【YY医药标准】 酶联免疫分析仪

ICS11.100
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1529—2017
酶联免疫分析仪
ELISA analytical instruments2017-05-02发布
国家食品药品监督管理总局
2018-04-01实施
中华人民共和国医药
行业标准
酶联免疫分析仪
YY/T1529—2017
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
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5字数18千字
2017年10月第一版2017年10月第一次印刷书号：155066·2-31926定价
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。YY/T1529—2017
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本标准由国家食品药品监督管理总局提出。本标准由全国医用临床检验实验室和体外诊断系统标准化技术委员会（SAC/TC136）归口。本标准起草单位：北京市医疗器械检验所、上海科华实验系统有限公司、江苏英诺华医疗技术有限公司、深圳市爱康生物科技有限公司、烟台澳斯邦生物工程有限公司。本标准主要起草人：王瑞霞、李冬、周强、张传国、刘艳春、庄传领。Hii KAoNhi KAca
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1范围
酶联免疫分析仪
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本标准界定了酶联免疫分析仪（以下简称分析仪）的术语和定义，规定了分类、要求，试验方法、标志、标签及使用说明书和包装、贮存及运输。本标准适用于酶联免疫分析仪、全自动酶联免疫分析仪的读数模块。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志
GB4793.1测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求GB/T14710医用电器环境要求及试验方法GB/T18268.1测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第1部分：通用要求GB/T18268.26测量、控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第26部分：特殊要求体外诊断(IVD)医疗设备
GB/T29791.3体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）第3部分：专业用体外诊断仪器JJG861—2007酶标分析仪
YY0648测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第2-101部分：体外诊断（IVD)医用设备的专用要求
3术语和定义
下列术语和定义适用本文件。
酶联免疫吸附试验enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISAELISA方法是在免疫酶技术（immunoenzymatictechniques）的基础上发展起来的一种免疫测定技术。ELISA过程包括抗原或抗体吸附在固相载体上（称为包被），受检样本（含待测抗体或抗原）和酶标记抗体或抗原，按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原和抗体的复合物，固相载体上被结合的酶标记物的量即与标本中待测物的量成一定比例。加人反应底物后，底物被酶催化生成有色产物。通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
酶联免疫分析仪eLISAanalyticalinstruments利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和朗佰-比尔（Lambert-Beer）定律，对待测物质进行定量或定性分析的仪器称为酶联免疫分析仪，亦称酶标仪。1
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4分类
仪器组成及原理
仪器主要由电源、光源系统、单色器系统、样品室、检测器、微机和操作软件等组成。光源灯发出的光经平行处理后，透过滤光片/光栅射人样品室，经过待测液后，透射光信号被检测器检测、放大及模拟/数字转换后由微机进行计算、处理，并由显示器、打印机显示并打印出最终测定结果。4.2仪器类型
常用酶联免疫分析仪可以分为以下三种类型：a）单波长，单通道；
b）单波长/双波长、多通道；
波长连续可调式，单通道/多通道。c
5.1外观
应符合如下要求：
