【国家标准(GB)】 急性毒性试验

GB15193.3—1994
中华人民共和国国家标准
急性毒性试验
Acute toxicity test
1主要内容与适用范围
本标准规定了急性毒性试验的基本技术要求。本标准适用于测定环境有害物质的急性毒性作用。2原理
GB15193.3—1994
经口一次量给予或24h内多次给予受试物后，在短时间内动物所产生的毒性反应，包括致死的和非致死的指标参数，致死剂量通常用半数致死剂量LD5来表示。
3半数致死量（LD50）的定义
半数致死量（LD50）是使一组受试动物死亡50%的剂量，其单位是每公斤体重所摄入受试物的毫克数，即mg/kg体重。4实验步骤
4.1动物
一般均分别用两种性别的成年小鼠和大鼠。小鼠体重为18～22g，大鼠体重为180～220g。如对受试物的毒性已有所了解，还应选择对其敏感的动物进行试验，如对黄曲霉素选择维鸭，对氰化物选择鸟类。4.2给予受试物的途径
经口。
4.2.1动物应隔夜空腹（一般禁食16h左右，不限制饮水）。4.2.2一般采用水或食用植物油，可考虑用羧甲基纤维素、明胶、淀粉作为混悬液；不能作成混悬液时，可作其他型式的制备（如糊状物等）。必要时可采用二甲基亚砜。但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。如采用未知毒性的溶剂应单设对照组观察。
4.2.3给予受试物的体积，小鼠为0.4mL/20g体重，大鼠为2.0mL/200g体重。
4.2.4一般一次性给予受试物，如估计受试物的毒性很低或溶解度很低者，可一日内多次给予。每次间隔2～3h，仍合并作为一次剂量计算。但只须剂量达到10g/kg体重仍不引起动物死亡，即可停正再进行更多次的给予。4.3方法
可任选下列方法之一：
4.3.1崔恩氏（Horn）法
4.3.1.1预试验：可根据受试物的性质和已知资料，选用下述方法：一般多采用10，100和1000mg/kg的剂量，各以2～3只动物预试。根据24h内死亡情况，估计LD50的可能范围，确定正式试验的剂量组。也可简单地采用一个剂量，如215mg/kg，用5只动物预试。观察2h内的动物的中毒表现。如症状严重估计多数动物可能死亡，即可采用低于215mg/kg的剂量系列，反之症状较轻，中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1994—08—10实施
GB15193.3—1994
则可采用高于此剂量的剂量系列。如有相应的文献资料时可不进行预试。4。3.1.2动物一般每组用5只大、小鼠。4.3.1.3常用的剂量系列为：
2.15×t10
t=0，±1，±2，±3
×1°t=0,±1,±2,±3为小，所以结果较为精确。—因为剂量间距较，
般试验时，可根据上述剂量系列设计5个组，即较原来的方法在最低剂量组以下或最高剂量组以上各增设一组，这样在查表时容易得出结果。4.3.1.4正式试验：将动物在实验动物房饲养观察1～2d，使其适应环境，证明其有系健康动物后，进行随机分组。给予受试物后一般观察7或14d，若给予4d继续有死亡时，需观察14d，必要时延长到28d。记录死亡数，查表求得LD50，并记录死亡时间及中毒症状等。4.3.1．5此法优点是简单易行，节省动物；缺点是所得LD50的可信限范围较大，不够精确。但经多年来的实际应用与验证，同一受试物与寇氏所得结果极为相近。因此对其测定的结果应认为是可信与有效的。4．3.2寇氏（Korbor）法
4.3.2.1预试验：除另有要求外，一般应在预试中求得动物全死亡或90%以上死亡的剂量和动物不死亡或10%以下死亡的剂量，分别作为正式试验的最高与最低剂量。
4.3.2.2动物：除另有要求外，一般以设5～10个剂量组，每组6～10只动物为宜。
4.3.2.3剂量：将由预试验得出的最高、最低剂量均换算为常用对数，然后将最高、最低剂量的对数差，按所需要的组数，分为几个对数等距（或不等距）的剂量组。
4.3.2.4试验结果的计算与统计
4.3.2.4.1列试验数据及其计算表包括各组剂量（mg/kg），剂量对数（X）、动物数（n）、动物死亡数（r）、动物死亡百分比（P，以小数表示），以及统计公式中要求的其他计算数据项目。4.3.2.4.2LD50的计算公式
根据试验条件及试验结果，可分别选用下列三个公式中的一个，求出logLD50，再查其自然数，即LDso（mg/kg）。4.3.2.4.2.1按本试验设计得出的任何结果，均可用式（1)：log LDso-Z(X+ ++)(P+-- )
式中：X与Xi+1及Pi+1与P分别为相邻两组的剂量对数以及动物死亡百分比。
