【国家标准(GB)】 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS 65.020.30
中华人民共和国国家标准
GB/T20366--2006
动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Method for the determination of quinolones in animal tissues-LC-MS/MSmethod
2006-05-25发布
改驾防伪
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-09-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国山东省质量技术监督局提出。本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、梁增辉、王岩、孟兆宏。GB/T20366—2006
1范围
动物源产品中诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB/T20366-2006
本标准规定了动物源产品中11种喹诺酮类残留量液相色谱-串联质谱的测定方法。本标准适用于禽、免、鱼、虾等动物源产品中11种喹诺酮类残留的确证和定量测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682—1992，negISO3696：1987)）3原理
试样中喹诺酮类残留，采用甲酸-乙腈提取，提取液用正已烷净化。液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。
4试剂和材料
4.1水：应符合GB/T6682中级水的规定。4.2乙睛：液相色谱级。
4.3冰乙酸：液相色谱级。
4.4正已烷：液相色谱级。
4.5甲酸：优级纯
4.6乙睛饱和的正已烷：量取正已烷溶液80mL于100mL分液漏斗中，加人适量乙睛后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙腊层既得。4.72%甲酸溶液：2mL甲酸用水稀释至1000mL，混匀。4.8甲酸-乙睛溶液：98mL乙腈中加2mL甲酸，混匀。4.9伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星标准品：纯度≥99%。4.1011种唑诺酮类标准贮备溶液：0.1mg/mL。分别准确称取适量的每种唑诺酮标准品，用乙睛配制成0.1mg/mL的标准贮备溶液（4℃保存可使用3个月）。4.1111种喹喏酮类标准中间溶液：10ug/mL。分别准确量取适量的每种喹诺酮标准贮备溶液（4.10），用乙睛稀释成10μg/mL的标准中间溶液（4℃保存可使用1个月）。4.1211种喹诺酮类混合标准工作溶液：准确量取适量的喹喏酮类标准中间溶液（4.11），用甲酸-乙睛溶液（4.8）配制成浓度系列为5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL、500.0ng/mL的喹诺酮类混合标准工作溶液（4℃保存可使用1周）。4.1311种喹诺酮类混合标准添加溶液：100ng/mL。准确量取适量的喹喏酮类标准中间溶液（4.11），用乙腈稀释成100ng/mL的喹喏酮类标准添加溶液（4℃保存可使用1周）。1
GB/T20366—2006
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2高速组织捣碎机。
5.3均质器。
5.4旋转蒸发仪。
5.5氮吹仪。
5.6涡流混匀器。
离心机：转速4000r/min。
分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。5.8
移液器：200μL1mL
棕色鸡心瓶：100mL。
聚四氟乙烯离心管：50mL。
分液漏斗：125mL。
3一次性注射式滤器：配有0.45μm微孔滤膜。5.13
5.14样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。6试样制备与保存
6.1试样制备
样品经高速组织捣碎机均勾捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装人清洁容器内，加封后作出标记。一份作为试样，一份作为留样。6.2试样保存
试样应在一20℃条件下保存。
7测定步骤
7.1标准曲线制备
制备混合标准工作液（4.12），浓度系列分别为5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL、500.0ng/mL（分别相当于测试样品含有1.0ug/kg、2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg、100.0μg/kg目标化合物）。按7.4的规定测定并制备标准曲线。
7.2提取
称取5.0g试样，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加人20mL甲酸-乙溶液（4.8），用均质器均质1min，然后，于离心机上以4000r/min的速率离心5min，将上清液移人另一个50mL聚四氟乙烯离心管中。将离心残渣用20mL甲酸-乙睛溶液（4.8)再提取一次，合并上清液。7.3净化
将上清液转移到125mL分液漏斗中，于上清液中加入25mL乙腈饱和的正已烷（4.6），振摇2min，弃去上层溶液，将下层溶液移至100mL棕色鸡心瓶中，于40℃水浴中旋转蒸发至近干，用氮气流吹于。准确加入1.0mL甲酸-乙睛溶液（4.8)溶解残渣，涡流混匀后，用一次性注射式滤器过滤至样品瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.4测定
7.4.1液相色谱条件
a）色谱柱：Cs柱（可用IntersilODS-3，粒径5μm.柱长150mm，内径4.6mm或相当者）；流动相：乙睛+2%甲酸溶液（梯度洗脱见表1)；b）
时间/min
流速：0.8mL/min
进样量：20μL。
质谱条件
离子源，电喷雾离子源；
扫描方式，正离子扫描；
检测方式：多反应监测；
电喷雾电压：5500V；
雾化气压力：0.413MPa；
气帘气压力：0.344MPa；
辅助气压力：0.586MPa：
离子源温度：500℃；
乙腈/（%)
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2。GB/T20366-—2006
2%甲酸溶液/（%）