a）文字和标志应清晰可见，标志粘贴牢固，不得松脱或卷边：b）表面应平整、光洁、色泽均勾、无磕碰、划伤及凹凸不平等缺陷；c）紧固件连接应牢固可靠，不得有松动；d）运动部件应平稳，不应卡住、突跳及显著空回，键组回跳应灵活。5.2
性能要求
波长准确度
仪器用滤光片波长准确度应不超过士2nm。5.2.2
吸光度准确度
在相应波长下仪器的准确度应符合表1的要求。表1吸光度准确度要求
吸光度范围
[0.000~1.000]
(1.000~2.000]
5.2.3线性
在吸光度值范围为0～3.000，线性相关系数不低于0.990。5.2.4吸光度重复性
仪器重复性测量的变异系数CV应不大于1.0%，2
准确度
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5.2.5吸光度稳定性
仪器吸光度的稳定性应不超过士0.005。5.2.6灵敏度
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使用浓度为5mg/L的酶联免疫分析仪用灵敏度溶液标准物质，仪器测量吸光度值应不小于0.01。5.2.7通道差异
以空气为参比，测量8个通道的吸光度差异，要求结果应不大于0.02。5.3电气安全要求
应符合GB4793.1.YY0648中适用条款的要求。5.4环境试验要求
应符合GB/T14710中适用条款的要求。5.5电磁兼客性要求
应符合GB/T18268.1，GB/T18268.26中适用条款的要求。5.6软件功能
酶联免疫分析仪应至少具有下列功能：a）具有数据显示功能；
b）可灵活设置测试项目、测试方法和测试日期；c)
可连续保存依次测试的项目及结果；d）可显示并打印测试项目、测试数据和测试时间。6实验方法
6.1工作条件
6.1.1电源要求：电压220V士22V（交流）；频率50Hz士1Hz。6.1.2环境温度：+10℃~十40℃。6.1.3相对湿度：30%~80%。
6.1.4下列项目均在仪器开机稳定30min后进行，仪器在进行下列实验时，影响量应在正常工作条件下。
6.1.5光谱中性滤光片有证标准物质或经计量检定合格的光谱中性滤光片：吸光度值分别约为0.2、0.5、1.0、1.5、2.0.3.0（不确定度不大于0.005）。6.1.6酶联免疫分析仪用灵敏度溶液标准物质。注：6.1.2、6.1.3中的条件与制造商标称的产品规格不一致时，以产品规格为准。制造商应在产品标准中进行说明。6.2外观
在自然光下以正常视力或矫正视力目视检查，应符合5.1的要求。3
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6.3波长准确度
波长准确度测试方法如下：
波长连续可调式酶联免疫分析仪，测试方法见JJG0861一2007的5.2.1，或者由生产厂家提供a
科学、合理的试验方法。
用波长示值误差优于士0.5nm的分光光度计对仪器所用滤光片逐片进行波长-透射比光谱特b)
性曲线描述（图1)，并按式(1)、式(2)分别计算中心波长误差，应符合5.2.1的要求。t/% 4
式中：
式中：
中心波长实测值：
图1波长-透射比光谱特性曲线
入+入2
透射比为0.5m时对应的波长。
一中心波长误差；
中心波长实测值；bzxZ.net
一滤光片的标准波长。
6.4吸光度准确度试验
（2）
依次选用405nm、450nm、492nm和630nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值分别约为0.2.0.5.1.0.1.5的四块光谱中性滤光片，或仪器特有的专一波长滤光片，平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，连续测量3次，记录仪器示值。吸光度准确度4A按式（3)计算：AA
（3）
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式中：
AA一该中性滤光片吸光度准确度；A，一片中性滤光片在一个波长下第i次测量的吸光度值；As—该中性滤光片在该波长下的标准值。各中性滤光片在各波长下的吸光度准确度，均应符合5.2.2的要求。6.5线性
可选择下列方法之一，进行验证：YY/T1529—2017
a）选择光谱中性滤光片有证标准物质或经计量检定合格的光谱中性滤光片，示值分别约为0.2、0.5、1.0、1.5、2.0.3.0(不确定度不大于0.005），每张滤光片测定2次，实测均值与标定值进行线性拟合，计算线性相关系数，结果应符合5.2.3的要求。b）使用选择光谱中性滤光片有证标准物质或经计量检定合格的光谱中性滤光片，示值分别约为0.2、0.5.1.0.1.5、2.0滤光片，单独使用或叠加使用，分别采用（0.2十0.5）、（0.5+1.5）、（1.0+2.0）叠加法，实测值与理论值进行线性拟合，计算线性相关系数，结果应符合5.2.3的要求。注：不建议对2个以上滤光片进行叠加。6.6吸光度重复性试验
