【国家标准(GB)】 水果、蔬菜及制品 苯甲酸含量的测定

中华人民共和国国家标准
水果、蔬菜及制品
苯甲酸含量的测定
Fruits, yegetabies and derived products -Determination of benzoic acid contentGB 12289--90
本标准参照采用国际标准ISO5518—1978《水果、蔬菜及其制品苯甲酸含量的测定-—-分光光度法》和ISO6560--1983《水果、蔬菜及制品苯甲酸含量的测定（含量超过200mg/L或kg）一子吸收分光光度法》。
1主题内容及适用范围
本标准规定了水果、·蔬菜及制品中苯甲酸含量的測定方法。分光光度法适用于苯甲酸含量低于200mg/L或kg产品的测定。分吸收分光光度法适用于测定苯甲酸含量超过200mg/L或kg的产品，重点包括水果汁、蕃茄酱制品，以及用醋或乳酸保存的产品。分光光度法不适用于有对氯苯甲酸及有大量肉桂酸存在的产品。第一篇
分光光度法
2原理
试样混勾后，稀释、酸化、用乙醚提取苯甲酸，在碱性条件下重提，通过铬酸氧化提纯，最后用分光光度计测定溶解在乙醚中的苯甲酸。3试剂和溶液
本标准所用试剂均为分析纯。使用蒸馏水或相应纯度的水。3.1－酒石酸（Q/HG10—2187），结晶状；3.2氢氧化钠（GB1266）溶液，1mol/L重铬酸钾（GB642）溶液，33~34g／L（w/u）3.3
3.4硫酸溶液，2+1.用2体积的浓硫酸（GB625）P201.84g/mL，加到1体积的水中；乙醚（HG3一1002），重新蒸馏，3.5
3.6苯甲酸标准溶液：0.100g/L乙醚溶液，3.7
碳酸氢钠（GB640）。
仪器、设备
常用实验室仪器、设备、包括：4.1容量瓶，50mL，
4.2烧杯，50、100mL，
4.3移液管，20mL，
刻度吸管；
4.5锥形瓶，250mL具有磨口玻璃塞；国家技术监督局1990-03-29批准1990-12-01实施
4.6分液漏斗，500mL3
GB 12289--90
4.7恒温水浴，温度能控制在70～80℃，4.8捣碎机；
4.9紫外分光光度计：具光径长10mm的石英比色杯，4.10分析天平。
5分析步骤
5.1试样的制备
5.1.1液体样品（汁液），可流动浆液（糖浆）和粘稠的样品（果酱）。将样品混合均匀。5.1.2固体样品（水果、蔬菜），将样品切成小块，检出种子和果壳，混匀，取约40g放人捣碎机中捣碎。冷冻样品首先在密闭的容器内融化，将融化液与样品合并后捣碎。5.2试样的分取
5.2.1液体样品
用移液管（4.3）吸取20mL无悬浮物的试样（5.1）用约50mL水稀释并转移至500mL的分液漏斗（4.6）（分液漏斗A）中。或用感量为0.01g的天平称取试样20.00g。5.2.2流动的浆液
取20mL试样（5.1）放在研钵里用20mL水稀释，倾倒过滤。然后连续两次用20mL水溶解残渣，倾倒过滤，收集滤液于500mL分液漏斗（4.6）（.A）中。也可用百分之一天平称取20.00g试样。5.2.3粘稠或固体样品
用百分之一天平称取10.00g样品（5.1），放入250mL锥形瓶（4.5）中，加30~40mL的水。加人约50mg碳酸氢钠（3.7），然后放在水浴（4.7）上，温度控制在70～80℃，放置15～30min后，过滤瓶中的内容物，并用15～20mL水冲洗两次，全部滤液并人500mL分液漏斗（4.6）（A)中，使之冷却。
5.3苯甲酸的提取
5.3.1取1g酒石酸（3.1）放人装有稀释试样（5.2）的分液瀚斗（A）中，加人60mL的乙醚（3.5）并小心摇动。静置使之分层。保留醚层，将水层转人第二个500mL分液斗（4.6）B），用60mL乙醚萃取水相，合并乙醚相于分液漏斗（A）中。5.3.2从乙醚相提取苯甲酸，连续加人氢氧化钠溶液（3.2）10mL、5mL，水10mL两次，每加一次及时摇动，使之分层，收集水相于蒸发Ⅲi中，将IⅢ放在水浴（4.7）上，温度控制在70～80℃，浓缩碱溶液体积至一半为止。
5.4苯甲酸的提纯
冷却后，将蒸发纽的内容物放人盛有20mL硫酸溶液（3.4）和20mL重铬酸钾溶液（3.3）的250mL锥形瓶（4.5）中。盖塞，摇匀，放置1h以上。5.5苯甲酸的萃取
