【YY医药标准】 口腔医疗器械生物学评价 第2单元:试验方法哺乳动物细胞体外染色体畸变试验

YY/T 0127.16-2009.Biological evaluation of medical devices used in dentistry Part 2 :Test method In Vitro mammalian chromosome aberration test.
6.1 细胞系
YY/T 0127.16推荐使用V79细胞(中国仓鼠肺细胞).CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)和CHL细胞(中国仓鼠肺细胞)。这三种细胞均为已建株的细胞,具有能在体外条件下生长形成单层.核型稳定、染色体数目少(V79细胞2n=22土1;CHO细胞2n- 22; CHL细胞2n= 25士1)、细胞倍增时间短等特点。也可采用原代细胞或其他已建株的细胞。
6.2体外代谢活化系统
体外染色体畸变试验应在有和无代谢活化系统的条件下,使细胞与试验物质接触。本标准使用的代谢活化系统为s9辅助因子(S9辅助因子的制备见YY/T 0127. 10 Ames试验)。
6.3染毒剂量(细胞与被检物接触)
在细胞与被检物接触时,应考虑被检物对细胞毒性的大小。至少应设3个剂量组,当出现细胞毒性时,所采用的剂量组应包括细胞毒性从大到小或无细胞毒性3个剂量组。组距可选择之间的一个值,按等比级数分为3个组。但在收获细胞时,最高剂量组应有细胞融合程度的降低,或细胞数和有丝分裂指数的明星降低。低剂量组应无细胞毒性或略有细胞毒性。对于无细胞毒性的被检物，建议按浸提原液的100%、50% .25%的浓度分别设置三个剂量组.
6.4对照
6.4.1阴性对 照:阴性对照可采用被检器械的溶剂或介质。
6.4.2阳性对照:阳性对照物的浓度应进行选择。对于无外源性代谢活化系统的试验,阳性对照物可采用丝裂霉素(Mitomycin C) 14-硝基奎宁氮氧化物(4-NitroquinolineN Oxide) ;甲基磺酸甲脂(Methyl methanesulphonate) ;甲基磺酸乙酯( Ethyl methanesulphonate) ;乙基亚硝基尿( Ethylnitrosourea等。
对有外源性代谢活化系统的试验,阳性对照可用苯并(a)茁(Benzo(a) prene) ;环磷酰胺(Cyclophospha-mide)等。
6.4.3阴性和阳性对照都应在有或无代谢活化系统的条件下进行。
6.4.4必要时还应设置未处理的阴性对照。
6.5 试验步骤
6.5.1细胞培养
取冻存的细胞,接种于含有10%血清、双抗的RPMI1640或DMEM生长培养液内或其他适宜的培养液内,使细胞贴壁生长。在37C 5% CO,饱和湿度培养箱内培养至对数生长末期，细胞趋近融合时,去培养液。加0.25%胰蛋白酶处理，去映蛋白酶液,用D'-Hanks液洗滌细胞,加新鲜培养液,用滴管轻轻吹打,使成细胞悬液,传代使其贴壁生长。