【国家标准(GB)】 食品中淀粉的测定方法 酶-比色法

GB/T16287-1996
食品中淀粉测定方法，一般采用化学方法一酸水解法。由于酸水解淀粉时，样品中的其他糖类被分解为还原糖（单糖），造成淀粉的测定结果偏高。本标准采用酶-比色法是在检索了近20年74篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。要使食品中的淀粉含量测定准确，必须使淀粉完全溶解。本标准吸取了法国Cuher.J.C1982年总结的有效溶解方法，即二甲基亚矾法，达到了使淀粉完全溶解的目的。
淀粉酶解后的产物——葡萄糖的测定方法，与GB/T16285—1996保持一致。本标准的附录A是标准的附录。
本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：中国农垦北方食品监测中心。本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。本标准主要起草人：张宗城、刘宁、郝煜。340
1范围
中华人民共和国国家标准
食品中淀粉的测定方法
酶－比色法
Method for determination of starch in food-Enzyme-colorimetric method
本标规定了用酶-比色法测定食品中淀粉的方法。本标准适用于各类食品中淀粉的测定。本标准最低检出限量为0.09μg（淀粉)/mL（试液）。2原理
GB/T 16287--- 1996
淀粉在淀粉葡葡糖苷酶(AGS)催化下，最终水解为葡萄糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催化β-D-葡萄糖(葡萄糖水溶液)氧化，生成D-葡萄糖酸--内酯和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催化,过氧化氢与4~氨基安替比林和苯酚生成红色醒亚胺。在505nm波长处测醒亚胺的吸光度，计算食品中淀粉的含量。
(C,H1:O,),+nHO-
+C.H1:O.+H2O2
H,O,+C,H,OH+CuHi,N,O PODC.H,NO+H,O3试剂
3.1组合试剂盒
1号瓶：内含淀粉葡萄糖苷酶（amyloglucosidase）2ooU（活力单位）、柠檬酸、柠檬酸三钠2号瓶：内含0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH一7.0）200mL，其中含4-氨基安替比林为0. 001 54 mol/L;
3号瓶：内含0.022mol/L苯酚溶液200mL，4号瓶：内含葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase）8o0U（活力单位）、过氧化物酶（辣根，peroxidase）2000U（活力单位）。
1、2、3、4号瓶须在4℃左右保存。3.2酶试剂溶液
3.2.1将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL。轻轻摇动（勿剧烈播动），使酶完全溶解。此溶液即为淀粉葡萄糖苷酶试剂溶液，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1 mol/L,pH一4.6。在4℃C左右保存，有效期1个月。
3.2.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。3.2.3将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻摇动（勿剧烈摇动），使酶完全溶解，即葡萄糖氧化国家技术监督局1996-04-10批准1996-12-01实施
GB/T 16287—1996
酶-过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存，有效期1个月。3.3二甲基亚砜（分析纯）。
3.46mol/L.盐酸溶液
将12mol/L盐酸（GB622,分析纯）与等体积重蒸馏水混合，摇匀。3.56mol/I.氢氧化钠溶液
称取24g氢氧化钠（GB629.分析纯），溶于1000mL重蒸馏水中，摇匀。3.6淀粉标准溶液
称取经100土2℃干燥2h的可溶性淀粉（HGB3095，分析纯）0.2000g，溶于少量60℃重蒸馏水中，冷却后定容至100ml.，摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00-—→V100，即200μg/mL淀粉标准溶液。4仪器和设备
实验室常规仪器及下列各项：
4.1研钵或粉碎机。
4.2分析筛。
4.3组织捣碎机。
4.4恒温水浴锅。
4.5可见光分光光度计。
4.6酸度计或pH计。
4.7微量移液管：1.00mL，精度0.01mL。5试样的制备
5.1固体样品
粉末状样品：取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100目分析筛，置于密闭的玻璃容器内。
5.2糊状样品
取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。5.3固液体样品
