【YY医药标准】 血小板贮存袋性能 第2部分:血小板贮存性能评价指南

ICS_11.040.20
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1286.2—2016
而血小板贮存袋性能
第2部分：血小板贮存性能评价指南Performance for platelets storage bag-Part 2: Test guide on evaluation for platelet storability2016-01-26发布
国家食品药品监督管理总局
2017-01-01实施
YY/T1286《血小板贮存袋性能》分为两个部分：第1部分：膜材透气性能测定
压差法#
第2部分：血小板贮存性能评价指南。本部分为YY/T1286的第2部分。
本部分按照GB/T1.12009给出的规则起草。YY/T1286.2—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出。本部分由全国医用输液器具标准化技术委员会（SAC/TC106)归口。本部分起草单位：中国医学科学院输血研究所、南京双威生物科技有限公司、山东省医疗器械产品质量检验中心，上海输血技术有限公司。本部分主要起草人：刘嘉馨、王红、胡政芳、乔春、孙晓霞、姜跃琴。I
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血小板贮存袋的性能直接影响血小板的贮存质量和贮存期限。影响血小板贮存性能的因素有很多，除了忙存温度，振荡条件和血小板贮存袋的材料，规格以外，血小板贮存性能还受血小板数量，体积，变形力等因素的影响。
目前，国内外还没有统一认可的用于评价血小板袋贮存性能的试验方法。本部分通过血小板贮存袋中保存血小板的功能性试验评价血小板贮存袋的性能，包括血小板的低渗休克反应、PH、目测涡流（swirling）和聚集反应。同时应注意，用于血小板功能评价的试验还有很多，本部分中只给出了GB14232.3中推荐的功能评价试验方法指南。血小板贮存评价试验还有葡萄糖浓度、乳酸浓度和P选择素（CD62p）表达检测等。
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1范围
血小板贮存袋性能
第2部分：血小板存性能评价指南YY/T1286.2-2016
本部分给出了血小板袋贮存性能评价试验方法指南，包括血小板低渗休克试验、PH试验、涡流目测试验和聚集试验。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB14232.3人体血液和血液成分袋式塑料容器第3部分：含特殊组件的血袋系统GB18469全血及成分血质量要求
3术语和定义
GB14232.3和GB18469界定的术语和定义适用于本文件。4样品制备与贮存
4.1样品制备
采用特定规格供使用状态的血小板贮存袋，按照血小板袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜制备的血小板。
4.2贮存条件
试验过程中，血小板在20℃～24℃，振荡频率60次/min，振幅5cm的条件下贮存。5贮存期内血小板评价试验项目和时间按照表1选择试验项目和时间。
表1血小板评价试验项目和时间
贮存时间
采血后1d
采血后3d
采血后5d
血小板低渗休克试验
（第6章）
涡流试验
(第7章）
pH试验
第8章）
血小板聚集试验
（第9章）
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贮存时间
采血后7d
血小板低渗休克试验
（第6章）
表1(续）
涡流试验
(第7章）
PH试验
(第8章）
，涡流试验观察到没有涡流现象为止。涡流现象消失的当天需进行pH试验。N.A：不适用。
6血小板低渗休克试验此内容来自标准下载网
6.1试验原理
血小板聚集试验
（第9章）
血小板的低渗休克（HSR）表示血小板在低渗环境中体积膨胀后恢复其正常体积的能力。在富血小板血浆（PRP)中加人低渗的磷酸盐缓冲液或蒸馏水，使血小板体积膨胀，经历一段时间后血小板细胞适应低渗环境而体积恢复。采用分光光度计（波长610nm处）检测血小板体积膨胀时导致的透射光增加，以及血小板体积恢复阶段透射光的减少来评价血小板体外功能。本试验通过检测血小板不同贮存时间的低渗休克，用以评价待检血小板贮存袋对血小板抗低渗休克能力的影响程度。6.2试验仪器和试剂
6.2.1试验仪器
分光光度计、血细胞计数仪、尖底试管离心机、可调微量移液器（250μL～1000μL）37C恒温水浴、塑料试管、塑料尖底试管。6.2.2试剂
蒸馏水、磷酸盐缓冲液（PBS）：pH=7.2~7.4。6.3样品准备
6.3.1贫血小板血浆
血小板贮存袋保存1d～7d血小板悬液（按照血小板贮存袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜制备的血小板），分别于保存的第1d.3d,5d、7d取样。取血小板悬液约10mL于塑料试管中，以1600g～1650g离心10min，取上清液得贫血小板血浆（PPP)。PPP中血小板浓度低于1×10l°/L。6.3.2富血小板血浆
血小板贮存袋保存1d～7d血小板悬液（按照血小板贮存袋的实际使用要求保存适宜剂量的新鲜采集的血小板），分别于保存的第1d、3d,5d、7d取样。用血细胞计数仪计数血小板浓度，取2mL用6.3.1制备的PPP调节血小板浓度至2×10/L～4X10/L，即得富血小板血浆(PRP)。6.4试验步骤
6.4.1分光光度计开机预热30min，波长调至610nm。1）也可使用其他适宜仪器，如血小板聚集仪、生化分析仪等。2
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6.4.2将PPP与PBS以2：1的比例混合，放人分光光度计测试槽，调零点。YY/T1286.2—2016
