【商检行业标准(SN)】 从精液中分离马病毒性动脉炎病毒试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1377—2004
从精液中分离马病毒性动脉炎病毒试验操作规程
Protocol of the isnlation of eqauinc viral arteritis virus from stallions semen2004-06-01发布
中华天民共和国
国家所量监督检验检疫总局
2004-12-01实施
本标难的附求A是规范性附录。
本标制由国家认证认可监督受理委员会提出并归口，牢标准热单单位中华人风共和国山东出人境检验检度局。本标准土要起草人：梁成球、未来华，王树锋、王丽.本标准系首改发布的出人境检险检按行业标难，S.N/T 1377—2004
1范围
从精液中分离马病性动脉炎瘤毒试验操作规程
本际准规定了从帮山分离马病示性动脉资编牵试验方法。本标洗适用示从精液中分离凸病毒件动脉资病毒。2媚语
下列缩路语适第于本标准.
2. 1EAV.马病未性动脉炎病率。2.2MEM：含非必需氨基酸的细胞培弃夜，3收器设备
3.1趋学工作台减生物专会拒，
一氧化處坞葬箱。
3.3到冒显敲设Www.bzxZ.net
3.4般意忙在道
3.5正浓器和激孔滤膜(0,22 μr).3.6
蒸汽消祥器
染量细胞培养板（9S孔）.
3.9可调微量转微器和吸说（207)。3.10电子（,1m~2）
管1m2mI5mL10mL
4试剂
4.1抗生系览存链：
4. 27.5破酸氢谢渐液，
4.3卵胞消化液0.02%E1A)，
4.4标难病毒证细爬案；一196没数>冻件备用。5N 1377--2004
4.4.1标准遍毒抹，马米能动球炎察事（F-imrA.-itinVi-un.AVvBicyrus媒.4.4.2细胞系，总准细胞(RK-I5)。4.5细肥培养液细胞维持液，
4.61%细胞染色报，
4. 77, 效甲,片纤维素
5操作方法
5.1精液采菜
5.1.：拆色于净，求菌的精脊（如假朋造闲药有），采精不得含有防腐剂或消变剂。1
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5.1.2采常精液吋可同时果两受，也可在不同时间各架一份，应乘集含精子置多的部分（射粘中期>作为待检样品进行病毒分商，
5.1.3采精后应文即将含精较的采相些放人醇冰小或冰金中，尽快送到实股室，如果不垂及时送实验童，可将精被背时冷陈于，-以产保存(不趋过了d)，冷乐精波不影响病毒的分。5.2病毒分离
5.2.1将精液进行预处甲，相声波资辨二次，每次二53。5.2.2在℃下10离心11m沉提提子细喝。5.2.3上请袭用维持液做10-1-10-5系列移辑，接种F长成单尽的R-13细胞瓶或细脑培荞板.上，每个滴压接种两廉或满孔，同时说立细胞对照和阻性对照，单岸细胞仅门持液做脑对照，用6倍稀择的标准病毒抵种做阳性对照。5.2.4加炭匀使之均勾分帝于整个细胸层，5.2.5在5以二载化磁恒盘湿二氧化谈培等箱中释11。5.2.6加人含0.75%举用减许维率的培养液，咨杀，5.2.7瑞养2d~Gd后，在显微锐下观察CPF情况(泛跑圆销、脱离、裂超）。5.2.B血集不出型CI上,应言传一次、即将卵脑培器将陈商次再楼种到单层细胞培养5d-~7后，用细秘典色浓（L作教为U，品幅尔马林强汁站品紫液)染色5.2.9用微量中简中和试验或其他方法对分离的病毒进行鉴定。6站果别定
偿套各种对照武验，组数划服常带，P正；阅性时照自现明显的P，说明试验成立：如果试验组出现明显的CTE，淡晚为细脑则缩脱落、裂解、则判关病乘分离阳性划果没存明显的CFF,给降求荣任后，细服单白细膨壁不完整的死细胞区城，也为病毒分离阳丝。如果分离的细脑培养物随被FAV羽性血清中和或其他方法，购分施的病靠火EAV2
A.1抗生素贮存液
（规范性录）
试剂的配制
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用灭菌牵谁水配成每李升含10C331有再离和0链靠素的抗生素忙存液，月微礼然膜(0.22pm)过忘除虚，分装戏mL/，一2C℃陈各用。保存期不过6A.27,5%醚酸甄钠溶液
4.5线酸氛纳漆断1WUml.热水,正微开法膜(0.33rr)过达除当，分装成2ml,1C:冷起备用。保有期不巢过山
A.3细胞消化商(0.C2%EDTA)
EDTAZ三胺四之段二,VerscEsu>LA.R.1熟化钠A.R.）
氯北师（A.K.）
磷酸氢二构!A.R.
磷酸氢钾(A.R.)
加双乘术半【m充分率新，分装成小版，1[高正或尚10mi：冷预各用。信存期不过s d.
A.4细胞培养磁和维持滤
红泡培养滋，含：0火能的无需怡兰血清(FS)的MEM培养。细胞维持液：3华光能的无胎牛而清(TRS)的MTM跨养基.细胞清亲液式维持波均片微孔滤获0.22m过使涂菌，分使成小作，4冷燃备用.保存期不制过63，生时加1护牛索吃存被整液虚为每案升MEV培养含1001和产g）井月7.5%质酸氢动溶液调pTI值率.0.7.2.
A.55%站晶案延存液
256细晶求物铸解于173m..纯艺醇.下定容至300)mL.,过滤除去统晶。A.61%细胞策色液
5%站品紫产存液m.生理盐求（).兴氯化销5m1抵马林（含平醛2m.混勾分装必-，4保存备用。保学不超应90，A.75%羧甲基纤雄末
践手基纤壁素称 7. 5 多率严于 1cc n:L. 双患本,充分扰拌混可,121 亡:离压灭南 15 trnin。 分装成5mlL一瓶，4保方备用。保任期不起过33d
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