【国家标准(GB)】 食品中蔗糖的测定方法 酶-比色法

GB/T 162861996
食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他糖类被水解为还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶-比色法是在检素了近20年148篇国外文献的基础上，经过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性β果糖苷酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果糖)，灵敏度高，操作简便，因此测结果准确。煎糖酶解后的产物—葡葡糖的测定方法，与GB/T16285-1996保持—致。本标准的附录A是标准的附录。
本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：中国农垦北方食品监测中心。本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。本标准主要起草人：张宗城、刘宁、郝煜。335
1范围
中华人民共和国国家标准
食品中蔗糖的测定方法
酶-比色法
Method for determination of sucrose in foodEnzyme-colorimetric method
本标准规定了用酶-比色法测定食品中蔗糖的方法。本标准适用于各类食品中蔗糖的测定。本标最低检出限量为0.04ug（蔗糖）/mL（试液）。2原理
GB/T16286-1996
在β-果糖苷酶（B-FS）催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡葡糖氧化酶（GOD）在有氧条件下，催化β-D-葡葡糖（葡开糖水溶液状态）氧化，生成D-葡萄糖酸-8-内和过氧化氢。受过氧化物酶（POD）催化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色醒亚胺。在波长505nm处测定醒亚胺的吸光度，计算食品中蔗糖的含量。
3试剂
3.1组合试剂盒
Ch:H2Ou+H:O B-FS-C.Hi,O(G)+CHi:O(F)GODC.Ha.O +H,O2
CH120.(G)+02 -
HIO +C.H.OH+CuH.N.O PODC,H,NO+H.O1号瓶：内含β-果糖苷酶（frucrosidase）40oU（活力单位）、柠檬酸、柠檬酸三钠：2号瓶：内含0.2mol/L.磷酸盐缓冲液（pH=7.6)200mL，其中含4-氨基安替比林0.00154mol/L；3号瓶：内含0.022mol/L苯酚溶液200mL4号瓶：内含瀚萄糖氧化酶（glucoseoxidase）8ooU（活力单位）、过氧化物（辣根，peroxidase）2000U（活力单位）。此内容来自标准下载网
1、2、3.4号瓶须在4℃左右保存。3.2酶试剂溶液
3.2.1将1号瓶中的物质用重蒸罐水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动（勿剧烈播动），使酶完全溶解。此溶液即为β-果糖苷酶试剂，其中柠檬酸（缓冲溶液）浓度为0.1mol/L，pH=4.6。在4C左右保存，有效期个月。
3.2.2将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。3.2.3将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻摇动（勿剧烈摇动）使酶完全溶解，即为葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存，有效期一个月。国家技术监督局1996-04-10批准336
1996-12-01实施
3.30.085mol/L亚铁氰化钾溶液
GB/T16286-1996
称取3.7名亚铁氰化钾[K.Fe（CN）·3H2O.GB1273，分析纯」，溶于100mL重蒸馏水中，摇勾。3.40.25mol/L硫酸锌溶液
称取7.7g硫酸锌（ZnSO4·7H2OGB666，分析纯），溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。3.50.1mol/1.氢氧化钠溶液
称取0.4g氢氧化钠（GB629，分析纯），溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。3.6熊糖标准溶液
称取经100土2C烘烤2h的蔗糖（HG3-1001分析纯）0.4000g，溶于重蒸馏水中，定容至100 mL,摇匀。将此溶液用重蒸馏水稀释V10.00—V100,即为400 μg/mL蔗糖标准溶液。4仪器和设备
实验室常规仪器及下列各项：
4.1研钵或粉碎机。
4.2分析筛。
4.3组织捣碎机。
4.4恒温水浴锅。
4.5“可见光分光光度计。
4.6微量移液管：1.00mL精度0.01ml.。5试样的制备
5.1固体样品
粉末状样品：取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的玻璃容豁内。颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，或用研钵研细，通过100目分析筛，置于密闭的玻璃容器内。