用20～25mL的乙醚萃取上述（5.4）提纯的苯甲酸两次，收集乙醚液，用5mL的水洗乙醚溶液两次，然后小心的倾出乙醚并通过f滤纸过滤至50mL的容量瓶（4.1）中，用乙醚冲洗滤纸并定容至刻度。
5.6测定
用分光光度计（4.9）在267.5.272和276.5nm波长处以纯乙醚为对照，测量乙醚层（5.5）的吸光度。
苯甲酸的吸光度A按式（1）计算：A+A3
A=A,--
式中：A,—-在267.5nm的吸光度；A2——在272 nm的吸光度，
A3-——-在276.5nm的吸光度。
同一试样（5.1）需进行两次测定。5.7标准曲线的绘制
GB 12289—90
向6个50mL容量瓶（4.1）中分别加人苯甲酸标准溶液（3.6），各5.0、7.5~10.0、12.5、15.020.0mL，用乙醚（3.5）稀释至刻度。该标准系列溶液的浓度为10、15、20、25、30、40mg/L。按照5.6进行测定。
以苯甲酸含量mg/L为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线。6分析结果表示
6.1计算方法和公式
6.1.1液体样品
苯甲酸的含量以mg/L表示，按式（2）计算：苯甲酸（mg/L）=m22×
式中：m2—由标准曲线（5.7）上查得苯甲酸的含量，mg/L。6.1.2粘稠或固体样品
苯甲酸的含量以mg/kg表示，按式（3）计算：苯甲酸（mg/kg）=m2
—-称取试样的重量（5.2），g，式中： m 1一
6.2允许差
标准曲线（5.7）上查得苯甲酸含量，mg。同一分析人员对同一试样两个平行测定值之差不得超过10mg/L或10mg/kg。第二篇
分子吸收分光光度法
７原理
（3）
用乙醚从酸化的试样中提取苯甲酸，随后消化、还原，与盐酸羟胺进行莫尔氏反应。于分光光度计上测定已得到的红色化合物吸光度。8试剂和溶液
所有试剂应是分析纯，水用蒸馏水或相当纯度的水。8.1苯甲酸标准溶液：浓度为1g/L。称取100mg苯甲酸精确至0.0001g，溶解于25mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液中并用水稀释至100mL。此标准溶液含苯甲酸 1 mg/ mL 。8.2硝化液
23g硝酸钾（GB647）溶解于250mL浓硫酸（p20=1.84g／mL）中。8.3盐酸羟胺（HG3—997）溶液，20g／L。8.4浓氨溶液（GB 631)(P2o=0.910g/mL）。8.5酚酞溶液
GB 12289—90
1g酚酞（HGB3039）溶解于100mL60%，乙醇（u/v）中。8.6氢氧化钠（GB1266-77）溶液，1mol/L。8.7氢氧化钠溶液，0.1 mol/L。8.8硫酸溶液，25%（m/m）。
8.9卡瑞（Carrez）I溶液：
150g三合水亚铁氟化钾（GB1273）K，Fe(CN）·3H，O)溶解于水中并稀释至1000mL。8.10卡瑞（Carrez）Ⅱ溶液：
300g七合水硫酸锌（GB666）（ZnSO7H2O）溶解于水中并稀释至1000mL。8.11乙醚（HG3--1002），近期重蒸馏。9仪器、设备
常用实验室仪器、设备，包括：分液漏斗，200mL，装有磨口塞。9.1
9.2移液管，1、2、5、10、25和50mL。9.3移液管，2mL、分刻度至o.1mL。9.4容量瓶，10和100mL备有磨口玻璃塞。9.5沸水浴。
9.6试管，直径1.5或2.0cm。
9.7烘箱，能控温在103±2℃。
9.8恒温水浴，控温在20±2℃和60±2℃。9.9分光光度计，适合于533nm波长处进行测量，备光径长10mm的比色杯。10分析步骤
10.1试样的制备
10.1.1液体样品
试样充分混匀。
10.1.2半粘稠样品
将试样混合完全。取部分试样通过四层纱布压汁，弃去初始几滴滤液，收集剩余的部分进行测定。10.1.3粘稠样品
试样充分混匀。
10.2试样的分取
10.2.1液体样品
用移液管（9.2），取10mL试样移至200mL分液漏斗（9.1）中。10.2.2粘样品
