【国家标准(GB)】 动物源性食品中β-内酰胺类药物残留测定方法放射受体分析法

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T21174—2007
动物源性食品中B-内酰胺类药物残留测定方法
放射受体分析法
Determination of β-Lactams residues in animal derived food-Radio-receptor assay method
2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
中华人民共
国家标准
动物源性食品中β内酰胺类药物残留测定方法放射受体分析法
GB/T21174—2007
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
1/16印张0.5字数9千字
开本880×1230
2008年3月第一版
2008年3月第一次印刷
书号：155066·1-30884
如有印装差错
由本社发行中心调换
版权专有侵权必究
举报电话：（010)68533533
-HKAONr KAca-
本标准的附录A为规范性附录，
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局。本标准主要起草人：郑晶、林杰、黄晓蓉、杨方、陈彬、翁国柱、陈健。本标准系首次发布。
GB/T21174—2007
1范围
动物源性食品中β-内酰胺类药物残留测定方法放射受体分析法
-IrTKAoNiKAca-
GB/T21174—2007
本标准规定了肉类和水产品中β-内酰胺类药物残留测定的制样和放射受体分析方法。本标准适用于肉类和水产品中β内酰胺类药物残留的筛选测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992neqISO3696：1987）3试样制备和保存
3.1试样制备
从原始样品中取出部分有代表性样品，应尽可能将脂肪剔除。将可食部分放人高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500g试样。装人清洁容器内，并标明标记制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，用于测定的样品细菌数不能超过105个/g。
3.2试样保存
试样于一18℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2℃～6℃贮存72h。4测定方法
4.1原理
测定的基础是连续性受体免疫反应，样品中残留的β-内酰胺类药物和[C标记的肯霉素G分别与微生物细胞上的特异性受体结合。用液体闪烁计数仪测定样品中的[*C含量的计数值（cpm），计数值与样品中的β内酰胺类药物残留量成反比。4.2试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2.1CharmⅡ组织中的β-内酰胺类药物测定试剂盒\。4.2.1.1阴性对照浓缩于粉：赔存手2C～6C。使用时用10mL水溶解，配制成阴性组织液。阴性组织液可在2℃～6℃中保存48h。如长时间不用，可于一15℃以下冷冻保存2个月，使用时将其解冻，解冻后的溶液可在2℃～6℃保存24h。4.2.1.2MSU多种抗生素标准品：购存于2℃～6℃。使用时用10mL水溶解，配制成MSU多种抗生素标准溶液（其中青霉素G浓度为1000μg/L)。MSU多种抗生素标准溶液保存方法同4.2.1.1。4.2.1.3MSU萃取缓冲液浓缩干粉：使用时用1000mL水溶解，配制成MSU萃取缓冲液，可在1）CharmⅡ组织中的β-内酰胺类药物测定试剂盒和CharmⅡ液体闪炼烁计数仪是由CharmScience公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。1
GB/T21174—2007bZxz.net
2℃～6℃保存2个月。
4.2.1.4M2缓冲液浓缩干粉：使用时用50mL水溶解，配制成M2缓冲液，可在2℃~6℃保存2个月。
受体试剂片剂：绿色片剂，于15℃以下冷冻保存4.2.1.6［\C］标记的青霉素G片剂：黄色药片，于一15℃以下冷冻保存。4.2.21mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL。4.2.3闪烁液。
4.2.4pH试条。
4.2.5离心管：50mL。
4.2.6硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。药片压杆。
仪器和设备
4.3.1CharmⅡ液体闪烁计数仪\。离心机：4000r/min。
4.3.3高速组织捣碎机。
4.3.4涡旋混合器。
4.3.5加热器：90℃。
4.3.6移液器：1mL~5mL,100μL~1000μL5分析步骤
5.1对照液的配制
