【农业行业标准(NY)】 饲料中苯并(A)芘的测定高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T919-2004
饲料中苯并（a）花的测定
高效液相色谱法
Determination of benzo(a)pyrene in feeds-High performance liquid chromatography2005-01-04发布
2005-02-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T919—2004
本标准在参阅了国内、外大量文献基础上，经过方法筛选，确立了用高效液相色谱法测定饲料中苯并(a）芪含量。
本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)。本标准起草人：徐国荣、田晓玲、曹东，柏云江、张建勋、田颖、徐世行。范围
饲料中苯并（a）花的测定
高效液相色谱法
本标准规定了用高效液相色谱仪测定动物饲料中苯并(a)芪的方法。NY/T919—2004
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中苯并（a）芪的测定，检测限为2.5ug/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法GB/T14699.1饲料采样方送
3原理
试样中的苯并（a）经环已烷提取，再经二甲基亚矾萃取。试样溶液过C小柱，用环己烷洗脱。将洗脱液于旋转蒸发器上蒸干，残渣用乙睛溶解，于高效液相色谱仪测定4试剂和材料
除另有规定外，仅使用分析纯试剂。水，GB/T6682，二级用水。4.1乙睛
色谱纯。
4.2环己烷
加活性炭重蒸馏。
4.3二甲基亚砜
4.4甲醇
色谱纯。
4.5标准溶液
4.5.1标准贮备液
准确称取苯并（a）花标准品（纯度≥97%、HPLC级）10mg，置于100mL量瓶中，加乙溶解并稀释至刻度，该贴备液浓度为100g/mL。置4冰箱中保存（可保存2个月）。4.5.2标准工作液
准确吸取1mL的标准贮备液（4.5.1），置于100mL量瓶中，用乙睛稀释至刻度。分别准确吸取一定体积的该溶液，加乙睛制成浓度为25ng/mL、50ng/mL、75ng/mL、100ng/mL、150ng/mL200ng/mL的标准工作液。
5仪器设备
5.1实验室常用仪器设备
NY/T9192004
5.2高效液相色谱仪
配紫外检测器。
5.3离心机
3000r/ming
5.4超声波震荡器
5.5旋转蒸发器
5.6C1净化富集柱
250mgc
5.7分析天平免费标准下载网bzxz
感量0.0001g
5.8天平
感量0.001g。
试样制备
按照GB/T14699.1饲料采样方法采样，选取具有代表性的样品，至少500g，用四分法缩减至200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，装人磨口瓶中备用。7分析步骤
7.1试样溶液的制备
称取试样10g，准确至0.002g.置于250mL具塞三角瓶中。加人环已烷（4.2）30mL，超声振荡25min，倾出上清液。残渣2次分别加人环已烷（4.2）20mL，超声振荡20min。合并3次提取液，离心（3000r/min）5min上清液于旋转蒸发器上（65C）浓缩至约5mL用吸管将浓缩液转移至100mL分液漏斗中，用5mL环已烷（4.2）分数次洗涤蒸馏瓶，洗液合并于分液漏斗中。依次用10mL5mL二甲基亚砜（4.3）缓慢振摇提取2次，静置10min后，分离二甲基亚矾层（下层）于三角瓶中，加人25mL水，播勾。过Cls净化富集柱（便用前，用20mL甲醇（4.4）、20mL水过柱活化），用10mL水淋洗，抽干。用30mL环已烷（4.2）洗脱（洗脱速度为2mL/min）。洗脱液于旋转蒸发器上（65℃）蒸干，用2mL乙睛（4.1）溶解残渣，过0.45um微孔滤膜，待测。7.2测定
7.2.1高效液相色谱条件
色谱柱：Cis柱，柱长200mm，内径4mm，粒度5μm流动相：乙腈一水，75+25。
波长：UV296nmc
流速：2.0mL/min。
进样量：10uL
7.2.2定量测定
按仪器操作规程操作。取待测液和标准工作液（4.5.2），作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。
8结果计算
8.1试样中苯并a）芪的含量按式(1）计算：2
式中：
试样中苯并(a)芪的含量，单位为微克每千克(/kg）：NY/T919-2004
试样中苯并（a）芘的响应值在标准曲线上对应的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试样质量，单位为克（g）：
试样稀释的体积，单位为毫升（mL）。8.2测定结果用平行测定的算数平均值表示，保留至小数点后1位。重复性
同一操作者对同一试样2次平行测定所得结果的相对偏差不大于15%。3
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