本沼虾的荐
大量死亡。
5.2繁殖
5.2.1成熟年龄
-般为14
悟会时间
体长范mr
eg2. 1~2. 3
2. 4~~2.
平均体长/mm
说壳一次量蜕毫5次7次后进入
一般在翼月上元始死心，8月开始-般五六月份孵港约经45d的生长，体长30mm时，性赚开始哦熟。5.2.2产卵类型
当年孵出的虾苗长至月份，娠达30m以上即酬产卵一就;次年的1月份至9月份可再产
卵一至两次.两次产聊的问隔时般为20～25d。受精卵果露性，粘在腹部刚毛上，抱卵孵化。5. 2. 3抱卵量
不同体长、体重拖卵虾的抱卵数见表3.表3日本沼虾不同体长、体重个体抱卵虾的抱卵数体长/oum
29--35
36--39
44-~45
体重/
1. 1~-3. 0
1. 9~-2.8
抢卵数/粒
254--·985
593---1291
675---1 750
7$2---2 713
GB 20555—2006
体长/mm
46--43
50--53
64--72
遗传学特性
6. 1细胞遍传学特性
表3（续）
沐最/g
2. 1--6. 7
.2--7.5
拖卵数/粒
1 272--3 115
1160--4 240
3 020-- 5 c03
体细跑染色体数：2m104：染色体臂数（VF)：178。核型公式为2″-74m8st221。日本沼虾染色体组型见图3,
6.2生化遗传学特性
图3日本沼虾染色体组型图
经电泳染，日本浴虾肌肉组织带果酸脱氢酶（MI)H)同丁酶有五条悔带，日本沼虾肌肉组织MI)H同工酶图谱见图 1.其酶带扫描图见图5,酶带相对活性与相对迁移率呢表4。图4日本沼虾肌肉组织DH同工酶图谱项
相对活性/<5%）
相对迁移率
检测方法
图5日本沼虾肌肉组织MDH同工酶酶带扫描图日本沼虾肌肉组织MUH同工酶相对活性和相对迁移率表4
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7.1生物学检测
随机抽取50尾日木沼虾进行生物学检测，先称体重，然后测量体长，第二步足长、第止步足基部间距、头胸中长、额角长，最后进行比值计算。抱卵量计数是选取抱卵虾后，把卵取下放代培养匪中进行计数。体长是从眼柄部到尾扇来端的长度，第二步足长是从第二步足基部到其末端的长度。第五步足基部问距为第五对步足基部底端两侧之间的距离头胸甲长是从额角尖端到头胸中背部中央木端之间的长度。额角长是从额角尖端到其在头胸甲上之隆起处之间的所离。7.2染色体检测
7.2.1预处理与低
选取活力强、不同性成熟度的雄虾从其腹部注射秋水仙紫（2u/g），在25℃下暂养5h左石后，解部出精巢，置丁含低渗液L0.073mol/L的氛化（KC1)落液］的小烧环中，于37℃温箱中保温30:min。
7.2.2固定
小心移去低渗液，沿烧杯壁缓慢加人新鲜配制的卡诺氏（(arny）冷固定液（乙醇与冰艺酸的体积比为3比1），在4℃低温下固定2h左石，在这中间更换新鲜固定液2次-～3次。7.2.3染色体标本的制片，染色、计数与组型分析按GB/T18554.12的规定执行。
7.3生化遗传分析
7.3.1样品的来集与保存
样品活体运回后，随机收链康、活泼的个体，去头，去壳，取肌肉组织（1.g/尾~2g/尾），每个个体作为-·个样晶编号后放入样品中，在低温（：25℃)冰箱保存。或取样后直接进入下一步操作7.3.2样品制备
按1品样品加5mL样品缓冲激（见附录R中的电极缓冲液）的比例分别加人到置于冰浴的玻璃匀浆器中匀浆，然后在4℃左右的温度、1200>r/min条件下离心30min，取上清液置冰箱中保存各用7.3.3电泳分高
采用9.5%浓度的桑丙烯髓胺凝胶。电极缓冲液利凝胶制备见附录B，水平电泳，电泳温度为10℃，前电泳为电流0mA，10min点样后（每孔点样量约为8L）预电泳10min，电流451nA，正式5
GB20555—2006
电泳16nA，s.5h，然后电流45mA再电泳10min电泳结束后，电冰胶板放人预先配制好并37C柜温箱中保温的染色液中染色。苹果酸脱氧酶同工酶染色液配方见附录C。待染色好后用自来水快述洗3次一5次以去除染色液，再用7为的乙酸终止梁色并固定。
7.3.4扫描测定
用薄层激光扫描仪对染色后的电泳胶板图谱进行扫描（扫描被长为370nm）,得到酶谱扫描图，相，对活性及相对移率,
7.4检验规则与结果判定
按 GB/T 18654.1 的规定执行。附录A
（资料性附录）
雌雄日本沼虾的外形区别
GB 20555--2006
用肉服区别20nm以上的H本沼虾的耀雄较为容易，而分辩20mIn以下个体的雌雄测比较困难其外形区别主要有以下儿个方面：达到性成熟的同龄虾中，雄性个体较大，而啡性个体较小。体长4.于cm以上性成熟的虾中静繁对步足明显比雕虾的温大，其长度为体长的1.5倍左右·而雌虾的第二步哩较为细小。一般不超过伴见表1)。雕虾第四、第五对步基部之间敏距离阀第五步足基部间距人于第四对步足部的间而棘虾的四、第五步足裤部嫩间所较，且间距相等（见表1)。距，呈“八”字形操列
前构造不同，雄虾在第二腹肢内肢够内侧，真有…个细长的棒状的突起结谁雄虾第一腹技学
测，称为雄性附肢（死图A.1）这是交配动辅助靠宜，而雌虾则改有。构，于内
群性第二腹胎
一外殿；
内岐；
维性班
峨性第鲁腹肢
GB 20555—2006
电极缓冲液的制备
附录B
(规范性附录）
电极缓冲液和凝胶的制备
一羟甲基氨基甲烷（Tris）75.1g，甘氨酸19.3g，加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水定容至5000m.用Ttis调整pH例8.9，制成母液。使用时用蒸馏水稀释母液1倍制成也极缓冲液B, 2 凝胶的制备
A液：内烯酰胺（Acr)33.3g，甲义双丙烯酰胺（Bis)0.9g，加蒸馏水100mL溶解，充分溶解后划滤，加四甲基乙二胺（TEMED)0.34mL，再定容至150mI。B液：过酸铵(AP)0.5g，加蒸留永至33inL溶解。C液：1份电极缓冲液母液加工份蒸馏水。使用时，将A液21.4mL、B液2.1ml、C液251riL、蒸馏水1.2mL混合成胶浓度为9.5%的胶50mL.
（规范性附录）
苹果酸脱氢酶同工酶染色液的配制GB20555—2006
A液：辅酶I(NAD)500mg.1%氯化硝基四氮唑蔬（NI3T)3001ng，盼嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mg，加蒸馏水定容至100mL
B液：DL.苹果酸2.68g，磁酸钳(NaCO))2.78g，加蒸馏水至200mL。C液:0.5 mol/L Tris-HCI染色缎冲液(pII为 7.1),使用时，按A液+B液一液十蒸罐水为10-110十25+90的比例配制成染色液
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