【国家标准(GB)】 山羊冷冻精液

ICS 65. 020. 30
中华人民共和国国家标准
GB205572006
山羊冷冻精液
Frozen semen of goat
2006-09-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-12-01实施
规范性引用文件
术语和定义
4.1种公羊
新鲜精液
4.3·冻精外观
4.4冻精解冻后的要求
5抽样
抽样检验方案
5.2拙取祥本
6试验方法
6.1外观
6.2解冻后冻精
6.3恰验分类
6. 4检验项目
7判定规测
常规检验
澳式检验
7.3抽样检验对群体质量水平的判定8标志、包装、运输、贮存
附录A（规范性附录）
A.1导言
A.2冻精解冻
器材.溶液
精子活力检
器材、溶液
山羊冷冻精液质量检验力法
前进运动精子数的检查
器材、溶液
A.4.2方法
A.5精于畸率的检查
GB 20557—2006
CB 20557—2006
器材.溶液
A. 5.2 方法
A.6细菌数的检查
器材、溶液
培养基
操作步骤
菌落计数方法
平板菌落数的计算
附录B（规范性谢录）山羊冷冻精液质量监督抽样检验程序B.1
质量监督抽样检验程序
H 2, 1
蓝督总体
确定质量特性
蓝督质量水平
蓝督检验等级
检索监督抽样方案
捕瑕样木…
检验样本
判断监臀总休是否通过
应用实例
山羊冷冻精液制作程序和使用
附录（资料性附录）
C.2稀释液配制
所有器具虚洁净并消毒火菌
化学试剂
稀释液
C.3精液翻穆与分装
-次稀释法·
一次稀释溢
细管精液的分装
C. 1 :降温、长衡
C.5精液冷冻
玲冻用具
细管冻精
颗粒冻精
C.6精渡解冻
C.7输精
并睦器输猜法
注意事项
本标准的第4章是强制性的，其余是推荐性的。本标准的附录A、附录B是规范性附录，附录C是资料性附录。本标准油中华人民共和国农业部提出，本标准由全国畜救业标准化技术委员会归厅。GB20557—2006
本标准起草单位：农业部牛冷冻精液质量监督检验测武中心（南京）.农业部全国畜牧兽医总站。本标涯主要起草人：金穗华、陆汉希、王志刚、黄文佳、赵文魁。本标委托农业部牛冷冻精波质量监督检验测试中心(南京)负责解释。1范围
山羊冷冻精液
GB20557—2006
本标准规定了山单拎冻精拨的命名、种公羊和新鲜精液与冷冻精液技术要求、洲样、试验方法、辉定规则和标志、包装、运输、贮存本标准适用于山羊冷冻猜液（以乘简称“冻精”）。2规范性引用文件
下列文件小的条款通心维的引用而成为本标维的条款的修改单（不他括勘读房
究是否可使用这些数
GB/T 2828-
凡是门期的引用文件，其随后所有或修订版，离不适用于本标准，然而鼓励根据木标准达成协议的各方研的最新版
计划(IS0 28599,ILYr)
GB/T 41712003
GB/T 548
GB/T 1
术语和定
爱氮生物容
下列术解
文适用于本
前进运动精影
每剂量精凝
精子活力
在37℃环跪下
progre
前逊遂动
qotility
手占总精子数阀皆分率。
精子畸形率abnoapetn percelage畸形精子占总精子数首分率。
细菌嫩
bacleria count
每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数，3.5
冷冻精液fraten semen
十，其最新版本舒用了本标准。受质最限（AL）检紧的述批检验抽样定
辉序及拍散表
经特殊方法处理的精液超低温冷冻后在液氮中(-196℃)长期保存。4要求
4.1种公羊
应具有种用价值，体质健康，光遗传病，不允许有已发布的动物防按法中所期确的一类疫病中的任何一种疾病。
GB 20557—2006
4.2新鲜精液
色洋乳白色或淡黄色，精子活力≥65%，精子密度6×10°个/ml.，精子畸形牵15%。4.3冻精外观
4.3.1细管
细管无裂痕，两端封口严密，印制的标志清晰。4. 3. 2颗粒
颗粒人小均匀，表面光滑。
4.4冻精解冻后的要求
4.4.1活力
活方230%，
4.4.2前进运动精子数