选择450nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值约为0.5或1.0的光谱中性滤光片平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，于固定的某一孔位重复测量至少6次，记录仪器示值，再按式(4)计算吸光度的重复性CV值，应符合5.2.4的要求。CV==×100%
式中：
CV—变异系数；
其中，
标准差，S=
第次实测吸光度值；
—测量的次数；
工—n次测量的算术平均值。
6.7吸光度稳定性试验
.........(4)
选用450nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值1.0的光谱中性滤光片，平放在微孔酶标板的空板架上，以空气为参比，测量并记录仪器的初始示值，5min后记录仪器示值一次，10min后再次记录仪器示值，按式（5)计算两次吸光度示值与初始值的最大偏倚值（r），结果应符合5.2.5的要求。r=|A量大—A初始|
式中：
A最大—仪器最大吸光值；
A初始——仪器初始吸光值。
6.8灵敏度试验
··.（5)
选用450nm或仪器特有的专一波长，使用量程适合并经检定合格的加样器，在未包被抗原或抗体5
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的微孔酶标板的某一孔中加人350μL浓度为5mg/L的酶联免疫分析仪用灵敏度溶液标准物质（配制方法参见附录A），测量吸光度值符合5.2.6的要求。6.9通道差异试验
选用450nm波长或仪器特有的专一波长，将吸光度标称值为1.0的光谱中性滤光片平放在微孔酶标板的空板架上，先后置于8个通道的相应位置（例如：对于8通道仪器可从A，～H，或A2～H，作为起始位置），以空气为参比，每一通道至少重复测量5次（中性滤光片的相同位置），记录5个吸光度值，8个通道的差异结果报告用全部测量数据（共48个结果）的极差值表示，按式（6）计算通道差异A，应符合5.2.7的要求。
DA=Am-Amin
式中：
SA——通道差异；
Amx——8个通道中吸光度测量结果的最大值：Ami——8个通道中吸光度测量结果的最小值。6.10安全性能试验
按照GB4793.1、YY0648中规定的方法进行试验，应符合5.3的要求。6.11环境试验
按照GB/T14710中试验条件进行，结果应符合5.4的要求。6.12电磁兼容性试验
按照GB/T18268.1、GB/T18268.26中规定的方法进行试验，应符合5.5的要求。6.13软件功能试验
通过软件操作予以验证，结果应符合5.6的要求。7标志、标签及使用说明书
应符合GB/T29791.3的相关规定。包装，贮存及运输
8.1包装
外包所使用的图示标志应符合GB/T191的规定。8.1.2包装应能保证产品免受自然和机械性损坏。8.1.3包装箱内应附有使用说明书。8.2购存
按照制造商规定的要求进行贮存。8.3运输
按照制造商规定的要求进行运输。6
（6）
附录A
（资料性附录）
酶联免疫分析仪灵敏度溶液标准物质制备方法YY/T1529—2017
酶联免疫分析仪灵敏度溶液标准物质采用重铬酸钾纯物质，以0.05mol/L硫酸为基体配制成浓度为5mg/L的溶液标准物质。
A.10.05mol/L硫酸溶液的配制
在500mL烧杯中加人400mL蒸馅水，用移液管吸取2.7mL浓硫酸加人烧杯中，搅拌均勾后放人1000mL容量瓶中，用蒸馅水稀释至刻度线，摇匀备用。A.2含铬量5mg/L重铬酸钾溶液标准物质的配制A.2.1步骤一
在分析天平上准确称取0.2829g重铬酸钾置于100mL烧杯中，用0.05mol/L硫酸溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，用少量0.05mol/L硫酸溶液洗烧杯若干次，洗液放人容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度线，摇匀备用，此溶液浓度为200mg/L。A.2.2步骤二
用移液管吸取浓度为200mg/L的重铬酸钾溶液2.5mL放入100mL容量瓶中，用0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度线，摇匀，此溶液浓度为5mg/L。YY/T1529—2017
参考文献
［1]GB/T9969-2008
8工业产品使用说明书总则
[2]］GB/T29791.1—2013体外诊断医疗器械制造商提供的信息（标示）
）第1部分：术语、定
义和通用要求（ISO18113-1:2009，IDT）［3]YY/T0316-2008
医疗器械
风险管理对医疗器械的应用
［4]YY0466.1一2016医疗器械用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号号第1部分：通
用要求
书号：155066·2-31926
YY/T1529-2017
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