【农业行业标准(NY)】 苹果无病毒苗木

—1997
本标准根据农业部1993年下达的制定行业标准《苹果无病毒苗木繁育规程》计划编制。本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由中国农业科学院果树研究所、河北农业大学、农业部农业司、山东省农业厅果茶站、辽宁省农业厅果蚕站负责起草。
本标准主要起草人：王国平、马宝、史光瑚、孔庆信、孙守友、洪霓。261
1范围
中华人民共和国农业行业标准
苹果无病毒苗木
Virus-free seedling of appleNY329—1997
本标准规定了苹果无病毒苗木的质量要求，适用于全国各苹果苗木产地及栽培区。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB8370—87苹果苗木产地检疫规程GB9847--88苹果苗木
GB12943--91苹果无病毒母本树和苗木检疫规程3定义
本标准采用下列定义。
3.1苹果无病毒母本树
指用苹果无病毒原种材料繁育的用于提供品种接穗或营养系砧木的母株。3.2苹果无病毒砧木
指用无病毒无性系砧木母本树材料繁育的无性系砧木或未经嫁接的实生砧木。3.3苹果无病毒苗本
指用无病毒接穗和无病毒砧木繁育的苹果嫁接苗或用无病毒材料通过组织培养方法繁殖的苹果自根苗。
4质量要求
4.1不带下列病毒及类病毒。
4.1.1苹果绿皱果病毒Applegreen crinklevirus。4.1.2苹果锈果类病毒Applescarskin viroid。4.1.3苹果花叶病毒Apple mosaicvirus。4.1.4苹果褪绿叶斑病毒Applechlorotic leafspotvirus。4. 1.5 苹果茎痘病毒 Apple stem pitting virus 4.1.6苹果茎沟病毒Apple stem grooving virus。4.2不带GB8370中规定的检疫对象。4.3苗木规格符合GB9847标准的质量要求。5检测方法
5.1田间症状鉴定法
中华人民共和国农业部1997-12-19批准262
1998-05-01实施
NY 329 --- 1997
5.1.1苹果绿皱果病毒、锈果类病毒和花叶病毒三种显性病毒在苹果树上有明显症状，可直接在田间进行观察。
5. 1. 2 三种显性病毒在苹果树上的症状见表 1。表1
病毒种类
苹果绿皱果病毒Www.bzxZ.net
苹果锈果类病毒
苹果花叶病毒
5.2指示植物检测法
主要症状
病株的幼果表面出现水溃状斑块，逐渐发展为凹凸不平畸形果，病部果皮逐渐形成木栓化呈锈色
锈果型：先从顶部出现淡绿色水溃状斑块，最后向果梗扩展成栓化锈斑与纵纹。花脸型：果实着色后表现红绿相间花脸状。锈果-花脸复合型：呈现有锈斑又有花脸的复合症状斑驳型：从小叶脉开始发生鲜黄色病斑，形状不规则，大小不环斑型：病树叶上产生圆形或椭圆形黄色环斑。花叶型：病斑不规则，有较大的深绿、浅绿相间色。条斑型病树叶片沿叶脉失绿黄化。镶边型：病叶片的边缘发生黄化5.2.1苹果褪绿叶斑病毒、茎痘病毒、茎沟病毒三种潜隐病毒和花叶病毒、锈果类病毒可采用木本指示植物检测法。
5.2.2检测上列五种病毒的木本指示植物是：a）苏俄苹果（R12740-7A）：检测苹果褪绿叶斑病毒；b）司派227（(Spy227)或光辉（Radiant）：检测苹果茎痘病毒；c）弗吉尼亚小苹果（Virginia crab）：检测苹果茎沟病毒；d）兰莲王（Lord lambourne）：检测苹果花叶病毒；e）国光（Ralls）：检测苹果锈果类病毒。5.2.3五种病毒在木本指示植物上的主要症状表现见表2。表2
病毒种类
苹果褪绿叶斑病毒
苹果茎痘病毒
苹果茎沟病毒
苹果花叶病毒
苹果锈果类病毒
指示植物症状
5月中下旬以后，在苏俄苹果叶片上出现褪绿斑点，多发生于叶片一侧，病株叶片较健株叶片小。有的向一侧弯曲呈舟形叶，植株矮化，或生长衰弱5月中下旬以后，在光辉指示植物上出现叶片反卷，植株矮化。在Spy227指示植物上出现叶片反卷、皮层坏死等症状只在弗吉尼亚小苹果上表现症状，病株较健株矮小，叶片小而色淡，有的病株嫁接口周围肿胀，接合部内有深揭色坏死环纹。木质部产生深褐色纵向陷条沟，严重时从外部即可辨认。在温室鉴定中，表现叶部黄斑或环状斑、叶片扭曲变形叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑
弯叶和茎干锈斑、坏死斑
5.2.4木本指示植物检测法可在田间和温室内进行，其操作步骤分别见附录B和附录C。5.3血清学检测法
5.3.1本法采用A蛋白酶联免疫吸附法(PAS-ELISA），其操作步骤见附录A。5.3.2凡能制备出抗血清的苹果病毒均采用本法进行检测。6检验规则
检验步骤
NY329—1997
6.1.1档案核查：在进行病毒抽样检测之前，要检查无病毒苗圃是否有无病毒苗木生产许可证和无病毒苗木准产数量证明，并要对其使用的接穗，砧木的来源、数量，以及苗木类型、数量进行查核。6.1.2圃内检验；苹果无病毒苗木的病毒检测在无病毒苗木生长期间抽样进行。病毒检测方法见本标准第5章。