称取试样10g，准确至0.01g，加少量水，加2滴酚酞溶液（8.5），再加氢氧化钠溶液（8.6）使之呈碱性。放在沸水浴（9.5）上加热30min。冷却后，移至100mL容量瓶中，加人2mL卡瑞（Carrez）I溶液（8.9）和2mL卡瑞（Carrez）Ⅱ溶液（8.10），用水稀释至刻度。放置30min，然后离心或过滤。该澄清的溶液用于提取（10.3）。10.3苯甲酸的提取和纯化
10.3.1液体样品
加2mL硫酸溶液（8.8）至盛有试样的分液漏斗中。加25mL乙醚（8.11),振荡分出醚层，用25mL乙醚再重复振荡提取-次，合并乙醚相。加1滴酚酞溶液（8.5）加2mL氢氧化钠溶液（8.6）并振荡5min。分离碱相。然后用2mL氯氧化钠溶液（8.7）振荡提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶（9.4）中并用水稀释至刻度。160
10.3.2粘稠样品
GB.12289--90
50mL澄清后的溶液（10.2.2）于200mL分液漏斗中，加50mL硫酸溶液（8.8），加50mL乙醚，振荡，分出醚层。用50mL乙醚重复提取两次以上。合并乙醚相于分液漏斗中。加5mL水，振荡，并弃去水相。
加2mL氢氧化钠溶液（8.6）于醚层，振荡（形成苯甲酸钠）分出碱相，然后用2mL氢氧化钠溶液（8.7)再振摇提取2次。收集碱相提取液于10mL容量瓶（9.4)中，并用水稀释至刻度。10.4测定
10.4.1显色
根据苯甲酸含量，取0.5～1.0mL碱提取液移人试管（9.6）中，在沸水浴（9.5）上蒸发至干。移至烘箱（9.7）中，在103±2℃下干燥15min。随后冷却，加1mL硝化液（8.2)放在沸水浴上加热20min（开始时振摇试管几分钟）。移人水浴（9.8），保持在20±2℃下，放置15min。小心的加2mL水，再放置15min。加10mL氨溶液（8.4），分次加，最初的5mL，每次加0.5mL，剩余的每次加1mL。放在水浴上15min。注意水浴的温度控制在20±2℃。加2mL盐酸羟胺溶液（8.3）并放在60±2℃水浴（9.8）上保持5min。
10.4.2分光光度计测量
冷却试管，移人比色杯。在30min之内用分光光度计，在533nm波长处，以试剂空白为对照，测量溶液的吸光度。
同一试样作平行测定。
10.5标准曲线的绘制。
10.5.1标准系列溶液的制备
用移液管（9.3）连续向5支试管中转移苯甲酸标准溶液（8.1)0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，相对应的苯甲酸量为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mg。向另1支试管中移人氢氧化钠溶液（8.7）0.5mL作试剂空白。10.5.2显色
将试管移人沸水浴中蒸发至干。然后将试管移人烘箱中，并在103土±2℃下干燥15min。以下步骤按10.4.1第二段起所描述的进行。10.5.3分光光度测量
按10.4.2规定的操作进行。
10.5.4标准曲线的绘制
以苯甲酸标准溶液的毫克数为横坐标，以所对应的吸光度为纵坐标，绘制曲线。11分析结果表示Www.bzxZ.net
11.1计算方法和公式
11.1.1液体样品
苯甲酸的含量以mg/L表示，按式（4）计算：m×V2
苯甲酸（mg/L）
×1000
式中：m一从标准曲线查得苯甲酸的量，mgV
一试样分取的体积，mL，
V2—碱提取液的体积，mL，
一进行显色时碱提取液的体积，m L。V3—
11.1.2粘稠样品
GB 12289—90
苯甲酸的含量以mg/kg表示，按式（5）计算；苯甲酸（mg/kg）
式中：m,-
m2xVi ×V3
m,xV,xV
-试样分取的量，g,
-从标准曲线查得苯甲酸的最，mg一制备的澄清液的体积，mL
V，—用于提取的澄清的液体积，m L，V3—碱提取液的体积，m L
V—进行显色的碱溶液体积，mL。11.2允许差
同-分析人员对同-一试样两个平行测定值之差不应超过10mg/ L或10mg/kg。附加说明：
本标准由中华人民共和国农业部提出，全国农业分析标准化技术委员会归口。本标准由中国农业科学院分析测试中心负责起草。本标准主要起草人李伟格、陈必芳、李兰。162
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