新鲜水果、蔬菜等固体样品：取有代表性的可食部分至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。
5.2糊状样品
取有代表性的样品至少200，充分混勾，置于密闭的玻璃容器内。5.3固液体样品
取有代表性的样品至少200g，用组织捣碎机捣碎，置于密闭的玻璃容器内。5.4液体样品
取有代表性的样品至少200多，充分混匀，置于密闭的玻璃容器内。6试液的制备
6.1不含蛋白质的试样
用100ml烧杯称试样（5.1~5.4）0.5~108（精确至0.0001g），加少量重蒸馏水，转移到250mL容量瓶中，用重蒸馏水定容至刻度。摇匀后用快速滤纸过滤。弃去最初的滤液30mL，即为试液。试液中蔗糖含量大于2000/mL时，应适当增加定容体积。6.2含蛋白质的试样
用100ml烧杯称取试样（5.1~~5.4）0.5~10g（精确至0.0001g），加少量重蒸馏水，转移到250ml.容量瓶中，加入0.085mol/L.亚铁氰化钾溶液（3.3)5mL、0.25mol/L硫酸锌溶液（3.4）5mL和0.1mol/L氢氧化钠溶液（3.5）10mL，使蛋白质沉淀。用重蒸馏水定容至刻度，摇勾后用快速滤纸过滤。弃去最初滤液30ml.，即为试液。337
GB/T 16286-1996
试液中蔗糖含量大于2000μg/mL时，应适当增加定容体积。7分析步骤：
7.1标准曲线的绘制
用微量移液管取0.00，0.20,0.40,0.600.80，1.00mL蔗糖标准溶液（3.6），分别置于10mL比色管中，各加入1.0mLβ-果糖苷酶试剂溶液（3.2.1），摇匀，在36士1℃C水浴锅中恒温20min。取出后加入3mL葡萄糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液（3.2.3），在36土1℃水浴锅中恒温40min。冷却至室温，用重蒸馏水定容至10mL。用1cm比色血，以蔗糖标准溶液含量为0.00的试剂溶液调整分光光度计的零点，在波长505nm处测定各比色管内溶液的吸光度。以蔗糖含量为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标准曲线。7.2试液吸光度的测定
用微量移液管取0.20～5.00mL（依试液中蔗糖的含量而定）试液（6.1~～6.2),置于10mL比色管中。以下按7.1步骤操作；但须用等量试液（6.1～6.2)调整分光光度计零点。测出试液吸光度后，在标准曲线上查出对应的蔗糖含量。8分析结果的囊述
食品中蔗糖的含量以质量百分率表示，按式（1)计算：C
式中;X -
× 100=
1000×1000
-样品中蔗糖的含量，质量百分率，%；C-—标准曲线上查出的试液中蔗糖含量，ug;m
试样的质量，g；
试液的定容体积，mL；
一测定时吸取试液的体积，mL。计算结果精确至小数点后第二位。9允许差
同一样品的两次测定值之差，不得超过两次测定平均值的5.0%。338
X 10 000
（1）
GB/T 16286—1996
附录A
（标准的附录）
β-果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶的技术要求、试验方法及判定规则A1技术指标
A1.1酶活力
β巢糖苷酶活力(U/mg)：≥100;葡葡糖氧化酶酶活力（U/mg）：≥20过氧化物酶酶活力(U/mg）：≥50。A1.2扰酶
β果糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶都不得含有纤维素酶、淀粉葡萄糖苷、半乳糖苷酶和过氧化氢酶。
A2试验方法
用微量移液管吸取0.50mL蔗糖标准溶液（3.6），置于10mL比色管中，加入100ug乳糖（HG3-m1000，分析纯）、100ug可溶性淀粉（HGB3095，分析纯）和100热纤维二糖（生化纯），再加人1.0mL8果糖苷酶试剂溶液（3.2.1）。以下按7.1步骤操作。测定吸光度后，在标准曲线（7.1）上查出对应的燕糖含量，按式(A1)计算蔗糖的回收率：R0.5400×100
式中：R-—蔗糖的回收率，%;
C蔗糖的实测值ug。
A3判定规则
·(A1)
测得蔗糖的回收率，如在95%105%范围内，则判定β果糖苷酶、葡萄糖氧化酶和过氧化物酶符合技术要求。
GB/T16286-1996《食品中蔗糖的测定方法酶一比色法》第1号修改单本修改单经国家技术监督局于1997年9月11日以技监国标函（1997）第200号文批准，座1998年1月1日起实施。1.3.1条第3行中的\(PH一7.6)\更改为“(PH7.0)\。2、7.2条改用新条文：
“7.2试液吸光度的测定
用微量移液管取0.20~5.00ml依试液中蔗糖的含量而定）试液（6.1~6.2），置于10ml比色管中。以下按7.1骤操作；征须用等量试液(6.1~6、2)调整分光光度计誉点，操作步骤如下。取等量试液（6,1～6.2)加人3ml葡葡糖氧化酶-过氧化物酶试剂溶液（3.2.3),摇匀在36士1C水浴锅中恒激40min。玲却至室，用重蒸馏水定容至10ml。判批溶液调整分光光度计零点。測出试液吸光度后，在标准曲线上查出对应的蔗糖含量。”刊载于1998年第1期《中国标准化》339
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