【商检行业标准(SN)】 进出口食品平板菌落计数 滤膜法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1059.3—2002
进出口食品平板菌落计数
滤膜法
Plate count for bacterial colonies in food for irnportand exportMembrane filter method2002-01-16发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2002-06-01实施wwW.bzxz.Net
SN/T1059.3-2002
本标准是按照GB/T1.1--1993《标准化工作导则第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定》进行编写的。其中平板菌落计数滤膜法中的培养基、培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会（AOAC）《公定分析方法》（1995年第16版17.2.05），结合SN0168-19924出口食品平板菌落计数》样品制备中内容，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录A是标准的附录。
本标摊由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国天津出人境检验检疫局负责起草。本标推主要起草人：陈子红、侯丽萍、唐丹舟、张思传孙俐。本标准首发布。
1范围
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品平板菌落计数滤膜法Plate count for bacterial colonies in food for importand export-Membrane filter method本标雄规定了进出口食品中平板蓄落计数蕴膜法。SN/T 1059. 3--2002
木标推仅适用于进出口方便面.化食品、矿泉水.单晶糖、饮料，辣椒粒、牛奶（需用胰蛋白酶处理）中菌落计数的检验。
2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标中引用面构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标推的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SN0330—1994，出口食品中微生物学检验通购3抽样
按SN0330规定执行。
4检验方法
4.1方法原理
将滤膜放入滤器,过滤样晶,使细菌留在膜表面。将膜放在糖化大豆-紧牢绿琼脂(TSFA)培养基上培养，产生深，浅绿色菌落，进行计数。4.2设备利材料
4.2.1滤器：一套，备有预滤器。4.2.2真空泵。
4.2.3滤膜：有机或水相，孔径为0.45μm。4.2.4
培养箱：36C士1℃，
4.2.5水浴箱：35℃±1℃。
4.2.6吸管：1ml、10mL,具刻度。4.2.7
玻璃三角瓶和广口瓶：200 mI,500 mL4. 2. 8 试管:17 mm×170 mm,璃制。4.2.9玻璃珠;直径5 mm.
4.2.10平Ⅲ：直径90 mm。
4.2.11天平：感量0.1g
4.2.12均质器。
4.3培养基和试剂
4.3.1蛋白陈-吐温80(PT)稀释液（见附录AA1)。中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-01-16批准2002-06-01实施
SN/F 1059.3—2002
4.3.2胰化大豆-坚牢缘琼脂(TSFA)(见附录AA2)。4. 3. 3 三(羟甲基)胺甲烷 Tris 缓冲剂(见附录 A A3)。4.3.4映蛋白酶贮存液（见附录AA4），4.4样品制备
4.4.1以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75必乙醇在包装开口处擦拭后取样。
4.4.2样品勾液制备
4.4.2.1固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品，放人装有225mLPT稀释液的灭菌均质杯内，于8000T/min.均质1min～2min，制成1：10的样品勾液。如样品均质时间超过2min：应在均质杯外加冰水冷却。
4.4.2.2干燥或干粉食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225ml.PT稀释液的500mL灭菌广口瓶中（瓶内预置适当数量的玻璃珠）。迅速摇.将样品混匀.制成1：10的样品匀澈。振播时，幅度30 cm,7 s内振播 25次，也可用机械振荡器振荡15 s代替手播。4.4.2.3被休食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放人装有225mLPT稀释液的500mL的灭菌广口瓶中，按4.4.2.2条中所述的方法，迅速振摇，制成1：10的样品匀液。吸取样品时：吸管插人液面下不要超过2.5c1。吸管内液体要在2s4§内完全排人稀释液中。不要在稀释液中吹洗吸管。4.4.3稀释样品勾液
4.4.3.1用10mL灭菌吸替准确吸取1：=0的样品匀液10mL放人装有90mLPT稀释液的200ml.灭菌广口瓶中。按4.4.2.2中所述的方法，迅速振摇，制成1：100的样品液。4.4.3.2分别用10ml.灭菌吸管按4.4.3.【条所述方法将样品匀液制成10倍递增PT稀释液的样品液如10--、10-,10-....
4.4.4腰处理的食品
需要酶处理的食品取 1 :10 PT 样品匀液 10 mL 加酶原羧 1 mE.,在灭菌试管中混合救人 35℃士1C水浴中处理20min~30min,取出过滤。4.5过
对每一份试栏，选用适宜的三个连续稀释度的样液.每个稀释度的样液分别过滤两次。将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜放在抽滤底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10ml～20mL无菌然罐水于滤器巾，加人PT样品勾液10ml.，打开真空泵，抽吸过滤.再加人10mL~-15mL无菌蒸馏水.抽吸过滤，关闭真空泵。用无菌镊子将滤膜取出，4.6培养
以无菌操作将滤膜取出放于预先十燥的TSFA琼脂平板表面上，滤膜和琼脂表面之间应无气泡。将TSFA琼脂平板，平放人36℃上1C培养箱内培养48h。4.7计数
4.7.1培养后，对每个TSFA琼脂平板上产生的深、浅绿色菌落进行计数。25～250个菌葬为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0℃～4℃但不得超过 24 h。4.7.2如只有---个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内.先计算两个平板的平均值，再将平均值乘以相应稀释梧数，作为每克（毫升）Lμ（mL)1样品中平板菌数4.7.3如有两个稀释度在合适范围内，先计算每个稀释度两个平板的平均值。再计算两个稀释度的平均道,然后计算每克(毫升)g(mL样品中平板菌葬数，4.7.4当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时计数这一稀释度两个平板.上的实际菌落数。计算两个平板上的平均菌落数，将平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号（*）,表明该数系从菌落数在25～250 这一范围之外的平板佑计所得。4.7.5当所有平版上的菌落都超过250时，则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍2
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数。得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号（*）（同4.7.4)。4.7.6如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号（*）(同4.7.4)。
4.7.7伺一稀释度的两个平板中，一个有25～250个菌落，另个的菌落多丁250个，两个平板都要计数。计算方法同4.7.2。
4.7.8两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25～250个范国内·而另一个的菌落数于250或低于25四个平板都要计数。计算方法参照4.7.2和4.7.3。4.7.9某稀释度的两个平板都有25～250个菌落，而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在25～250范围内。四个平板都要计数，计算方法参照4.7.2和4.7.3，5结果报告
报告每克（毫升）g（mL）样品中平板菌落数或估计数的平板菌落数。A1蛋白陈-吐温8C(PT)稀释液
a）蛋白陈
b）吐温8c
c）蒸馏水
1 000 mL
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附录A
(标准的附录）
培养基和试剂
将上述成分加热溶解分装90mL于三角瓶中，121C高压灭菌15nin。A2胰化大豆-坚牢绿琼脂(TSFA）15.心g
a）蛋白陈
b）植物蛋白陈（或大豆滕）5.0c）氯化钠(NaC1)
d）坚牢绿
e）琼脂
f）蒸馏水
I 600 mL
将上述成分加热溶解分装，121℃高压灭菌15min，调整最终pH为7.3。43（Tris）缓冲剂(1.0mol/L）。溶解121.1g三（羟甲基）胺甲烷于500mL水中，用浓盐酸调节溶液至所需 pH值。用水稀释至1 L。室溢或 4C～6℃保存。A4胰蛋白酶贮存液：用Tris缓冲剂稀释1Cg胰蛋白酶（DaifcoNa.0153或等效品）至100ml，pH7.6。如露要加热至35C以助溶，通过WhatmanNo.1滤纸（或等效品）过滤以除去不溶物质，再用0.45μm滤膜过滤除菌。于4C~6C保存一周或—18℃保存3个月。2
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