【国家标准(GB)】 漆膜耐霉菌测定法

中华人民共和国国家标准
漆膜耐霉菌测定法
GB 1741—79(89)
国家标准总局批准并发布
1979-09-15批准
1980-01-01实施
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本标准适用于漆膜耐霉菌性能的测定。一般规定
1.材料和仪器设备
无色玻璃试管：直径15毫米，长150毫米；无色玻璃培养Ⅲ：直径90毫米；三角瓶：50毫升、100毫升、500毫升、1000毫升；量筒：100毫升；
量杯：500毫升；
无色玻璃漏斗：
不锈钢刀；
试管架：20～40孔；
酒精灯：150毫升；
喷雾器：医用喉头喷雾器；
马口铁板：15×40×0.2~0.3毫米；铝板：LY12,15×40×1～2毫米；保温箱：25~60℃；
高压灭菌锅：1.4公斤/厘米2；
天平：感量为0.001克；
接种环：如图。
1柄(圆木涂漆);2—杆($2~3毫米，粗铝线改制);3不锈钢丝(直径0.5~0.8毫米);4—不锈钢丝—端的小环2.试剂
硝酸铵（GB659-77）：化学纯;
磷酸氢二钾(HGB3155-—60)：化学纯；氯化钾(GB646--77)：化学纯；
硫酸镁（GB67177)：化学纯；
硫酸亚铁(GB 664—77)：化学纯；蔗糖：绵白糖或白砂糖；
琼脂；
吐温80-聚羟基乙烯油酸山梨醇酐；95%乙醇(GB679—65)：化学纯。3.各种培养基及无菌水的制备
(1)无基盐培养基(供检验样品用)的组成：434
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硝酸铵：1.5克；
磷酸氢二钾：1.0克；bZxz.net
氯化钾：0.25克；
硫酸镁：0.5克；
硫酸亚铁：0.002克；
琼脂：15~20克（用量冬少夏多）；水（pH值6.8～7.0)：1000毫升。按上列组成配好的培养基，放在三角瓶中，盛放量为瓶深的1/2，塞上棉塞（棉塞要求松紧适中，深入瓶口内约3厘米，瓶外部分能握住，保持整洁），用纸包住棉塞。放入高压灭菌锅中，在1.07～1.1公斤/厘米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，开盖取出，稍凉就可趁热倒在培养Ⅲ中，培养基厚约5～7米。如当天不用，应将灭菌后的培养基存放在阴凉清洁处，用时再加热融化后倒人培养皿中，不能用培养盛放保存。(2)合成培养基(供培养霉菌用)的组成：硝酸铵：1.5克；
磷酸氢二钾：1.0克；
氯化钾：0.5克；
硫酸镁：0.5克；
硫酸亚铁：0.01克；
蔗糖：30克；
琼脂：15~20克（用量冬少夏多）；水（pH值6.8～7.0)：1000毫升。按上列组成配好的培养基放在三角瓶中，盛放量为瓶深的1/2，加热使琼脂完全融化后，用漏斗装人试管内3厘米深（装时不要让培养基沾及管口，如沾及可用湿纱布擦去）。塞上棉塞（棉塞要松适中，深人管内2厘米，管外留2厘米，保持整洁），扎成一捆，用纸包住棉塞。然后放人高压灭菌锅中，试管必须直立，在1.07～1,1公斤/米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，分开斜放在横棍上，使培养基项部保持在试管的中部（除棉塞外），待其自然凉成冻后，存放阴凉清洁处备用。(3)麦芽汁培养基(供交替培养霉菌用）将啤酒厂取得的未加苦酒花的麦芽汁,用水冲稀至糖度表10度，加人琼脂15~20克/升（用量冬少夏多）。加热使琼脂完全融化后，用漏斗装人试管【详见方法（1))放人高压灭菌锅中，在0.7～0.8厘米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，分开斜放在横棍上，待其自然冷成厅/冻后，存放阴凉清洁处备用。(4)马铃薯培养基(供交替培养霉菡用，与麦芽汁培养基可任意选用）将新鲜马铃薯洗净去皮，用不锈钢刀切成长斜条，大小以能放人试管，斜块顶部保持在试管中部为宜，放入试管中。每管加1毫升水，塞上棉塞，扎成捆，用纸包住棉塞，放人高压灭菌锅中，在1.07～1.1公斤/厘米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，趁热取出试管，放在阴凉清洁处备用。
(5)无菌水
用100份蒸馏水加0.005份分散剂（吐温80）配成无菌水，放在100毫升三角瓶中，盛435
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放量为瓶深的1/2，塞上棉塞，用纸包住棉塞。放人高压灭菌锅中，在1.07～1.1公斤/厘米2蒸汽压力下灭菌30分钟。待表压降至零时，取出后放阴凉清洁处备用。4.菌种及混合霉菌孢子（种子）悬浮液的制备(1)菌种：黄曲霉、黑曲霉、萨氏曲霉、土曲霉、焦曲霉、黄青霉、拟青霉、芽枝霉、毛壳霉、木霉。
（2)菌种种植培养
