【商检行业标准(SN)】 进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1059. 1--2002
进出口食品中沙门氏菌
滤膜筛选法
Salmonella in food for import and export-Membrame filter screening method2002-01-16发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2002-06-01实施
SN/T1059.1—2002
本标推是按照GB/I1.11993标准化T作导则第1单元：标推的起草与表述规则第1部分标准编写的基本规定》进行编写的本标准中沙门氏菌滤膜筛选法中的培养基，培养温度和滤膜法等内容是参考美国公职分析化学家协会（A0)AC）《公定分析方法》（1995年第16版17.9.09)样品制备，来用SN0170—1992《出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌)检验方法》，并在实验的基础上编写而成。本标准的附录 A是标准的对录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标摊由中华人民共和国天津出入境检验检疫局负责起草。本标主要起草人;陈子红、候丽萍、唐丹舟、张思传、孙俐。本标雄首次发布。
1范围
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中沙门菌
滤膜筛选法
Salmonella in food for import and exportMembrame filler screening method本标谁规定了进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法。SN/T 1059.1 -2002
本标谁仅适用于进出口方便面、膨化食品、矿泉水，单晶糖、牛奶，饮料、禽肉、椒粒中沙门氏菌筛选。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标推中引用而构成为本标准的条文。本标出版时，所示版术均为有效。所有标推都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。SV01701992出口食品沙门氏菌属（包括亚利桑那菌）检验方法SV0330—1994出口食品中微生物学检验通则3抽样
按SV0330规定执行。
4试验方法
4.1方法原理
将滤膜放人滤器，过滤样品。由丁滤膜的作用而使沙门氏菌保留在膜表面工。将滤膜放在EF-18培养基上塔养，沙门氏菌形成绿色、蓝缘色、蓝色或黄色菌落。4.2设备和材料
4.2.1滤器：一套，备有预滤器。4.2.2真空泵。
4.2.3滤膜：有机或水相，孔径0.45um4.2.4培养箱：36℃±1℃,42℃+1℃。4.2.5水浴箱：45C±1C.37C上1C。4.2.6吸管：1mL、10mL.具刻度。4.2.7玻璃三角瓶和广口瓶：250mL、500mL。4.2.8试管：17mm×170mm，玻璃制。4.2.9玻璃珠：直径5mm。bZxz.net
4.2.10平：直径90mm。
4.2.11天平：感量0.1g。
4.2.12均质器。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-01-16批准2002-06-01实施
4.3培养基和试剂
SN/T 1059. 1—2002
4.3.1蛋白陈-吐温80(PT)稀释液（见附录AA1)。4.3.2四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）（见附录AA2。4.3.3EF-18琼脂(见附录AA3)，
4.4样品制备及增菌培养
4.4.1如为冷冻产品，应在15C以下不超过15min，或在2℃~～5℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应置于一15℃左右保存。非冷冻而易腐的食品，置于4℃冰箱保存。4.4.2以无菌操作，称取25g（ml.）样品，置于灭菌均质杯内，加人25mLPT稀释液，以8000~10000/min均质1min，放入装有200ml.PT稀释液的500mL灭菌广口瓶，混合均勾.如pH低于G.6,用灭菌1mol/L氢氧化钠溶液，调pH至6.8±0.2,效人37:水浴培养4h(以增菌液达到37C时算起），进行前增菌；其后，移取10ml.转种于盛有100mL四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）的250mL灭菌广口瓶内，摇，42℃七1℃培养2ch土2h，进行避揉性菌。4.5过滤和培养
将灭菌的过滤装置连接于真空抽滤瓶上，以无菌操作将无菌滤膜旗在抽滋底座上，用不锈钢夹子固定。以无菌操作加10ml.~20ml.无菌蒸馏水于滤器中，用灭菌骤管取选择性增菌液1ml放人滤器中，打开真空泵抽吸液体，再加人10ml.～15mL无菌蒸馏水抽取液体，抽干后关闭真空泵，打开底座夹，以无菌镊子取出滤膜，将滤膜移至预先干爆好EF-1琼脂平板表面上：滤膜与琼脂表面之间应无气泡，在42C士1℃培养18～24h，无菌落生长购为阴性。4.6典型或可疑菌落的签定
典型沙门氏菌菌落既不是水滴样又不是粘液状一皇凝包、翡翠绿色或蓝绿色，有时呈蓝色（赖氮酸阳性菌和蔗阴性菌)和黄色（顿氨酸阴性葡和蔗糖阳，从平板上挑选3个典型或可疑菌落，按照SN170—199z中第4章进行生化和iL清学鉴定。5报告结果
5.1报告阳性结果：“沙门氏菌检出/25”，5.2报告阴性结果；沙门氏菌木检出/25”。2
A1蛋白陈-吐温80(PT)稀释液
a）蛋白陈
b）啦温80
）蒸馏水
SN/T 1059.1 -2002
附录A
(标准的附录)
培养基和试剂
1000mL
将上述成分加热溶解，于121C高压或15min。A2四硫磺酸盐肉汤（加碘和煌绿）A2.1基础肉汤制备
a）多价蛋白陈
b）胆盐
c）碳酸钙
d）硫代硫酸钠（5个分子水）
e）蒸馏水
1000 mL
将上述成分混合加热煮沸（沉淀不会完全溶解），冷却至45C储存于冰箱（5C～8C）内备用。A2.2碘-碘化钾溶液制备
将5名碘化钾溶解于5ml.灭菌蒸馏水中，加人6g溶解后，用灭菌蒸馏水稀释至20mL备用。A2.3煌缘溶液制备
称取煌绿染料0.1溶解于火菌的蒸馏水中并稀释至100mL，裔用。A2.4使用
在使用的当天.将20mL碘-碘化钾溶液，10mL煜绿游液加入1000mL基础肉汤中，缓慢震药将沉淀悬浮起来。并以无菌操作以10mL分装于17mm×170mm灭菌的试管内，不要加热，使用前保特温度在25C～35℃。
A3EF-18琼脂
a）豚蛋白陈
b）酵母浸
e）1.-赖氨酸盐酸盐
d）D-葡萄糖
e）蔗糖
f)硫酸镁（MgS0,·7H,O)
g）胆
h）磺胺吡啶
i）澳麝香草酚蓝钠盐
j)琼脂
k）蒸馏水
1000mL
加热搅拌至煮沸，完全溶解。木培养基不需高压火菌，冷却至45C～50C。配制新生霉素溶液，溶解0.15g新生霉索于10mI.水中,用0.45μm滤膜过滤除菌。于保温的1000ml.EF-18琼脂基础中加人SN/T 1059.12002
1.0mL除菌的新生需素溶液，混匀，将培养基倾注于暗替氏血中，每血2℃mL，凝固后培养基的最终pH应为6.8±0.1。未使用的新生需素于4C～6C.贮存备用。注意：正确调节pH是该培养其效能的关键。用平面探头测定固体培养基pH。也可在倾注陪替氏平Ⅲ前，以光菌操作，用灭菌的1mal/L盐酸或氢氧化钠调节pH至6.6土0.1.200-65/Ns
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