5.1.1阴性对照液的配制：取2mL阴性组织液（4.2.1.1)，加入6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3）中混匀，制成阴性对照液，该对照液可在室温下保存6h，5.1.2阳性对照液的配制：取0.3mLMSU多种抗生素标准溶液（4.2.1.2)，加人6mL阴性组织液(4.2.1.1)中混勾，然后从中取2mL混合溶液加人到6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3)中混匀，制成阳性对照液，该对照液可在室温下保存6h。5.2试样提取
5.2.1称取10g（精确到0.1g）均质好的试样于50mL离心管，加人30mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3），涡旋振荡5min。
5.2.2将离心管置80℃土2℃孵育器内孵育30min，再将离心管置冰水内10min后，3300r/min离心10min。
5.2.3吸出上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混入上清液内。恢复室温后，用pH试条检查pH是否为7.5。如不准确，用M2缓冲液（4.2.1.4)或1mol/L盐酸调整至pH7.5，即为样品测试液。5.3测定
5.3.1用药片压杆的平端将受体试剂片剂（4.2.1.5)压入一洁净的玻璃试管内，加300μL水到试管内用涡旋混合器振荡10s，使药片振碎均匀。5.3.2用移液器加2.0mL样品测试液，或阴性对照液（5.1.1)或阳性对照液（5.1.2）到试管内。用涡旋混合器振荡10s，上下来回10次。于55℃士1℃孵育2min。5.3.3从孵育器中取出试管，用药片压杆的平端压入[1*C]标记的青霉素G片剂（4.2.1.6)，用涡旋混合器振荡10s，上下来回10次。置55℃士1℃孵育2min。5.3.4取出试管，于3300r/min离心3min。离心停止后立即取出试管，倒掉上清液，用吸水材料吸千管口边缘处的污渍。
5.3.5加300μL水到试管内，振荡并混合均匀（新鲜牛肉组织样品用300μL10%L-抗坏血酸溶液）。2
再加入3mL闪烁液（4.2.3）到试管内。将试管塞盖上后，涡旋混匀。5.3.6将试管放入液体闪烁计数仪内，读[C]项的计数值。注：建议1次同时进行6支试管以下的测定。5.4控制点的确定
-KAoNKAca-
GB/T21174—2007
5.4.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。5.4.2筛选水平为25μg/kg时，控制点设定步骤：称取10g均质好的同类空白组织样品，加入0.25mLMSU多抗生素标准溶液，充分混勾制成标准样品，按5.2和5.3进行测定。测定6个非重复的加标样品的计数值，求出平均值乘上系数1.2，即为筛选水平25μg/kg的控制点。5.4.3当筛选水平大于25ug/kg的样品时，可将样品测试液适当稀释后测定。5.5结果判定
5.5.1当样品的计数值天于控制点时，判定为“阴性”。5.5.2当样品的计数值小于或等于控制点时，应重新测定样品，且同时需要测定阴性对照液和阳性对照液。阴性对照液和阳性对照液的计数值，需在正常范围波动（见第A3章）。当重新测定样品的计数值大于控制点时，判定为“阴性”；小于或等于控制点时，则判定为“初筛阳性”。6确证
本方法为初筛方法，阳性结果应用其他方法进行确证。7检测限
在肉类和水产品中，本方法检测限以青霉素G计β内酰胺类药物（包括青霉索G、氨芋西林、阿莫西林、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢噻呋）总量为25μg/kg。GB/T21174—2007
附录A
（规范性附录）
仪器和试剂日常监测
A.1CharmⅡ液体闪炼计数仪零点校准取空的专用试管放人液体闪烁计数仪计数，计数值需小于50，否则需调零。如测得的计数值偏大，可能由手液体闪炼计数仪有天量静电存在所引起，可用湿抹布将试管外壁湿润后放人液体闪炼计数仪进行测定，童复几次后可以送到正带值。A.2［\C］通道校准
取[C]标记的青霉素G片剂加人玻璃试管，加300μL水到试管内，振荡使沉淀物完全破碎。加3mL闪烁液到试管内涡旋混匀至试管内没有不均一的云状物。将试管放入液体闪烁计数仪内，读[14C]项和[\H]项的计数值。［14C]项的计数值应大于5000，且[\H]项与[14C]项的计数值的比值应小于0.3。
A.3试剂监测
A.3.1对每一批新的试剂需测定零质控标准，测定3次阴性对照液计数值，其平均值即为零质控标推。当遇到样品怀疑“初筛阳性”时，通过测定阴性对照液和阳性对照液计数值与作为零质控标准的计数值比较，可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常。A.3.2正常情况下，阴性对照液计数值在零质控标准计数值上下波动，幅度约士20%。A.3.3正常情况下，阳性对照液计数值小于控制点。A.3.4如果测定结果与A.3.2或A.3.3不相符，应重新测定零质控标准和控制点，并重新测定样品。版权专有侵权必究
书号：155066·1-30884
GB/T21174-2007
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。