6.1.3出圃检验：园艺性状的质量检验按GB9847规定执行。发现GB8370中规定的检疫对象时，按该规程处理。
6.2抽样
6.2.1菌木规格和检疫对象的检验，其抽样量分别按GB9847和GB8370规定执行。6.2.2病毒检测抽样数量：繁殖材料来源于无病毒母本园的苗圃，每宙抽检10株，每增加1亩增加2株：直接从国外引进的无病毒种苗或砧木原种，每株都需检测，由此繁育的苗木，按前述办法抽样进行病毒检测。
6.3判定规则
抽检不带前述6种苹果病毒、GB8370中的检疫对象，苗木规格符合GB9847指标要求的为合格，否则为不合格。
7标志、包装、运输和保管
7.1标志
7.1.1苹果无病毒苗木合格证标签由苹果病毒检测管理机构监制和签发。7.1.2无病毒苗木合格证标签规格见GB12943。7.1.3每株无病毒苗木都要挂上标签。7.2包装
7.2.1无病毒苗木需按品种和苗木种类（实生砧嫁接苗、矮砧嫁接苗、矮化中间砧苗、自根苗)分别包装。
7.2.2包装内外都要挂牌标记，注明品种、苗木种类、数量及产地名称。7.3运输
运输与普通苗木相同。
7.4保管
7.4.1苹果无病毒苗木要与普通苗木隔离存放。7.4.2无病毒苗木要有专人负责保管，以防丢失和调换，并要有详细的进出记录，以备查对。26.1
A1包被A蛋白
NY 329--1997
附录A
(标准的附录）
A蛋白酶联免疫吸附法（PAS-ELISA）用0.05mol/L碳酸盐缓冲液稀释A蛋白纯品，检测工作浓度为1~5μg/mL，每孔100～200μL，28保温2h，然后甩干，用PBST洗板3~4次，每次静止3～5min。A2加第一抗血清
抗血清用PBST稀释，每孔加100～200uL，28℃保温2h，冲洗（方法同上）。A3加抗原样品
取苹果嫩叶或一年生休眠枝条内皮层，加入5倍（m/V)抗原提取液，磨碎后4000r/min离心5min，取上清液，每孔加100～200μL，每样品2～3孔，每个微孔板需同时设阳性、阴性和空白对照。4C冰箱过夜.冲洗（方法同上），第一次冲洗液不得溢出。A4加第二抗血清
抗血清用PBST稀释，每孔100～200uL，保湿和冲洗方法同A1。A5加酶标A蛋白
市售辣根过氧化物酶标A蛋白用PBST稀释至工作浓度，每孔100～200μL，保湿和冲洗方法同Al。
A6加底物
每孔100～200μL，黑暗中室温放置15～~20min。A7中止反应
每孔加25～50μL2mol/L硫酸。
A8结果判断
以空白对照孔调\0”，测定反应液在492nm波长处吸光值，以待检样品平均吸光值/阴性对照平均吸光值≥2视为阳性。
附录B
（标准的附录）
指示植物田间检测法
B1在4月上旬，挑选前一年播种生长整齐致的砧木实生苗，定植于苗圃中，每行50～100株，株行距不小于15cm×60cm。检测圃周围100m以内不得栽植梨树，50m以内不得栽植苹果树，B28月中下旬从待检样本树或待检苗上剪取一年生枝条，作为待检接穗，并按待检树的品种树号编号写好标签，绑缚在待检接穗上。每-待检样本需有15～20个饱满芽。265
NY 329—1997
B3从指示植物母本树上剪取当年生枝条，作为检测接穗，其饱满芽数量相当于待检接穗的4～5倍。B4上述材料准备就绪后，即可进行嫁接，嫁接采用二重芽接法，先把待检接穗的芽片嫁接在砧木基部，每株嫁接1～2个待检芽（如芽量不足用树皮亦可）。一株待检树上接穗在同一行砧木上嫁接4～5株，并按待检树的编号挂好标牌。B5削取指示植物的芽片嫁接在前项待检芽的上方，两芽相距1.02.0cm，每一行砧木嫁接同-种指示植物。
B6嫁接后，第二年苗木发芽前，在指示植物接芽的上方约1.0～1.5cm处剪除砧干。加强肥水管理，及时除萌锄草和防治病虫害，要特别注意食叶性害虫的防治，以免影响检测结果。B7从5月中下旬开始，每周定期观察指标植物的症状表现，作好观察记录，根据指标植物的症状反应，明确待检树是否还潜带病毒。附录C
（标准的附录）
指示植物温室检测法
C1于3月下旬取上年播种的砧木种子实生苗，栽植于直径15cm，高25cm的泥花盆中，作为鉴定用木。子8月中下旬，将待检树芽片芽接在砧苗基部。每一嫁接株按品种编号挂好标签，每一待检样本嫁接4盆。
C2年2上中旬，将花盆移入温室内，温室温度白天20～25℃，夜间9～15℃，待砧苗开始萌发生长后，用芽接法在相应组合待检芽上方嫁接指示植物接穗。C3嫁接后的温室温度控制在18～26℃，同时要注意防治害虫和控制萌生长，待指示植物发芽长出嫩叶片后，每周观察一次，记载症状表现。266
部分标准清理整顿前后标准号对照表原标准号
GB2905---82
GB2906-
GB3243—82
ZB B21 001 ---87
现行标准号
NY/T 3 ---1982
NY/T4—1982
NY/T 5—1982
NY/T 66-1987
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。