【农业标准】 黄曲霉毒素单克隆抗体活性鉴定技术规程

中华人民共和国农业行业标准

NY/T 2309—2013

黄曲霉毒素单克隆抗体活性
鉴定技术规程

Technical rules for activity identification of monoclonal antibodies against aflatoxins

2013-05-20 发布 2013-08-01 实施

中华人民共和国农业部 发 布

前 言

本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。

本标准由农业部种植业管理司提出并归口。

本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。

本标准主要起草人：李培武、李冉、丁小霞、周海燕、张奇。

黄曲霉毒素单克隆抗体活性鉴定技术规程

1 范围

本标准规定了黄曲霉毒素单克隆抗体的活性鉴定方法。

本标准适用于黄曲霉毒素单克隆抗体的活性鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3 试剂

除非另有说明，均使用分析纯试剂和 GB/T 6682规定的一级水。

3.1    碳酸钠($Na_2CO_3$):分析纯。

3.2    碳酸氢钠($NaHCO_3$):分析纯。

3.3    十二水合磷酸氢二钠($Na_2HPO_4 \cdot 12H_2O$):分析纯。

3.4    磷酸二氢钾($KH_2PO_4$):分析纯。

3.5    氯化钠(NaCl):分析纯。

3.6    氯化钾(KCl):分析纯。

3.7    柠檬酸($C_6H_8O_6 \cdot H_2O$):分析纯。

3.8    过氧化氢尿素[$CO(NH_2)_2 \cdot H_2O_2$]:分析纯。

3.9    黄曲霉毒素完全抗原:纯度$\geqslant 98\%$。

3.10   卵清白蛋白(Ovalbumin, OVA)。

3.11   $3,3',5,5'$-四甲基联苯胺($3,3',5,5'$-Tetramethylbenzidine, TMB)。

3.12   甲醇($CH_3OH$):分析纯。

3.13   无水乙醇($CH_3CH_2OH$):分析纯。

3.14   吐温-20(Tween-20)。

3.15   羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶标二抗。

3.16   黄曲霉毒素标准品(黄曲霉毒素$B_1$、黄曲霉毒素$B_2$、黄曲霉毒素$G_1$、黄曲霉毒素$G_2$、黄曲霉毒素$M_1$,即 $AFB_1$、$AFB_2$、$AFG_1$、$AFG_2$、$AFM_1$):纯度$\geqslant 99\%$。

3.17   黄曲霉毒素标准储备液:准确称取黄曲霉毒素$B_1$、黄曲霉毒素$B_2$、黄曲霉毒素$G_1$、黄曲霉毒素$G_2$和黄曲霉毒素$M_1$标准样品，用甲醇(3.12)配制成 0.100 mg/mL的储备液。

3.18   黄曲霉毒素标准工作液:准确移取黄曲霉毒素$B_1$、黄曲霉毒素$B_2$、黄曲霉毒素$G_1$、黄曲霉毒素$G_2$和黄曲霉毒素$M_1$标准储备液，用甲醇稀释成工作液(浓度均为:0.01 ng/mL、0.1 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL和 100 ng/mL)。

3.19   磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液):称取 $2.9 g \ Na_2HPO_4 \cdot 12H_2O$、$0.2 g \ KH_2PO_4$、$8.0 g \ NaCl$ 和 $0.2 g \ KCl$溶于纯水并定容至1 L超纯水中，调 pH至7.4。

3.20   磷酸盐吐温缓冲液(PBST缓冲液):称取 $2.9 g \ Na_2HPO_4 \cdot 12H_2O$、$0.2 g \ KH_2PO_4$、$8.0 g \ NaCl$