【商检行业标准(SN)】 非洲马瘟琼脂免疫扩散试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1692.1—2006

非洲马瘟琼脂免疫扩散试验操作规程

Protocol of agar-gel immunodiffusion test for African horse sickness

2006-01-26 发布 2006-08-16 实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
发 布

前 言

本部分参照世界动物卫生组织（OIE）的《陆生动物疾病诊断和疫苗手册》制定。

SN/T 1692分为三部分：

• ——非洲马瘟原脂免疫扩散试验操作规程；
• ——非洲马瘟血球凝集和血球凝集抑制试验操作规程；
• ——非洲马瘟补体结合试验操作规程。

本部分为SN/T 1692的第1部分。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：杨晶焰、徐自忠、陈建军、戈忠保。

本部分是首次发布的出入境检验检疫行业标准。

非洲马瘟琼脂免疫扩散试验操作规程

1 范围

SN/T 1692的本部分规定了非洲马瘟琼脂免疫扩散试验的操作规程。

本部分适用于非洲马瘟抗体的检测。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过SN/T 1692的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 试剂和材料

3.1 抗原：非洲马瘟组织培养抗原。

3.2 非洲马瘟阳性血清。

3.3 平皿。

3.4 微量移液器。

3.5 微量滴头。

3.6 三角烧瓶。

3.7 琼脂糖。

3.8 氯化钠：分析纯。

3.9 叠氮钠：分析纯。

3.10 水：符合GB/T 6682分析实验室二级水规格。

4 操作步骤

4.1 琼脂凝胶平板的制备

称取琼脂糖1.2 g，氯化钠1.0 g，加入100 mL水，经68.94 kPa、10 min高压或煮沸溶解后，冷却至45℃，加入0.01 g叠氮钠。每个平皿加融化琼脂，使琼脂板厚度为2.5 mm~2.8 mm，待凝固后倒置，放4℃冰箱15 min。

4.2 打孔

中间1孔，周围6孔为一组。孔径4 mm，孔间距2.4 mm。用针挑出或吸出孔内琼脂。

4.3 加样

中心孔加抗原；1、3、5孔加标准阳性血清；2、4、6孔加被检血清。加样量以孔平为准，加样后置湿盒内于室温（22℃~25℃）反应，每次试验设阳性对照。

5 判定

24 h初判，72 h终判。当阳性对照成立时，进行判定。

阳性：被检血清孔与抗原孔之间出现致密的沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端呈平滑相连者。