【商业行业标准(SB)】 肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检验方法

ICS11.220
备案号：24729—2008
KANKAca-
qE-ei-aC-eC-ae-Ceraac-CEC-Neca-iKAoNrKAaSB
中华人民共和国国内贸易行业标准SB/T10462—2008
肉与肉制品中肠出血性
大肠杆菌0157：H7检验方法
Method for the examination of entero-hemorrhagic E. coliO157.H7inmcats andmeatproducts2008-07-03发布
数码院伪
中华人民共和国商务部
2008-12-01实施
iKAoNiKAca=
qlE-ei-ac-ec-ae-Ceraac-Cc-eca-TKAKAaSB/T10462—2008
本标准是在参考了SN/T09732000进出口肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌Q157:H7检验方法》等标准及相关文献资料的基础上，通过试验和验证后制定。本标准的附录A是规范性附录
本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。本标准由中华人民共和国商务部居率技术鉴定中心负责起草。本标准主要越草人：赵志云、金社胜、工丽媛、昊爱华。范围
肉与肉制品中肠出血性
大肠杆菌O157：H7检验方法
本标准规定了肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌0157：H7的检验方法。本标准适用于肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌0157:H7的检验。2规范性引用文件
KAONKAa=
qu-ei-aC-ec-ae-Craac-CEC-Neca-ikAoNiKAaSB/T10462—2008
下列文件中的条款通过本标的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容或修订版均不适用于不标准，然而，鼓励根据本标准送成议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.17食品卫生微生物学检验肉与肉制品检验GB/T4789.282003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂SN/T0973进出口肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌O157：H7检验方法3设备和材料bZxz.net
3.1刀子、剪刀、镊子、L棒、均质杯等。3.2培养血：直径90mm。
3.3吸管：1mL（具有分度值0.01ml）、5mL（具有分度值0.1ml）。3.4移液器及吸头。
注：以上实验器材，在试验前应灭菌处理。3.5显微镜：10×~100×。
3.6均质器。
3.7冰箱0℃~4℃。
恒温水浴锅100℃65℃-68℃。
3.9生化培养箱：36℃1℃，41℃土1℃。3.10
天平：0~500g，感量0.1g。
电热干燥箱。
高压火菌器。
4培养基和试剂
4.1改良E.C新生需素增菌肉汤m(EC)n：（配方见第A1章）。4.2山梨醇麦康凯平板（SMAC）：（配方见附录第A.2章）。4.3月桂基磷酸盐胰蛋白陈MUG肉汤（LST-MUG）：（配方见附录第A.3章）。4.4普通琼脂：按GB/T4789.28—2003中4.7规定。4.5半固体培养基：按GB/T4789.28-2003中4.30规定。4.6三糖铁培养基：按GB/T4789.28-2003中4.26、4.27规定。胰蛋白陈肉汤：按GB/T4789.282003中3.13规定。4.7
4.8MR-VP用培养基、试剂：按GB/T4789.28—2003中3.4规定。1
SB/T10462—2008
4.9西蒙氏柠檬酸盐培养基：按GB/T4789.28—2003中3.5规定。kAoNKAca=
quE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-KANiKAa4.10氨基酸脱羧酶试验培养基（赖氨酸、鸟氨酸）：按GB/T4789.28—20C3中3.12规定。糖发酵管（棉籽糖、纤维二糖和山梨醇）：按GB/T4789.28—2003中3.2规定。411
5抽样
抽样数量及操作步骤按GB/T4789.17进行。6检验程序
O157:H7检验程序见图1。
南称取样品25g
吸取高
、1D-倍程霜
想的结果
非肠出血性大肠
好路O157:H7
非肠出血性大肠
杆菌O157:H7
颜裙色
明，边隆光滑，
排取产气无荧
养琼脂平板分离
EHEC O157-H7
乳胶凝集试验
肠出血性大肠
杆菊O157:117
斜面+8-
纤维二
，靛基质
柠机酸票