取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。5.4液体样品
取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。6试液的制备
用100mL三角瓶称取试样（5.1～5.4)0.2～2g（精确至0.0001g），加入20ml二甲基亚砜（3.3）和6mol/1.盐酸溶液（3.4）5mL，于60士1℃C水浴锅中加热30min（每隔5min摇动-次）。冷却至室温后，用6mol/L氢氧化钠溶液（3.5)和酸度计调整pH值至4.6左右。将溶液转移到250mL容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度，摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液30mL，即为试液。试液中淀粉含量高于1000μg/mL时，可以适当增加定容体积。7分析步骤
7.1标准曲线的绘制
用微量移液管吸取0.000.20，0.40，0.60,0.80，1.00mL淀粉标准溶液（3.6），分别置于10mL比色管中，各加入1ml淀粉葡萄糖苷酶试剂溶液（3.2.1)摇匀，于58土2℃水浴锅中恒温20min。冷却至342
G/T 16287-1996
室温，加入3ml葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液（3.2.3）.摇匀，在36土1℃水浴锅中恒温40min冷却至室温，用重蒸馏水庭容至10mL，摇匀。用1cm比色m，以淀粉标准溶液含量为0.00的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处测定各比色管中溶液的吸光度。以淀粉含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。7.2试液吸光度的测定
用微量移液管吸取0.20~2.00mL试液（6)（依试液中淀粉的含量而定），置于10mL比色管中。以下按7.1步骤操作；但须用等量试液（6)调整分光光度计的零点。测出试液吸光度后，在标准曲线上查出对应的淀粉含量。
8分析结果的获述
食品中淀粉的含量以质量百分率表示，按式（1)计算：X
式中：X
1000×1000×100
样品中淀粉的含量，质量百分率，%；标准曲线上查出的试液中淀粉含量，：C
m-试样的质量，g；
试液的定容体积，mL
V，——测定时吸取试液的体积,mL。计算结果精确至小数点后第二位。9允许差
样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的5.0%。C
× 10 000
GB/T 16287—-1996
附录A
（标准的附录）
淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及判定规则A1技术要求
A1.1酶活力
淀粉葡萄糖苷酶酶活力(U/mg）：≥2;葡萄糖氧化酶酶活力（U/mg）：≥20；过氧化物酶酶活力（U/mg）：≥50。A1.2干扰酶
淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、β-果糖苷酶、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
A2试验方法
用微量移液管吸取0.50mL淀粉标准溶液（3.6），置于10mL比色管中，加入100μg乳糖（HG31000,分析纯）、100μg蔗糖（HG3--1001，分析纯）和100μg纤维二糖（生化纯），再加入1mL淀粉葡萄苷酶试剂溶液（3.2.1)，以下按7.1步骤操作。测定吸光度后，在标准曲线（7.1)上查出对应的淀粉含量，按式(A1)计算淀粉的回收率：bZxz.net
0. 5×200×100
式中：R淀粉的回收率，%；
C淀粉的实测值，μg。
A3判定规则
测得淀粉的回收率，如在95%~~105%范围内，则判定淀粉葡萄糖苷酶、葡萄糖氧化酶和过氧化物酶符合技术要求。
GB/T16287-1996《食品中淀粉的测定方法酶比色法》第1号修改单
本修改单经国家技术监督局于1997年9月11日以技监国标函（1997）第200号文批准，自1998年1月1H起实施1.3.5条第2行中的“溶于1000ml重蒸馏水中更改为\溶于100ml重蒸馏水中”。2.7.2条改用新条文：
“7.2试液吸光度的测定
用微量移液管取0.20～2.00ml(依试液中淀粉的含量而定）试液（6)，置于10ml比色管中。以下按7.1步骤操作但须用等量试液（6)调整分光光度计零点，操作步骤如下。取等量试液（6)加入3ml葡葡糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液（3.2.3)，摇匀，在36土1（水浴锅中恒温40min。冷却至室温，用重蒸馏水定容至10ml。用此溶液调整分光光度计零点。测出试吸光度后，在标准曲线上查出对应的淀粉含量。”刊载于1998年第1期《中国标准化》344
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