前进运动精子数≥3×10°个
4.4.3精子畸形率
精子琦形率≤20%。
4.4.4细菌数
细菌数≤800个：
5抽样
5.1抽样检验方案
5.1.1生产方抽样检验
生产方和使用力为质岚保证概率把关，按照GI3/T15239—一1394中的第5章，采用LQ=8，模式A拘样方案检索·次抽样方案确定拙检公羊(冻精)的样本量。5.1.2质量监督抽样检验
质量监督抽样检验按照GB/T154182一1995中的第5章，该群体公单（冻精）为一监督总体，采用D.=10，出第二检验等级抽样方案确定抽检公羊（冻精）的样本量，其抽样检验程见附录B。51.3复检和钟裁检验
复检根据原抽样方案确定，仲裁需抽样按照 5. 1. 2规定方案和7. 3.2 的判定规则。5.2抽取样本
轴取伴本见附录 B.2. 6。
6试验方法
6.1外观
用目测汰,其结果应符合4.3的规定。6.2解冻后冻精
解冻方法及精子活小、前进运动精子数、精子略形率、细菌数的检验按陶录A规定的方法，其结巢应分别符合4.4中的规定，
6. 3检验分类
6.3. 1 常规检验
冻精产品的单项检验，足兜式检验小的一部分，上要是在每生产批入库前和销售出站前的检验。6.3.2型式检验
冻精产品全项目检验，是评定产品质查是否符合标准，在生产方抽样检验、质量监督抽样检验利复检、仲裁检验时所选定的检验。2
6.4检验项目
检验项目和检验周期见表1
检验类型
检验须目
外源，解游后活力
常规检验
外观、解冻后活力,是
型比检验
前逆运动精子数、畸www.bzxz.net
形率、细菌数
判定规则
7.1常规捡验
表 1检验项目,周期
要求中章、条
4.3、4.2.1
1. 1. 1~-4. 4. 4
试验方法中章条
样品所检验项目中任何一项不合格,则判为不合格。7.2型式检验
样品所检验项月中任何·项不合格，则判为不合格.7.3抽样检验对群体质量水平的判定7.3.1生产抽样检验的判定
引用GB/T2828.1--2003第3意中Ac--接受数,Re
GH 20557--2006
懿验周期
郊生产批人虐，山站。
牛产方为击保证每两个月为
一抽栓周期，在周期内避行次
抛检该群公羊(冻精)质量水Y，
质量监督检验可为不期。
拒收数，α-
不合格品数，
通过剂抽取样木检验按 GB/T 15239—1994中 5.11 的规定，当 d Ac,则判可接收，当αRe则判不可接收。
7.3.2质量监督抽样的判定
通过对抽取样本检验接CB/T15182一1995中5.9的规定.当dr（不通过判定数）则判为川通过，当7,则判为不可通过，见附录.2.8。8标志,包装、运输、贮存
8.1标志
8.1.1品种
种公羊的品种可用代号，代号为该品种第一、第二个汉字的汉语拼音大写字母。示例：波尔羊的品种代号“BE\。8.1.2内容
细管冻精应在管壁（或包装赖）工印制以下内容并H印制标志要清楚，a）生产站名；
b）公羊品种；
）公羊号：
d）生产日期。
8.2包装
细管冻精用专用的塑料管25支包装，颗粒冻精用灭菌纱布袋,每一包装量颗粒不得超过100粒。8.3运输
精运输过程中应有专人负责，烂存容器不得横倒及磁摘和强烈振动，保证冻精始终浸在液氮中。8.4购存
贮存冻精的低温容应符合GB/T5158舰定；专人负责及时补充液氮：冻精应浸在液氮中；每只公羊的冻精单独觉存，贮存冻精的容器每年清洗，消毒应不少于一次并更换新鲜渡氮；取放冻精时，冻精离开液氮的时间不得超过108。
GR 20557-2006
A.1：导言
附录A
（规范性附录）
山羊冷冻精液质量检验方法
本附录现定了通用的出单冷冻精液质量检验直然-其中用了GB/4789.2。A,2.冻精解冻
4. 2. 1器材、溶液
恒温水浴箱、5.0
4,2.2方法
A.2.2. 1细管
直接置于37
A.2.2.2颗粒
冻精置预预
溶化。
A.3精子活
中解冻
蓝38℃的
器材器液
显微镜或蔽量视装置、教
置、细管剪、50毫L程液器。
A.3.2方法
用50μ
下观察活力，坏境
鞭解冻后
戴载物台
观察3个视斯，注意癣层内
A, 3. 3 计算
精了活力按式(A.