先将接种环在酒精灯上烧红金属丝部分，杀死被污的杂菌，再放入消毒（含乙醇70～75%的酒精)瓶中冷却，酒精量以没过金属丝2/3处为宜。将新鲜培养基试管与老菌管并放在左手心上，由中央三指和掌心握住试管，先分别旋松两试管上的棉塞。右手用三指拿住接种环柄，自消毒酒精瓶中取出，并迅速使金属丝部分通过火苗，燎去酒精而不使环烧热。用右手小指和掌心同时夹住两管的棉塞，轻轻拔出。左手将试管微向上，靠近酒精灯火苗。右手接种环悬空伸入老菌管中，在菌种表面轻擦一下，环上就沾上霉菌孢子，再仔细地退出接种环，将近管口时，左手将两试管口稍离火苗，同时右手接种环迅速退出老菌管进人新鲜培养基管内，在培养基表面轻轻擦一下。退出接种环，按原管塞住棉塞。然后，在火苗上把接种环烧红灭菌，放在消毒酒精瓶中冷却。种好的新菌管用标签标明菌号、接种日期，集中在29～30℃保温箱中培养。老菌管暂存。新菌管培养5～7天后，取出与老菌管对照检查，应无错误、污染。将新菌管保存在阴凉清洁处。将老菌管灭菌后洗净。保存的菌种需要定时更换新菌，一般夏季每月更换一次，冬季两月更换一次。
作为试验用菌种，培养10～14天,取出制备混合霉菌孢子悬浮液。霉菌菌种可用三种培养基交替培养，以保持生长良好。(3)混合霉菌孢子(种子)悬浮液
将预先培养好的试验菌种，按每10毫升无菌水，菌种5环的量计算总的无菌水所需接种环数，再分别计算每种菌所需接种环数。孢子多的取种环数可少些，孢子少的，取种环数可多些。接种环先经烧红灭菌，在酒精中冷却。逐个将菌种子取出放在无菌水中，取完后，塞上棉塞，充分摇动，使霉菌种子在无菌水中充分的分散。混合霉菌孢子悬浮液，必须当天制备，当天使用。用过的菌管经高压蒸汽灭菌后洗净备用。二、测定方法
5．甲法：培养硼法
本方法适用于使用小片试样检验漆膜耐霉菌的性能。将三块马口铁板（水性漆可选用铝板）用溶剂擦洗干净，按漆膜制备法的喷涂法制备漆膜，待漆膜实干后，平放在无机盐培养基表面。用喷雾器将悬浮液均匀细密地喷在样板上，稍鲸干后，盖上皿盖。盖口注明试样、编号和日期，放入保温箱中保持在29～30℃培养。三天后检查样板表面生霉是否正常，若生霉正常可将培养Ⅲ倒置，使培养基部分在上，这样培养基不易于，样板表面凝露减少。若不见霖菌生长（从培养基上可以辨明）则需另喷混合霉菌孢子悬浮液。七天后检查试样生程度，十四天后总检查。按本标准评定等级。检验周期如产品标准中另有规定，按产品标准规定进行。6.乙法：局部法
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本方法主要适用于大型器件成品漆膜的耐菌性能的测定。在大件成品试样局部的漆膜表面上，均勾细密地喷洒混合孢子悬浮液。稍晾干后，先放上半块平板培养基，盖上留下半块平板培养基的圆皿（半个培养皿），使上、下两个半块培养基互相交又，构成优越的生环境。四周用胶布固定（但不能将盖缝封死），标明试样编号和日期，放人保温箱中，在29～30℃培养。三天后检查样板表面生霉状况，如生霉正常，七天后检查生霉程度，十-四天后总检查，按标准评定等级。检查周期如产品标准中另有规定，按产品标准规定进行。三、检查方法和评级标准
直接从正面或侧面观察样板表面霉菌、菌体、菌丝生长状况。在十四天培养期内以不开盖检查为宜，以保持样板在培养过程的稳定状况，避免霉菌在温度改变时枯萎，影响检验的准确性。
评级标准
无长霉
长霉斑点在1毫米左右,分布稀疏长霉斑点在2毫米左右或蔓延生长在2毫米范围内，霉斑分布最大量不超过整个表面的四分之一
长斑点在2塞米左右或分布量占整个表面的二分之一左右长斑点大部分在5毫米以上或整个表面布满菌丝四、注意事项
7.培养皿灭菌法
将洗净晾干的培养皿，几个一起用纸包住，在1.3公斤/厘米2蒸汽压力下灭菌1小时后取出，在110℃的烘箱中烘干。8.操作室灭菌法
（1)甲醛熏蒸法
把高锰酸钾放在地上的瓷盘内，然后倒入定量的甲醛，使高锰酸钾湿透，即迅速放出气体，有效地清洁了室内的空气。应注意在操作前必须使窗户及通风管道关闭。一般每米2用5克高锰酸钾，3毫升37%的甲醛即可。加完甲醛后，操作人员必须迅速退出并关好门，在24小时内不使人进人室内。
(2)乳酸消毒法
每100米3用80%乳酸100毫升，加热熏蒸30~60分钟。9.高压蒸汽灭菌锅操作法
先检查压力表和安全阀，如用外加热，必须检查锅内水位保持安全位置。437
注传慢图
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装好物品后，盖紧锅盖，打开放气口。通人蒸气或加热到放气口出现水汽时，表明锅内空气已被赶尽，关好放气口。继续加热升压至所需压力，保持压力到足够时间，停止加热。待冷却至表压0.2公斤/厘米2以下时，打开放气口，放掉剩余压力，即可开启锅盖，取出物品，晾干水汽，保存待用。
注：自本标准实施之日起，原部标准HG2-740—77作废。438
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