般氢醇牛，一
格链+
，有动力
非上述的反应结果
非肠出止性大肠
扇（157:117
图1肠出血性大肠杆菌0157：H7检验程序7操作步骤
KAoNKAca=
qu-ei-ac-ec-ae-Ceraac-cEC-Neca-iikAoNiKAaSB/T10462-—2008
7.1以无菌方法称取25g样品放人装有225ml灭菌的m（EC)n增菌肉汤的均质杯中，80001/min均质2min，加盖后置生化培养箱中，41C土1℃培养18h~24h。7.2将增菌肉汤10倍递增稀释成10-4,105、105稀释液。7.3用移液器分别吸取10-、10-5，10-6稀释液各C.1mL，滴于SMAC平板上，以灭菌L棒涂布均勾，于36℃士1℃培养箱中培养18h~24h。7.4在每个平板上挑取可疑菌落5~8个分别接种到LST-MUG肉汤中，放人培养箱36C土1℃培养24h（可疑EHECO157：H7菌露中心淡褐色，扁平透明，边缘光滑，直径约2斑m）。7.5挑选LST-MUG肉汤中产
气无荧光者，接种着通琼脂平板，放培养箱36℃土1℃培养18h--24h。
7.6生化试验：取7.5培养
℃，除V-P、靛基质试验培
后纯菌落分别接种各类生化培养基，置36℃养48h后加试剂观察外均在18h～24h观察。具体内容见表1表1
生化试！
三糖铁培养梦
山梨醇发酵
纤维杨拿车
胰蛋白
西蒙氏莲摩盐
赖氨酸脱羧膚
鸟氨酸
动力试验
棉籽糖发
杆菌015
生化学性状
持性反应
黄色，HS鹿性
紫色不耍
紫色不变
基质陶
MR阳性
出现红色环
红色：VP阴性
我绿色不变
蒙红色不变
常红色不变
不变色
铅穿刺裁扩散
变黄色
7.7结果报告：凡检测品按上方法分离出单个菌落（纯茵落符合生化特性反应、0157：H7标准血清凝集试验或EHEH7乳胶凝集试剂测试，呈阳性结果者即可报后该检测样品中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7
SB/T10462—2008
A.1改良E.C新生霉素增菌肉汤m(EC)n胰蛋白陈
3号胆盐
无水磷酸氢二钾
无水磷酸二氢钾
氯化钠
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
1000ml
TIKAONIKAa=
qu-ei-ac-ec-ae-Ceraac-cEc-Neca-iikAoNhikpa将上述成分溶于水后校正pH至6.9土1，分装后置121℃高压灭菌15min，取出后冷却至室温，以过滤灭菌的新生霉素溶液20mg/L，使最终浓度为20μg/mL。A.2山梨醇麦康凯平板（SMAC)
蛋白藤
猪胆盐（或牛羊胆盐）
氯化钠
山梨醇
0.01%结晶紫水溶液
0.5%中性红水溶液
1%亚碲酸钾溶波（最终量为）
制法：
1000ml
将蛋白陈、脉陈、胆盐和氯化钠溶解于4C2mL蒸馅水中。校正pHI至7.2，将琼脂加人于a
600mL蒸馏水中加热溶解，将二液合并，分装于锥形瓶内，高压灭菌（121℃，15min备用）：
临用时加热融化琼脂，趁热加人山梨醇，冷却至50℃55℃时加人结晶紫和中性红水溶液并b)
加人过滤除菌的亚碲酸钾溶液，使最终浓度为2.5mg/L，并加人头抱克（Cefixine)，使最终浓度为0.05mg/mL。
A.3月桂基磷酸盐蛋白陈（LST)MUG肉汤胰蛋白陈或胰酪陈Tryptone)
氯化钠
磷酸氧二钾（K.HPO4）
磷酸二氢钾（KH2PO）
月桂基磷酸钠
四甲基伞形酮B葡萄糖醛苷酸（MUG)水
10c0ml
iKAoNiKAca=
qlE-ei-ac-ec-ae-Ceraac-Cc-eca-TKAKAaSB/T10462—2008
将以上成分溶解于蒸馏水中，分装到有倒立发酵管的试管中，每管10mL，于121℃高压灭菌15min，最终pH6.8土0.2。
SB/T10462-2008
TIKANKAa-
quE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-iKANiKAa中华人民共和国国内贸易
行业标准
肉与肉制品中肠出血性
大肠杆菌0157:H7检验方法
SB/T 104622008
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三单河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.rn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印融厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16印张0.75字数10千字2008年9月第一版20C8年9月第次印刷书号：1550662-19115定价14.00元如有印装差错
由本社发行中心调换
版权专有侵权必究
举报电话：（010)68533533
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。