精子活力：
第一视野洁力，
第二视野活力；
第三视贬活力，
A,4前进运动精子数的检查
A.4. 1器材.溶液
0mL.吸管、鬣子、2.9%柠檬酸钠液2.9%柠慧
宁逐动羽
行全面议
试替中，基浴辩练.适当播动，使冻精.
X18mm显微镜保温箱或们温装
盖玻开厚立即在200400倍显微镜装置变荧光辫上观察活力。每样品(A, 1)
血球数板、血色素管、2mL吸管、小试管.计数需、显微镜或显微电视装置、滴管、3.0必氯化钠溶。
A4.2方法
A.4.2:i稀释精液制备
A.4.2. 1. 1颗粒
GB20557-2006
用血色素管准确吸取10μL解冻精液，注人盛有1.99mL的3.0%氯化钠溶液的试管内，癌勾，使之成为200倍稀辩的稀释精液。
A. 4.2. 1. 2 细管
用色素管准确吸取10uL十解冻精液，注人有0.39mL.的3.0%氯化钠溶液的试管内，混匀：使之成为100倍稀释的稀释猎液
A.4.2.2计数
将血球计数板用血盖片将计数究盖奶用小吸吸圾一滴稀释精液于面盖片边缘，使精液自行流人计数案，均句充满个能有气潮或厚夏过大，然后在显微镜下或奥视荧屏上观察计数。每样品观察上下两个计数室，瑕平均！
A, 4. 3 计算
）每剂量中
逐纤数室计数结果误差超过5%，则重检，室25榨中方的总猜子数）×10(1mm内的精亲
数累1000
上式可简靠
每剂量中
式中：
5个巾
星前进运或
存量前进运动雅
每割量量精子数，单
精子畸飛
A.5. 1 器材、溶液
显微镜、载玻割
1000 斤（#
分类数器、小吸管
醇、甘油，所用试剂
A.5.2方法
A.5.2.1溶液配制
A. 5. 2. 1. 1磷酸盐缓冲液
磷酸二氢钠（NaH.PO，·21)
磷酸氢钠(NaHPO,-12H,O)
双蒸馏水定容至 100 nil
4.5.2.1.2中性福尔马林固定液
智水，蜕姆菌
稀释信数）或00（细管稀释倍数）×剂）万（细管剂冀值
料，酸
氯钠、磷酸氧二钠、甲醛、甲
40%中醛HCHU(使用前每100ml.甲醛用10.0g碳酸镁饱和后过被）磷酸一氢钠(NaHPO·2HU)
磷酸氢二钠（NaHIPO2H）
用0.89%氯化钠约50.0mL溶后加人8.0mL中和后的甲醛，再加0.89%氯化钠辫液定容至100,0 mL.
