【国家标准(GB)】 粮食、油料检验 过氧化氢酶活动度测定法

中华人民共和国国家标准
粮食、油料检验
过氧化氢酶活动度测定法
Inspection of grain and oilseedsMethods for determination of hydrogen peroxidase activity本标准适用于商品粮食过氧化氢酶活动度的测定。1仪器和用具
1.1恒温水浴锅，
1.2电炉，
1.3离心机或吸滤装置；
1.4锥形瓶：100ml，
1.5量筒：10、15ml，
1.6移液管5、10、20ml，
1.7研钵，
1.8滴定管、细口瓶、漏斗等。
2试剂
2.13%过氧化氢溶液，取30%过氧化氢溶液3ml加水稀释至30ml，2.210%硫酸溶液，
2.30.1N高锰酸钾溶液，
2.4pH7.7索伦逊磷酸盐缓冲液，甲液，称取磷酸氢二钠11.876g溶于11水中。乙液，称取磷酸二氢钾9.078g溶于11水中。临用时，甲、乙液按9：1混合。2.5石英砂或用干净的玻璃片研制成的细砂。3操作方法
UDC (633.1+633.85)
.001.4
GB5522—85
3.1过氧化氢酶的提取：称取试样（能换算成无水试样1g），放入研钵中，加少量细砂，量取缓冲液50ml，先倒出5～10m1于研钵中研磨试样，然后经漏斗倒入锥形瓶中，用剩余的缓冲液洗净研钵和漏斗，再把洗液倒入锥形瓶内，振摇后静置2～3h，用吸滤法或离心沉淀法获得透明的提取液。3.2酶活动度的测定：摇勾提取液，吸取20m1注入锥形瓶中，加入20ml水和3m13%过氧化氢溶液，在室温下放置15～30min，加入5m110%硫酸溶液，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记下用去的高酸钾溶液毫升数（V，）。3.3对照试验：吸取20ml提取液注入锥形瓶中，置于沸水浴中加热5min，或用直接煮沸法破坏过氧化氢酶。加20ml水和3m13%过氧化氢溶液于锥形瓶中，在室温下放置15～30min，再加入10%硫酸5ml，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定，记下用去的毫升数（V，）。国家标准局1985-11-02发布
1986-07-01实施
4结果计算
过氧化氢酶活动度按下列公式计算：GB 5522-85bzxZ.net
过氧化氢酶活动度（mgH,O./1g试样）=（V2-V,）×N×17×20
式中：V1-酶活动度测定时所用的0.1N高锰酸钾溶液体积，ml，V2对照试验时用去的0.1N高锰酸钾溶液体积，ml,N-——高锰酸钾溶液当量浓度；17——H02的毫克当量。
双试验结果允许差不超过平均值的10%，取平均值为测定结果。测定结果取小数点后第一位。附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由商业部粮食储运局负责起草。本标准主要起草人高修吾、杨浩然、吴艳霞、吕桂芬。290
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