【国家标准(GB)】 水果、蔬菜维生素C含量测定法(2.6-二氯靛酚滴定法)

1适用范围
中华人民共和国国家标准
:635.1/.8
水果、蔬菜维生素C含量测定法
(2.6一二氯靛酚滴定法）
DeterminationofvitaminCinvegetables andfruits(2,6-dichloro-indophenol titration method)UDC634.1/.8
GB/T6195—86
本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定（不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐),不适用于深色样品。2测定原理
染料2,6一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色,还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。
用蓝色的碱性染料标准溶液,对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。3仪器设备
高速组织捣碎机：8000~12000r/min。a.
分析天平。
滴定管：25ml、10ml。
d容量瓶：100ml。
锥形瓶：100ml、50ml。
吸管：10ml、5ml、2ml、1ml。
烧杯：250ml、50ml。
h.漏斗。
试剂(凡未加说明者均为分析纯）4
4.1浸提剂
4.1.1偏磷酸：2%溶液(W/M)*，
4.1.2草酸：2%溶液(W/V)。
4.2抗坏血酸标准溶液(1mg/ml)：称取100mg(准确至0.1mg)抗坏血酸**,溶于浸提剂中并稀至100ml。现配现用。
*偏磷酸不稳定，切勿加热。
**一般抗坏血酸纯度为99.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检查其纯度，可按附录B方法标定。
4.32,6一二氯靛酚(2.6一二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200ml热蒸馏水中，然后称取2.6一二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至250ml过滤至棕色瓶内.保存在冰箱中。每次使用前.用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1ml抗坏血酸标准溶液于50ml锥形瓶中.加入10ml浸提剂摇匀.用26一二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时,另取10ml浸提剂做空白试验。滴定度按式(1)计算：
滴定度T(mg/ml)=
式中：T一每毫升2,6一二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数；C——抗坏血酸的浓度,mg/ml;
V吸取抗坏血酸的体积,ml;
V1——滴定抗坏血酸溶液所用2,6一二氯靛酚溶液的体积,ml;V2——滴定空白所用2,6一二氯靛酚溶液的体积,ml。白陶土(或称高岭土),对维生素C无吸附性。4.4
5测定步骤
5.1样液制备：称取具有代表性样品的可食部分100g，放入组织捣碎机中，加100ml浸提剂，迅速捣成匀浆。称10～40g浆状样品，用浸提剂将样品移入100ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g白陶土脱色后再过滤。5.2滴定：吸取10ml滤液放入50ml锥形瓶中，用已标定过的2,6一二氯靛酚溶液滴定直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时做空白试验。6
结果计算
6.1计算公式：
维生素C按式(2)计算：
(V-VO)·T·A
维生素C(mg/100g)=
式中：V——滴定样液时消耗染料溶液的体积,ml;V0—滴定空白时消耗染料溶液的体积,ml;T——2.6—二氯靛酚染料滴定度，mg/ml:A—稀释倍数；
W—样品重量，g。
·（2)
6.2平行测定的结果,用算术平均值表示,取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。
6.3平行测定结果的相对相差,在维生素C含量大于20mg/100g时,不得超过2%,小于20mg/100g时，不得超过5%。
附录A
二甲苯一二氯靛酚比色法
A.1适用范围
(补充法)
测定深色样品中还原型抗坏血酸。A.2测定原理
用定量的2,6一二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应,多余的染料在酸性环境中呈红色,用二甲苯萃取后比色,在一定范围内,吸光度与染料浓度呈线性相关,收剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。A.3仪器设备
A.3.1分光光度计或比色计。
A.3.2具塞试管：50ml。
A.4试剂(皆为分析纯)
A.4.1偏磷酸：2%溶液(W/V)。
A.4.2乙酸钠缓冲溶液(pH4.0)：500ml50%(W/V)的乙酸钠溶液与500ml冰乙酸混合。A.4.32,6-二氯靛酚溶液：参照4.3条。A.4.4二甲苯。
A.5测定步骤
A.5.1标准曲线的绘制：用6只50ml具塞试管加入5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓免费标准bzxz.net
冲液，然后依次加入0.0，0.1,0.3,0.6,0.9,1.2及1.5ml2,6一二氯靛酚溶液，用力摇动5s,再向各试管中加入10ml二甲苯,再激烈摇动20s,静置分层后与试样管同时比色(无染料的试液作空白),以吸光度为纵坐标,2,6一二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标准曲线。
A.5.2吸取5ml2%偏磷酸样品浸出液（参照5.1条）于50ml具塞试管中，加5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液和2ml染料溶液，激烈摇动5s,立即加入10ml二甲苯，再激烈摇动20s.待静置分层后,从二甲苯层中小心吸取一份，放入1cm比色杯中于500nm波长下进行比色。记录吸光度A,在标准曲线上查出二甲苯层中2,6一二氯靛酚的毫升数。整个操作应在30min内完成。
A.6计算公式
(2-VTA
维生素C(mg/100g)
2一一所用2,6一二氯靛酚染料的体积,ml：式中：
V——查得2,6一二氯靛酚溶液的体积,ml;A—稀释倍数
T——染料滴定度,mg/ml;
W—样品重量，g。
附录B
抗坏血酸纯度检验法
(补充件)
B.1称取100mg（准确至0.1mg）抗坏血酸待测样品，用2%偏磷酸或2%草酸溶液溶解稀释至100ml。
吸取抗坏血酸溶液1ml于盛10ml2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5ml和1%淀粉溶液五滴，摇勺。用1.67×10**一4M碘酸钾标准溶液滴定终点为极淡蓝色。
B.3计算公式
B.3.1抗坏血酸浓度按式(B1)计算：V1X0.088
抗坏血酸浓度
式中：V1-
滴定时消耗1.67×10**-4M碘酸钾标准溶液的体积，ml；V2——所取抗坏血酸溶液的体积,ml;(B1)
—1ml1.67×10**4M碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量，mg；0.088
抗坏血酸纯度(%)按式(B2)计算：.v
抗坏血酸纯度(%)=
式中：C—一所标定抗坏血酸的浓度,mg/ml;V——抗坏血酸溶液总体积,ml;
W—抗坏血酸重量,mg。
附加说明：
本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。国家标准局1986-01-18发布
1986-08-01实施
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