【国家标准(GB)】 饲料中维生素B6测定方法

中华人民共和国国家标准
饲料中维生素B6测定方法
Method for determination of vitamin Be in feed1主题内容与适用范围
GB/T 14702—93
本标准适用于配合饲料，预混合饲料，浓缩饲料中所添加维生素B。的测定。测定范围为0.08～3.5μg/ml。
2原理
用水提取，在pH7条件下，用荧光法测定维生素B。。3试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸溜水或相应纯度的水。3.1pH7缓冲液
称取29.3023g磷酸氢二钠（NazHPO。·12H2O,GB1263)和3.8115g柠檬酸(C.HO，·H2O，HGB3296）于100mL容量瓶中，用煮沸后冷却的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。3.2维生素B。标准贮备溶液
称取40mg（中国药典参照标准）维生素Bs，或复合维生素（中国药典参照标准）B40 mg，B100mg，Bz50mg（精确至0.0001g）于100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1ml含400μg的维生素 Bg。
3.3维生素B。标准工作溶液
吸取（3.2)贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀释至刻度，混匀，此液1mL含4μg的维生素 Bgo
4仪器设备
4.1荧光分光光度计；
4.2分析天平感量0.0001g。
4.3实验室用器皿
容量瓶1000mL，100mL，50mL，25mL。刻度移液管210 mL,5 mL，l mL。5分析步骤
5.1试样的选取和制备
选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm孔筛，用四分法缩减至100g，密封保存，以防试样维生素 B,变化或变质。
5.2测定步骤
国家技术监督局1993~11-06批准1994-06-01实施
5.2.1维生素B.的提取
GB/T14702-93
称取试样（配合饲料，浓缩饲料，预混合饲料）0.5～2g，（精确至0.0001g）于100ml容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡1～2min，静置待沉清，或离心（400r/min）10min。5.2.2试样的测定
移取试样的上清液1mL（≤40μgVB）于25mL容量瓶中，加入（3.1)pH7缓冲液至刻度，混匀，用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强度。同时做空白试验。
5.2.3工作曲线的绘制
取0.000.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL维生素B标准工作液（3.3）分别于25mL容量瓶中，加入pH7缓冲液（3.1)至刻度，混匀，用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm发射波长395nm测定其荧光强度，以荧光强度为纵坐标，维生素B。量为横坐标，绘制工作曲线。6分析结果计算和表述
维生素B。的含量（mg/kg)按下式计算：VB,(mg/kg)-MX D/W×(1 000/1 000)=MXD/W1—一工作曲线上查得维生素B。含量，μg/mL；式中：M
W—试样的质量,g;bzxZ.net
D—试样的总体积,mL。
7允许差
7.1每个试样称取两份平行测定，取算术平均值为测定结果并保留两位小数。7.2维生素B。含量少于40mg/kg以下，平行测定结果相对差值不大于10%，维生素B。含量大于40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于5%。附加说明：
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出，本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准起草人刘素云、张瑜、赵兰芝。208
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