A.5.2、1.3姬姆萨原夜
姬姆萨染料
GB 20557--2006
H [C H,(OH),]
甲醇(CHOH)
66.0 rrnL
姬姆萨染料放入研钵中加少量书油充分研磨至无题粒为止，然后将甘油全部倒入并放入值温箱中保温继续溶解41，再加甲醇充分解混勺，过滤后贮于棕色瓶中待用，此存时间越久染色效果越好。A.5.2.1.4姬姆萨染液
姬姆萨原液
磷酸盐缓冲液
蒸馏水
现配现用。
A.5.2. 2制片染色
A, 5. 2. 2. 1 抹片
取解冻后精液一溺滴丁载玻片·端，用男·边缘光滑的载玻片与有样品的载坡片呈35°夹角，将样品均勾地拖布丁载玻片上，白然风下（约5min）。A.5.2.2.2固定
在门风T的抹正上滴上1.0mL～2.0mL中性掘尔乃林固定液，固定15min眉用清水缓缓冲去固定液，吹干或自然风于，每样品制作两个抹片。A. 5. 2. 2. 3染色
将固定好后的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把姬姆萨染液滴于猎和抹片之叫·让其充满平摘并使抹片接触染羧，染色1.5h后用清水缓缓冲去染液.晾干符检，4.5.2.3镜检
将制备好的抹片在显微镜（1000倍油镜）下观察。每个抹片观察200个以上的精子（分左、右两个区），取两片的平均值，两片的变异系数不得大于20%，若超过应重新制片。A 5.2. 4计算
精了崎形率按式(A3)计算：
Al×100
式中：
A-—精子畸形率,%;
A-畸形精子数,单位为个;
—精子总数，单位为个。
A.6细菌数的检查
A. 6. 1 器材、溶液
培养箱、超净化T作台、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻棒、大平、羊角匙高压蒸汽灭菌锅（或微波）、培养ⅢL、水浴箱、pH试纸（pII5.5~9.0）、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、放大镜、蒸溜水、营养琼脂培养基。
A. 6.2 培养基
营养琼脂培养基：接G13/4789.22003中5.1规定，A. 6.3操作步骤
A,6.3.1样品的制备及培养
A.6.3.1.1粒
以无菌揉作,将所检样品一粒接放于灭菌平血内。白然解冻后待用。同样品制两个乎血。6
A. 6.3. 1. 2细管
GB 20557—2006
以无菌操作，用酒精棉球擦抹解冻后的细管外整，剪掉超声波封山端，一支精液自接注入一个灭菌平血内：同一样品制两个平皿。A. 6. 3. 1.3平血
样品移人平E后，应及时将凉至46℃营养琼胎培养基（可置于16℃士1\C水浴保温）注人平血约15mL，并转动平血与精液样品混合均勾.同时将营养琼脂培养基倾人另一火菌平血内作空向对照。A.6.3.1.4培养
待琼脂培养基凝断后.翻转平血,置 36℃+1℃忙温箱内培养 48 h主2 h。A.6.4菌落计数方法
做平板菌落计效时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防避漏。在记下各平板菌落数后，求出同一样品两个平板的平均菌落数。A,6.5平板菌落数的计算
所检样品的细菌菌落数按式(A，4)计算：台
式中：
-—细菌数，单位为个
一第平血菌落数，单位为个，
第二平皿菌落数,单位为个。
GB 205572006
R.1导畜
附景Ｈ
（规范性附录）
山羊冷冻精液质量监督抽样捡验程序本附录给出了通用的山羊冷陈精液质监督脏样检验程序.对这样的特定对象产品，通过质量监督抽样检验对在群山羊(冻精)产品质量水平评价，B.2质量监督抽样检验程序
B. 2. 1 监督总体
已投产的一群山羊（漆精）鑫贝羊B. 2. 2确定质量特性
罚只山羊(冻精)质量
B. 2. 3 监督质量水平
规定监督质量水平
B.2.4监督检验等级
给出第二检验等红
B,2. 5检索监督抽样
在GB/T 15482-
给本标
表2巾,由
读出监督抽样方案
素处是箭头
介于两数值之间时，成其中数值较B.2.6抽取样本
样本应在监督总律（
群投产山羊
数，并在群体中山半按會排列，随批中冻精。
B.2.7检验样本
按照规定的检验项
B. 2. 8判断监督总体是否
产批的冻精为每
的方案
山羊，并分
单位亲品
质量水平在的行的相交处，
一个抽样案。监肾总体量
案抽山的样本（只）
羊冻猜昂圾出一生产
详本中熟不合格品数。
根据监督质量水可和监蛋影
级确定监督拙样方案，接R/T15
中5.9的见定检验
结果在样本中不合格品数d则翔群山羊（冻精)为不通过；样本中两各格品激，则判该群山羊(冻猜)通过，
B.2.9应用实例
质品监督删查需要评价某种羊场一慧产（生产冻精)的喷山羊冻精质量，监督质量水平D--10.用第二监督检验等级，由CB/T15182—199裹2查得监督批样力案为%2.7=2.该群种山羊中应拥检样本是2只山羊（冻精）按样本数在群体中随机确定2只样品山羊并在其冻精贮存罐中取出生产批中冻精，按规定的项月检验，若样本中不合格品数d不小于不通过判定数，，即r，则判该群山羊（冻精）不通过：如果样不中小合格品数d小丁不通过判定数r，即αr，判该群山羊（冻精）通过.
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