【国家标准(GB)】 蜂蜜中双甲脒及其代谢物残留量测定液相色谱法

ICS 67. 180. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T21169—2007
蜂蜜中双甲及其代谢物残留量测定液相色谱法
Determination of amitraz and metabolite residues in honey-Liquid chromatography
2007-10-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
中华人民共和国
国家标
蜂密中双甲滕及其代谢物残留量测定液相色谱法
GB/T 21169—2007
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2008年3月第一版
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2008年3月第一次印
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本标准的附录 A 为资料性附录,前言
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口，本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局GB/T21169—2007
本标准主要起草人：赵增运、陈惠兰、林宏、吴斌、丁涛、徐锦忠、沈崇钰、朱成品、蒋原、陶宏锦.
一范围
蜂密中双甲及其代谢物残留量测定液相色谱法
GB/T 21169—2007
本标准规定了蜂蜜中双甲及其代谢物残留量液相色谱測定方法提要、测定步骤、结果计算。本标准适用于蜂密中双甲及其代谢物残留最的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标谁的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G13/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992,neqIS）3696：1987）3方法提要
蜂蜜样品中双甲及其代谢物用正已烷、异丙醇混合提取液提取，提取液浓缩后，依次用乙睛、水定容，用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水。4.2 乙:HPLC级，
4.3正已烷；优级纯。
4.4异内醇：分析死。
4.5混合提取液：将60mL的正已烷与30mL的异丙醇混合。4.6氢氧化钠:分析纯。
4.7氢氧化钠落液：0.1mol/L。称取4.0g氢氧化钠，溶于1000mL水巾。4.8乙酸铵溶液：0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵，溶于1000mL水中。4.9双甲胀标准品(纯度>99%）。4. 102,4-—甲基苯胺标准品（纯度>99%)。4,11 双甲滕标准储备溶液:0. 1 mg/ml。推确称取适量的双甲脉标难物质(4. 9),用乙腈配成C. 1 mg/mL的标准储备液。储备液保存于4℃冰箱中,根据需要再用乙睛稀释成适当浓度的标准工作液。保存3个月。
4.122,4-二甲基苯胺标推储备溶液：0.1mg/mL。准确称取适量的2，4-二甲基苯胺标准物质（4.10），用乙睛配成0.1ng/mL的标准储备液。储备液保存于1℃冰箱中，根据需要再用乙睛稀释成适当浓度的标推工作液。保存3个月。
5仪器
5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。5.2 分析天平;感量 0. 1 mg。
5.3天平感量0.01g。
GB/T21169--2007
5.4旋转蒸发器或相当者。
5.5 旋涡混器。
5.6 移液管:10 mL,5 mL,1 ml.。5.7有机滤膜：0.45μm，
5.8离心机：3000r/min，10000+/min。5.9具塞离心管：50mL，l.5mL。6试样的制备与保存
6. 1 试样制备
对尤结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅勾，冷却至室温，均分成两份，分别装人样品瓶内作为原始样品。密封并标明标记。
6.2试样保存
将试样于常温状态下保存。
注：在取样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤
7.1提取
称取5g试样（精确至0.01g）。置于50mL具塞离心管中,加人5.0mL氢氧化钠溶液,旋涡混1min，再加人15.0ml.混合提取液，旋涡混匀1min，混匀后于30001/min下离心5min，吸取上层液转移至50mL离心管中：再加人10.0mL止已烷，旋涡混匀1min，混匀后于3000r/min下离心5min：吸取上清液转移至50mL离心等巾，于35℃40℃的水浴中旋转蒸发浓缩至干，用0.50ml乙游解残渣,转移至 1, 5 ml.离心管;再加人 0. 50 mL 水溶解线，合并转移至 1.5 mL 离心管，在10000r/min离心5min，溶液过0.45μm的滤膜到进样瓶巾，供液相色谱仪测定。7.2测定
7,2. 1 液相色谱条件
色谱柱：C，5μm150mm×4.6mm（内径），或相当者：b)
流动相：乙睛（A）+0.02mol/L乙酸铵水溶液（B)；c）
梯度洗脱程序:0 min~~6. 0 min 35% A, 6 min~8. 5 min 35% -90% A, 8. 5 min~16 min90%A,16. 0 min~16, 1 min 90%~~35%A,16.1 min~20, 0 min 35%A;流速：1.0mL/min
e）柱温:30℃；
f）进样量：20μ
g) 检测波长:235 nm(0 min~10.0 min);289 nm(10.0 min~20.0 min);检测器：紫外检测器。
7. 2. 2液相色谱测定
根据样液中双甲踩残留量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样中双甲滕及其代谢物响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测定。在上违色谱条件下，效甲魅的保留时间约为13.44min，其代谢物的保留时间药为721min，标推品色谱图参见图A.I。
7.3空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。2
8结果计算
GB/T 21169—2007
8.1结果用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中双甲滕残留量，计算结果需扣除空白值。A, -G.V.
Asi +mt
式中：
试样中双甲残留含量，单位为毫克每干克(tng/kg)；样液中双甲滕的峰商积：
标推工作溶液中双甲咪的浓度，单位为微克每毫升（μig/mL）；样液最终定容体积，单位为亳升（mL)；标推工作溶液中双甲的峰面积；最终样液代表的试样量，单位为克（g)。.(1)
8.2结果用色谱数据处理机或按式(2)计算试样中代谢物换算成双甲滕残留量，计算结果需扣除空白值。
式中：
At.c.V×1.21
X，=全
Asa m2
试样巾代谢物换算成双中踩残留含量，单位为毫克每于克（mg/kg)；样液中双甲咪代谢物(2,4-二甲基苯胺)的峰面积；(22
标工作溶液中双甲滕代谢物(2,1-二甲基苯胺)的浓度，单位为微克每毫升(μg/m1.);样液最终定容体积,单位为毫升（mL)；标准工作溶液中双中代谢物(2,4-中基苯胺)的蜂面积;最终样液代表的试样量，单位为克（g）；由2.4-一甲基苯胺分子质量换算为双甲胖分子质量的转换系数。8.3双甲滕残留总量按式(3)计算。X, = X, -+ X
式中：
X:-----试样中双甲残留总含量，单位为毫克每T克(mg/kg)；一试样中双甲残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg)；Xi
X，—试样中代谢物换算成双甲咪残留含量，单位为毫克每千克mg/kg）。9检测低限、回收率
9.1检测低限
本方法的检测低限双甲为0.01mg/kg，双甲咪代谢物（2，4-二甲基苯胺)为0.02mg/kg。9.2回收率
（3）
蜂密中双甲胀在添加水平0.010 mg/kg~0.100mg/kg范围内，其回收率为 99.8%～100.0%；双甲咪代谢物（2，4-二中基苯胺）在添加水平0.020mg/kg~0.100mg/kg范围内，其回收率为71.7%~73.G%。
GB/T21169—2007
附录A
【资料性附录】
标准品色谱图
图 A. 1双甲胖及双甲胖代谢物(2,4-二甲基苯胺)标准品的液相色谱图16 min
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