【国家标准(GB)】 蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定液相色谱-串联质谱法

ICS 67.180.10
中华人民共和国国家标准
GB/T 21168—2007
蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定
液相色谱一串联质谱法
Determinatiou of tylosin residues in honey--LC-MS/MS method
2007-10-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T 21168--2007
本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国河南出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：吴斌、魏蔚、沈伟健、徐锦忠、陈惠兰、沈崇钰、赵增运、黄娟、蒋原、陶宏锦。I
1范围
蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T 21168—2007
本标准规定了蜂蜜中泰乐菌素 A残留量液相色谱-串联质谱测定方法提要、测定步骤和结果计算。本标谁适用于蜂蜜中泰乐菌素A残留量的测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标推的引用而成为本标准的条款。凡是注月期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标谁达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（G1/T66821992.ne9ISO3696：1987)3方法提要
试样用碱性溶液溶解后，泰乐菌素药物残留用固相萃取柱萃收，洗脱液浓缩后用甲醇溶液定容·液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682规定的一级水。4.2甲醇：HPLC级。
4.3碳酸钠：分析纯。
4.4碳酸氢钠:分析纯。
4.5甲醇+水(2+8)：最取20mL甲醇（4.2)与8Vml.水混合。4.6周相萃取柱：HLB或相当者，60Ⅱg，3mL。4.7泰乐菌素A标雅：纯度≥95%。4.8泰乐菌素A标准储备溶液：1.0mg/mL。准确称取适量的泰乐菌素标准物质（4.7)，用甲醇配成I.0 mg/mL的标准储备液。储备液贮存在4℃C球箱中，可使用两个月。4.9泰乐菌素A标准工作溶液：用空白样品提取液分别配成泰乐菌素浓度为2.0ng/mL5.0ng/mL、10.0 ng/mL、50.0 ng/mL,100. 0 ng/mL,200.0 ng/mL标准工作溶液。标准工作溶液在 4 C保存,可便用一周。
4.10Na.CO-NaIICO，缓冲液(0.1mol/I.):称取5.3g碳酸钠和4.2名碳酸氢钠用适最水溶解后，稀释至l000mL。
5.1液相色谱-串联质谱仪；配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01名各一台。5.3氮吹仪。
5.4旋涡觀勾器。
5.5贮液器：50tmL，
GB/T 21168--2007
真空录真空度应达到80 kPa。
移液器：10mL。
离心管，50m，具第。
5.9 刻度离心管:10 mL。
5.10滤膜过滤器：0.45μm，有机相。6试样的制备与保存
6.1试样制备
对无结晶的实验室样品，将其搅拌均均。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅勾，拎却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。
6.2试样保存
将试样于常温状态下保存。
准：在取样和制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残册物含量的变化。7测定步骤
7.1提取
称取 5 g试样,精确到 0. 01 名。置于 50 mL具塞离心管中,加人10 mL 0. 1 mol/I NazCO-NaHCO,缓冲溶液，于液体混勾器上快速混合 1min,使试样完全溶解。将混合液衡入下接Qasis HLB柱（4.6)的此液器中,使用前分别用 3 mL 甲醇和 5 mL水预处理,保持柱体湿润。溶液以不高于 2 rmL/min 的流速通过Oasis HLB固相萃取柱,待溶液完全流出后，用 5 mI.水洗离心管和液管并过柱，然后再用5 mL甲醇十水(4. 5)洗杜，弃去全部淋出液。在 65 kPa 的负压下,减压抽干 10 min,最后用 5 mL 中醇（4.2)洗脱，收集洗脱于101nL刻度离心管（5.9)中，于50℃用氯气吹干仪吹于，用甲醇（4.2）十水(4.1)(30+70)定容至1.0mL，过0.15μm的滤膜到进样瓶中，供液相色谱-质谱仪测定。7.2测定
菠相色谱条件
色谱柱：C，5 μm，150 mm×2,1 mm(内径)或柑当者；流动相：水(A)+中醇(B);
流速;0.25 mL/min;
梯度.0min~5.0min20%~90%B，5.0min~7.0min90%B,7.1min~~9.0min20%B;d)
柱温:30 ℃;
进样量:25 μL。
串联质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI），正离子监测；b)
扫描方式：选择离子检测(SRM)
雾化气、鞘气为高纯氮气，砸撞气为高纯氢气；电喷雾电压，碰撞电压等自动优化至最伟值；定性离子对、定鼠离子对和碰撞气能见表 1。e
表 1定性离子对、定量离子对和碰撞气能量定性离子对(m/2)bzxz.net
915.5/174
916,5/772.5
定量离了对(m/z)
916,5/174
碰撞气能量/eV
7.3液相色谱-串联质谱测定
GB/T21168—2007
泰乐菌素A标谁工作游液(4.9)在液相色谱质谱设定条件下分别进样，以样品峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中泰乐菌素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，泰乐菌素A参考保时间为6.53min。泰乐菌素标准物质色谱、质谱图分别参见图A,1、图A.2.7.4空白试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算
结果用色谱数据处现机或按式(1)计算，计算结果需扣除空白值：X=
式中：
X——试样中被测组分残留量，单位为微克得干克(g/kg)；e从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；V..样品溶液定容体积，单位为毫升（mI）：m—样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。9检低限和回收率
9. 1检测低限
本方法对蜂蜜中泰乐菌素A残留量的检测低限为1.0 g/kg。9. 2回收率
蜂蜜中泰乐菌素A添加浓度及平均回收率的试验数据：在1.0μg/kg时.国收率范围为78.4%~107.8%；在5.0μg/kg时，间收率范围为70.1%89.5%；在 10. 0 μg/kg时,间收率范围为 77. 2%~101,1% ;在40. 0 g/kg时,回收率范围为 73.4%-~94.8%。（1）
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附录A
资料性附录）
标准物质总离子流图及质谱图
泰乐菌素 A标准物质总离子流图图A1
450.60 478.88
389,13
506992
mhm-phmmtr
泰乐茜素A标准物质质谱图
GB/T 21168—2007
d 804. 80. 4
GB/T 21168-2007
打印日期：2009年5月15日
中华人民共和国
国家标准
蜂蜜中泰乐菌茵素残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T 21168—207
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开本 880×1230 1/16
印张0.75
字数9千字
2008年3月第一版
反2008年3月第一次印刷
书号：155066-1-30910
1定价14.00元
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