4.3.2.4.2.2按本试验设计且各组间剂量对数等距时，可用式（2）：d(Pi+P)
log LDso = XK -
式中：XK一一最高剂量对数，其他同式（1）。（2）
4.3.2.4.2.3若试验条件同4.3.2.4.2.2且最高，最低剂量组动物死亡中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1994—08-—10实施
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百分比分别为100（全死）和0（全不死时），则可用便于计算的式（3）。logLDs0=XK-d(P-0.5)
式中：P—各组动物死亡百分比之和，其他同式（2)。4。3.2.4.3标准误与95%可信限
4.3.2.4.3.11ogLD50的标准误（S)：Slog LDso =
P(1-P)
4.3.2.4.3.295%可信限（X)：
X = log-'(log LDso ±1.96.Slog LDso)（3）
·（4)
（5）
此法易于了解，计算简便，可信限不大，结果可靠，特别是在试验前对受试物的急性毒性程度了解不多时，尤为适用。4.3.3机率单位一—对数图解法
4.3.3.1预试验：以每组2～3只动物找出全死和全不死的剂量。4。3.3.2一般每组不少于10只大、小鼠，各组动物数量不一定要求相等。4.3.3.3剂量及分组：一般在预试得到的两个剂量组之间拟出的六个剂量组或更多的组。此法不要求剂量组间呈等比关系，但等比可使各点距离相等，有利于作图。
4。3.3.4作图计算
4.3.3.4.1将各组按剂量及死亡百分率，在对数概率纸上作图。除死亡百分率为0%及100%者外，也可将剂量化成对数，并将百分率查概率单位表得其相应的概率单位作点于普通算术格纸上，0%及100%死亡率的理论上不存在，为计算需要：
为0.25×100%,00%改为(-0.25)×100%0%改为
N为该组动物数，相当于0%及100%的作业用概率单位。4.3.3.4.2划出直线，以透明尺目测，并照顾概率。4.3.3.5计算标准误
SE=2S/2N
式中：N'
（6）
概率单位3.56.5之间（反应百分率为6.7～93.7之间）各组动物数之和；
SE——标准误；
LD84与LD16之差，即2S=LD84—LD16（或ED84—ED16）。相当于LD84及LD16的剂量均可从所作直线上找到。也可用普通方格纸作图，查表将剂量换算成对数值，将死亡率换算成概率单位，方格纸横坐标为剂量为数，纵坐标为概率单位，根据剂量对数及概率单位作点连成线，由概率单位5处作一水平线与直线相交，由相交点向横坐标作一垂直线，在横坐标上的相交点即为剂量对数值，求反对数致死量（LD50）值。4.4中毒反应观察
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1994—08—10实施
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给予受试物后，即应观察并记录实验动物的中毒表现和死亡情况。观察记录应尽量准确、具体、完整，包括出现的程度与时间。对死亡动物可作大体解部。
4.5结果评价
根据LD50数值，判定受试物的毒性分级。由中毒症状初步提示毒作用特征。5急性联合毒性试验
5．1原理
两种或两种以上的受试物同时存在时，可能发生作用之间的拮抗，相加或协同三种不同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。
5.2步骤
5.2.1分别测定单个受试物的LD50，方法同前。5.2.2按各受试物的LD50值的比例配制等毒性的混合受试物。5。2.3测定混合物的LD50（Horn氏法），用其他LDs0测定方法时，可以按各个受试物的LD50值的二分之一之和作为中组，然后按等比级数向上、下推算几组，与单个受试物LD50测定的设计相同，如估计是相加作用，可向上、下各推算两组；如可能为协同作用，则可向下多设几组；如可能为拮抗作用，则可向上多设几组。
5.3计算
5.3.1混合物中各个受试物是以等毒比例混合的，因此求出的LD50乘以各受试物的比例，即可求得各受试物的剂量。5。3.2用式（7）计算混合物的预期LD50值的比值，按比值判定作用的方式。1
混合物的预期LDso值受试物A的LDso值受试物B的LD5o值n
受试物N的LD5o值
式中.a,bnA,BN各受试物在混合物中所占的质量比例，a+b++n=1