6.4.3将PRP与PBS以2：1的比例混合，放入分光光度计测试槽，记录15min内吸光度（OD值)的变化曲线，此曲线为基线。
6.4.4将PRP与纯化水以2：1的比例混合，放人分光光度计测试槽，记录15min内OD值的变化曲线，此曲线为测试样品曲线。
6.4.5读取样品曲线中15min时OD值（OD）、样品最小OD值（OD），以及基线15min时的OD值(OD)。
6.5结果计算
按式(1)计算血小板低渗休克：
式中：
一血小板低渗休克：
样品吸光度值；
：—一样品最小吸光度值；
对照吸光度值。
涡流目测法检测血小板形态
7.1试验原理
OD,-OD,
OD。-ODz
新鲜的血小板大部分是圆盘碟形，经过长时间保存后的血小板形状可变为圆形。在自然光照射下，媒形血小板会发生光衍射而产生“涡流”现象，而非碟形血小板则不会产生“涡流”现象。本试验通过观察血小板在不同贮存时间的“涡流”现象，用以评价待检血小板贮存装对血小板形态的影响程度。7.2试验步骤
7.2.1准备50W～100W的白色光源或其他适宜光源。7.2.2分别于保存的第1d、3d、5d7d，将盛有血小板的血小板贮存袋竖直放置，离光源大约20cm～50cm。
7.2.3轻轻晃动血小板贮存袋，使血小板在光源前运动。7.2.4记录观察到的涡流现象。
7.3试验结果
以“有”或“无”对涡流试验的结果进行判定，评价血小板贮存袋对血小板形态变化的影响。8pH试验
8.1试验原理
在血小板的保存过程中，血小板会发生代谢产生乳酸，导致血小板悬液pH发生变化。本试验通过检测血小板悬液不同保存时间的pH，用以评价待检血小板贮存袋对血小板性能的影响程度。8.2试验仪器和试剂
8.2.1试验仪器
本部分中推荐使用血气分析仪或pH计。3
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8.2.2试剂
血气分析仪配套的试剂（如使用）。8.3试验步骤
8.3.1血小板贮存袋保存1d～7d血小板悬液（按照血小板贮存袋的实际使用要求保存适宜数量的新鲜制备的血小板），分别于保存的第1d，3d、5d.7d取样，样品应隔绝空气保存。8.3.2按pH计或血气分析仪说明书规定的操作步骤检测试样的pH。8.4试验结果
记录不同贮存时间的血小板pH，评价血小板贮存袋对血小板酸碱度的影响。9血小板聚集试验
9.1试验原理
血小板聚集是血小板参与止血和血栓形成的重要环节，是血小板的主要功能。在PRP中加人致剂，血小板发生聚集，血浆浊度变化，透光度增加，将浊度变化转换为电信号并记录，形成血小板聚集曲线。根据血小板聚集曲线可得出血小板聚集的能力和速度。本试验检测血小板不同贮存时间的聚集能力，用以评价待检血小板贮存袋对血小板聚集功能的影响。9.2试验仪器和试剂
9.2.1试验仪器
光学法血小板聚集仪，血细胞计数仪、尖底试管离心机，可调微量移液器（10μL～50μL，250μL～1000μL）、硅化玻璃管、硅化磁子。9.2.2试剂
二磷酸腺苷（ADP）、花生四烯酸、肾上腺素或其他适宜的致聚集剂，如胶原、瑞氏托霉素、凝血酶等。
9.3样品准备
9.3.1贫血小板血浆
取保存的第1d.3d5d.7d的血小板悬液，按6.3.1制备PPP9.3.2富血小板血浆
取保存的第1d.3d、5d.7d的血小板悬液，按6.3.2制备PRP。9.4试验步骤
9.4.1血小板聚集仪开机预热30min。9.4.2取PPP和PRP各500μL加人硅化后的玻璃管并孵育5min，再放人仪器内对应的位置，关闭盖子，调零点。
9.4.3打开盖子，迅速将致聚剂加人PRP玻璃管中，关闭盖子，等待血小板聚集仪自动记录10min内血小板聚集曲线。
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注1：本部分中推荐至少采用（ADP十肾上腺素）、花生四烯酸两种致聚剂进行试验。注2：具体试验步骤根据仪器不同而有所差异。9.4.4通过仪器自带软件计算血小板聚集率。试验结果
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记录不同保存时间的血小板聚集率，评价血小板贮存袋对血小板集功能的影响。10
试验报告
按表1报告各试验点的结果。试验报告应至少包含以下信息：a)
试验样品的描述；
试验样品或器械的预期用途应用；制备试验样品所用方法的详细描述d)
结果记录；
结果评定，包括统计学方法。
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参考文献
[i] Bertolini F,Murphy S.A multicenter evaluation of reproducibility of swirling in platelet con-centrates.Biomedical Excellence for Safer Transfusion(BEST) Working Party of the International Soci-ety of Blood Transfusion.Transfusion 1994;34:796-801.[2] Holme S,Sawyer S,Heaton A,Sweeney JD.Studies on platelets exposed to or stored at tem-peratures below 20 degrees C or above 24 degrees C.Transfusion 1997,37.5-11.[3]Kulkarni S,Dopheide SM,Yap CL,et al.A revised model of platelet aggregation.J ClinInvest2000;105:783-91.
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血小板贮存袋性能
第2部分：血小板贮存性能评价指南YY/T1286.2—2016
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