表211种喹诺酮类的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压名
伊诺沙星
氟沙星
诺氟沙屋
培氟沙星
环丙沙星
洛美沙星
丹诺沙星
恩诺沙星
沙拉沙星
双氟沙星
司帕沙星
定性离子对/（m/z）
（母离子/子离子）
320.9/303.0
320.9/234.0
361.9/318.0
361.9/261.0
320.0/302.0
320.0/233.0
334.0/316.0
334.0/290.0
332.0/314.0
332.0/230.9
351.9/265.0
351.9/334.0
358.0/340.0
358.0/254.9
360.0/316.0
360.0/244.9
386.0/299.0
386.0/367.9
400.0/356.0
400.0/382.0
393.0/349.0
393.0/292.0
定量离子对/(m/z)
（母离子/子离子）
320.9/303.0
361.9/318.0
320.0/302.0
334.0/316.0
332.0/314.0
351.9/265.0
358.0/340.0
360.0/316.0
386.0/299.0
400.0/356.0
393.0/349.0
碰撞气能量/eV
去簇电压/V
GB/T20366-2006
7.4.3液相色谱-串联质谱测定
用混合标准工作溶液（4.12)分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度（ng/mL）为横坐标。绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中11种目标化合物响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，11种目标化合物的参考保留时间见表3。11种目标化合物标准品的总离子流图和选择离子流图参见附录A中的图A,1、图A.2。表311种喹诺酮类标准品的参考保留时间名称
伊诺沙星
氧氟沙星
诺窥沙星
培氟沙星
环丙沙星
洛美沙星
8结果计算
保留时间/min
试样中每种喹诺酮类残留量按式(1)计算：X=cx
式中：
丹诺沙星
恩诺沙星
沙拉沙星
双氟沙星
司帕沙星
X——试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg)；保留时间/min
一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V-试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m-
试样溶液所代表的质量，单位为克（g）。注，计算结果应扣除空白值。
9检出低限(LOD)和定量限(LOQ)
检出低限(LOD)
伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星为0.1μg/kg：恩诺沙星、丹诺沙星为0.5ug/kg。9.2定量限（LOQ）
伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星为1.0μg/kg。10精密度
精密度数据按GB/T6379的规定制定，其重复性和再现性的值以95%的可信度计算。10.1重复性
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（），动物源产品中11种喹诺酮类残留含量范围及重复性方程见表3。如果差值超过重复性限（r），应舍奔实验结果并重新完成两次单个试验的测定。10.2再现性
在再现性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R），动物源产品中11种喹诺酮类残留含量范围及再现性方程见表4。4
依诺沙垦
氧氟沙星
诺氟沙星
培氟沙星www.bzxz.net
环丙沙星
洛美沙星
丹诺沙星
恩诺沙星
沙拉沙星
双氟沙星
司帕沙星
表4含量范围及重复性和再现性方程含量范围/（μg/kg）
注：工为两次测定值的平均值。重复性限，
T=-0,06700+0.1921z
Igr--0.9075+1.1271lgz
r=-0.0159+0.1497x
r=0.0224+0.1021r
Igr=—0.9527+1.0424lgx
r=—0.0012+0.1048元
r=0.0140+0.1117r
r=0.0516+0.1323x
Igr=-1.0224+1.1336lgr
Igr--0.8660+1.0540lgr
r=-0.0343+0.1716
GB/T20366—2006
再现性限R
R=-0.0532+0.2043
R=-0.0523+0.2250x
R--0.1169+0.2624r
R-0.0171+0.2135z
R=-0.0676+0.23291
lgR-0.9096+1.1506lgx
R=-0.0079+0.2182x
R=-0.0109+0.2463x
R=-0.0799+0.19791
-0.0347+0.1996
R=-0.0610+0.21201
GB/T20366—2006
伊诺沙星；
氧氟沙星；
诺氟沙星；
一培氟沙星：
环丙沙星；
洛美沙星；
11.03min-
丹诺沙星；
恐诺沙星；
沙拉沙星；
双氟沙星；
司帕沙星。
附录A
（资料性附录）
标准品串联质谱图
图A.111种喹诺酮类标准品总离子流图16.
0.044. 87.5.415.61
伊诺沙星（320.9/303.0）
伊诺沙星
氧氟沙星（361.9/318.0）
b）氧氟沙
诺氟沙星（320.0/302.0）
17.928. 198. 599. 14.9. 79
14.62215.10
c）诺氟沙星
11种喹喏酮类标准品选择离子流图图A.2
GB/T20366-2006
17.1517.4018.22
19 zfmin
GB/T20366-2006
培氟沙星（334.0/316.0）
培氟沙星
环丙沙星（332.0/314.0）
环丙沙星
洛美沙星（351.9/265.0)
f）洛美沙星
图A2（续）
19 tlmin
19gmin
19 tmin
丹诺沙星（358.0/340.0）
g）丹诺沙星
恩诺沙量（360.0/316.0）
恩诺沙星
沙拉沙量（386.0/299.0）
沙拉沙星
图A.2（续）
GB/T20366—2006
19zimin
GB/T20366—2006
双氛沙星
k）司帕沙星
图A.2（续）
双氟沙星（400.0/356.0）
司帕沙星（393.0/349.0）
19tlnin
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