5.3.3判定受试物联合作用方式的比值采用Smith.H.F的规定，即小于0.4为有抗作用，0.4～2.70为有相加作用，大于2.7为有协同作用。中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1994—08—10实施
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附录A
霍恩氏（Horn）法LD5o值计算用表（剂量递增法测定LDso计算用表）（补充件）
A1表A1用于每组5只动物，其剂量递增公比为/10，意即10×/10=21.521.5×3/10=46.4.，余此类推。此剂量系列排列如下：100
组1组2组3组4
组3组2组4
剂量=0.464
剂量2=1.00
剂量3=2.15
剂量4=4.64
t=0,±1，±2，±3….……
剂量1=1.00
剂量2=2.15
可信限
1.23~3.24
1.05~2.78
0.951~2.27
0.926~1.71
0.862~2.50
0.775~2.05
0.741~1.57
0.740~2.14
0.665~1.75
1.05~1.70
1.06~3.60
0.866~3.01
0.737~2.41
0.661~1.83
0.818~3.19
0.658~2.70
0.550~2.20
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准剂量3=4.64
剂量4=10.0
可信限
2.95~6.26
2.71~5.01
2.65~6.98
2.27~5.99
2.05~4.88
2.00~3.69
2.17~6.28
1.86~5.38
1.69~4.41
1.60~3.99
1.59~4.62
1.43~3.78
2.63~6.76
2.31~5.24
2.26~3.65
2.29~7.75
1.59~5.20
1.42~3.95
1.42~5.82
1.19~4.74
剂量1=2.15
剂量2=4.64
剂量3=10.0
剂量4=21.5
可信限
6.36~13.5
5.84~10.8
5.70~15.0
4.89~12.9
4.41~10.5
4.30~7.94
4.67~13.5
4.00~13.5
3.60~9.50
3.44~7.30
3.43~9.95
3.08~8.14
5.66~14.6
4.87~7.87
4.94~1.67
4.02~16.7
3.42~11.2
3.07~8.51
3.80~14.8
3.05~12.5
2.55~10.2
1994—08—10实施
GB15193.3—1994
0.523~2.32
1.00~3.58
0.806~2.67
0.674~1.92
0.839~4.29
0.616~3.50
0.4662.77
0.573~3.76
0.406~3.18
1.18~3.26
1.27~2.05
0.978~3.92
0.8932.92
0.885~2.01
0.930~4.12
0.797~3.28
0.715~2.49
0.686~1.77
0.676~2.63
0.599~2.02
0.969~3.71
0.757~4.75
0.654~3.30
0.581~2.22
0.706~5.09
0.564~3.82
0.454~2.85
0.662~1.78
0.583~2.52
0.455~6.95
0.327~4.48
0.410~7.72
0.266~5.52
0.777~4.63
0.8062.67
0.678~5.30
0.616~3.50
0.602~2.15
0.573~3.76
0.503~2.57
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准2.37
1.13~4.99
2.16~7.71
1.74~5.76
1.45~4.13
1.33~7.53
1.00~5.98
1.24~8.10
0.875~6.85
2.53~7.02
2.74~4.42
2.11~8.44
1.92~6.30
1.91~4.33
2.00~8.88
1.72~7.06
1.54~5.36
1.48~3.80
1.46~5.67
1.29~4.36
2.09~7.99
2.20~4.54
1.63~10.2
1.41~7.10
1.25~1.79
1.52~11.0
1.21~8.24
0.977~6.13
0.912~6.57
1.43~10.3
1.26~5.42
0.980~15.0
0.705~9.66
0.883~16.6
0.57311.9
2.42~6.89
1.67~9.97
1.74~5.76
1.46~11.4
1.33~7.53
1.30~4.62
1.24~8.10
1.08~5.54
2.43~10.8
4.66~16.6bZxz.net
3.74~12.4
3.13~8.89
3.89~19.9
2.86~16.2
2.16~12.9
2.66~17.4
1.89~14.8
5.46~15.1
5.90~9.53
4.54~18.2
4.14~13.6
4.11~9.33
4.31~19.1
3.70~15.2
3.19~8.19
3.14~12.2
2.78~9.39
4.50~17.2
4.74~9.78
3.51~22.0
3.03~15.3
2.70~10.3
3.28~23.6
2.62~17.7
2.11~13.2
1.97~14.2
3.07~22.2
2.71~11.7
2.11~32.3
1.52~20.8
1.90~35.8
1.23~25.6
5.22~14.8
3.60~21.5
3.74~12.4
3.15~24.6
2.86~16.2
2.79~9.96
2.66~17.4
2.33~11.9
1994—08-—10实施
GB15193.3—1994
0.856~3.69
0.481~6.58
0.451~3.25
0.390~8.11
0.310~4.74
0.279~5.26
表A2用于每组5只动物，
31.6×/10=100,
组2组3组4
1.85~7.96
1.04~14.2
0.972~7.01
0.840~17.5
0.668~10.2
0.602~11.3
3.98~17.1
2.23~30.5
2.09~15.1
1.81~37.6
1.44~22.0
1.30~24.4
意即10×/10=31.6，
其剂量递增公比为/10，
此剂量系列可排列如下：
余此类推。」
±2,±3.....
t=0，±1，
剂量=0.316
剂量2=1.00
剂量3=3.16
剂量4=10.0
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准x10
可信限
1.60~4.95
1.41~3.55
1.36~5.84
1.08~4.64
0.927~3.41
0.891~2.24
1.01~4.97
0.801~3.95
0.682~2.93
0.638~1.97
0.636~3.14
0.542~2.32
1.35~5.56
1.11~3.80
1.07~2.21
1.10~6.82
0.806~5.23
0.632~3.75
0.537~2.48
0.7405.70
0.534~4.44
0.408~3.27
0.378~3.53
剂量1=1.00
剂量2=3.16
剂量3=10.0
剂量4=31.6
可信限
5.07~15.7
4.47~11.2
4.30~18.5
3.42~14.7
2.93~10.8
2.82~7.08
3.19~15.7
2.53~12.5
2.16~9.25
2.02~6.24
2.01~9.92
1.71~7.35
4.26~17.6
3.51~12.0
3.40~6.98
3.48~21.6
2.55~16.5
2.00~11.9
1.70~7.85
2.34~18.0
1.69~14.1
1.29~10.3
1.20~11.2
1994—08—10实施
GB 15193.3—1994
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1.01~6.77
0.723~4.37
0.554~2.65
0.768~8.87
0.484~6.53
0.318~4.62
0.434~7.28
0.259~5.67
1.27~5.88
1.43~2.94
0.968~7.75
0.843~5.00
0.833~2.85
0.896~8.37
0.711~5.93
0.604~3.92
0.568~2.35
0.5554.27
0.463~2.88
0.953~7.15
1.03~3.06
0.65810.4
0.528~5.98
0.442~3.32
0.594~11.5
0.423~7.48
0.305~4.80
0.276~5.33
0.539~10.4
0.446~3.99
0.307~18.3
0.187~9.49
0.262~21.4
0.137~13.0
1.19~2.71
1.681~9.95
0.723~4.37
0.55812.2
1.484~6.53
0.467~3.14
0.434~7.28
0.356~4.12
0.793~7.10
3.18~21.4
2.29~13.8
1.75~8.39
2.43~28.1
1.53~20.7
1.00~14.6
0.37~23.0
0.819~17.9
4.03~18.6
4.53~9.31
3.06~24.5
2.67~15.8
2.63~9.01
2.83~26.5
2.25~18.7
1.91~12.4
1.80~7.42
1.76~13.5
1.47~9.10
3.01~22.6
3.57~9.68
2.08~32.7
1.67~18.9
1.40~10.5
1.88~36.3
1.34~23.6
0.966~15.2
0.871~16.8
1.70~33.0
0.970~58.0
0.592~30.0
0.830~67.8
0.433~41.0
3.77~18.1
2.16~31.5
2.29~13.8
1.76~38.6
1.53~20.7
1.48~9.94
1.37~23.0
1.13~13.0
2.51~22.4
1994—08-—10实施
GB15193.3—1994
反应率
每组动物
0.333~16.9
0.303~5.87
0.244~23.1
0.172～10.3
0.148~12.1
附录B
反应率-概率单位表
（补充件）
相当于反应率0%及100%的概率单位（补充件）
每组动物
反应率
急性毒性（LD50）剂量分级
（补充件）
1.05~53.4
0.958~18.6
0.771~73.0
0.545~32.6
0.467~38.1
反应率
表D1急性毒性
（LDso）剂量分级表
大鼠口服
LDso,mg/kg
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准相当于人的致死剂量
1994-—-08—10实施
GB 15193.3—1994
中等毒
实际无毒
器官系统
中枢神经系统及
体运动
自主神经系统
呼吸系统
心血管系统
胃肠系统
生死泌尿系统
皮肤和毛皮
51~500
501~5000
5001~15000
>15000
5004000
4000~30000
30000~250000
250000~500000
>500000
附录E
啮齿动物中毒表现观察项目
（补充件）
观察及检查项目
对各种刺激的反应性
大脑及脊髓反射
肌肉张力
瞳孔大小
呼吸性质和速率
心区触诊
烘便硬度和颜色
阴户，乳腺
会阴部
颜色，张力
完整性
透明度
直肠或皮肤温度
一般情况
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准0.05
中毒后一般表现
改变姿势，叫声异常，不安或呆滞震颤，运动失调，麻痹，惊厥，强制性动作
易兴奋，知觉过敏或缺乏知觉
减弱或消失
强直，弛缓
缩小或放大
流涎，流泪
流鼻沸
徐缓，困难，潮式呼吸
心动过缓，心律不齐，心跳过强或过弱
气胀或收缩，
腹泻或便秘
粪便不成形，黑色或灰色
发红，
皱折，松弛，皮疹
流粘液，充血，出血性紫，苍白溃疡
上脸下垂
眼球突出或震颤
降低或升高
姿势不正常，消瘦
1994—08—10实施
GB15193.3—1994
附录F
急性毒性试验记录表
（补充件）
1.试验方法
2.动物品系、来源、性别3.样品名称、性状及处理剂量
动物编号
记录者：
体重g
灌胃容量,mL
中华人民共和国卫生部1994—08—10批准2
出现中毒症
状的时间
死亡解剖
1994—08—10实施
GB15193.3—1994
送检单位
送检人
附录G
急性毒性半数致死量（LD50）结果报告表（补充件）
法)：动物：
结果：
方法（
1.半数致死量（LDs0,mg/kg）：2.主要症状表现：
性别：
；95%可信限：
说明：半数致死量（LD50）结果表明受试物的毒性性质和强度不能作为判定其安全性的唯一依据，仅供进一步毒理学试验参考检验人
填报日期
负责人
结论：送检物以急性毒性半数致死量（LD50）毒性分级附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。毒
本标准由卫生部食品卫生监督检验所、南京医学院负责起草。本标准主要起草人戴寅、马凤楼、郭世萍。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—08—10批准1994—08—10实施
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