【SN商检标准】 HIV抗体质控血清的制备和使用规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3951—2014
HIV抗体质控而清的制备和使用规程Codes of making and using for quality control serum of HlV antibod2014-04-09发布
中华人民共和国bZxz.net
国家质量监督检验检疫总局
2014-11-01实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草本标准由国家认证认叫监督管理委员会提出并归口。SN/T 3951—2014
本标滩起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局，中华人民共和国北京出人境检验检疫局。
本标准主要起草人凸洁，戴俊.工树祥、丁国允、练素英，卢林.何振毅、朱红。T
1范围
HIV抗体质控血清的制备和使用规程本标准规定了HIV抗体质控血清的制备、使用和保存方法本标准适用于出人境检验检疫机构对HIV抗体质控血清的制备和使用。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。SN/T3951—2014
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求JJG1006一级标准物质
消毒技术规范（原中华人民共和国卫生部）全国艾滋病检测技术规范（中国疾病预防控制中心）3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
质控血清qualitycontrol seru
用于质量控制目的的标本。
均匀性homogeneity
与物质的一种或多种特性相关的具有相同结构或组成的状态。通过测量取自不同包装单元（如：瓶、包等)或取自同一包装单元的、特定大小的样品，测量结果落在规定不确定度范围内，则可认为标准物质对指定的特性量是均匀的。3.3
瓶间均匀性between-bottlehomogeneity标准物质的特性在瓶与瓶之间的变异。注：术语“瓶间均匀性”适用于其他类型的包装（例如小瓶）和其他物理形状及试片。3.4
稳定性stability
在特定的时间范围和贮存条件下，标准物质的特性量值保持在规定范围内的能力。3.5
开瓶稳定性bottle-unsealedstability包装单元（如：瓶、包等）开封后在特定贮存条件下标准物质特性的稳定性。3.6
长期稳定性long-termstability在标准物质生产者规定贮存条件下标准物质特性的稳定性。SN/T 3951—2014
S/CO值 S/CO value
ELISA试验测定得到的样本的 HIV抗体光密度值与试剂检测的临界俏(cut uff value)之比,足抗体反应强度的指标，在一定范用内S/CO值越大：说明反应强度越高。4要求
4.1原料选择
原料选择应符合下列要求；
应满足适用性，代表性以及容易复制的原则：原料的基体应和使用的要求相一致或尽可能接近，即收集的原料（血清)清衰，无肉眼可见的辫血,黄,乳糜题粒或其他杂质;；应是有高度稳定性及适合检测和试验要求的特异样，不应含有十扰使用目的的杂质：应有是够的数量，以满足在有效期间使用的需要。4.2质控血清的外观，装量和质
质控血清的外观、装量利质量要求如下：质控血清应清亮、均匀,无猝血，黄疽,乳糜颗粒和凝块：质控血清可根据实验空使用量配置，每瓶装量应不少丁每次试验的用量；质控血清的质量要求应符合“全国艾滋病检测技术规范》第二章中9,1,2,1的规案。5准备
5.1器材
移液器，移液吸头，移液管、带益玻瓶、.5mI.带盖样品管，除菌过滤器或针简式滤膜过滤器（滤膜材质为聚醚膜-PES、孔径为0.22 um）灭菌注射器、镊子、吸球5.2仪器
酶标仪、洗板机.离心机、37℃水浴箱、一20℃以下低温冰箱、高压蒸汽灭菌器。6制备程序
6.1原料的采集和处理
6.1.1原料采集
根据实验室使用量收集足量的原料，主要包括：止常人血清：从II常检测样品[1收集感染性疾病血清学标志物包括HIV-1/2抗体、HTV-1p24抗原,乙肝病毒表面抗原(HBsAg）、丙肝病毒（IICV)抗体和梅毒螺放体抗体均阴性的血清：-HIV阳性血清或制品：收集常检测样品中确证HIV抗体阳性、其他感染性疾病血清学标志物(IBAg,IICV抗休,梅毒螺旋体抗体)均阴性的血清（仅艾滋病检测确证实验空问收集）,或购买权威机构认证的阳性质控品。2
-TKAoNrKAca
6.1.2原料预处理
SN/T 3951—2014
将正常人血清和HIV阳性血清或制品分别进行56、30min灭活，0001/min离心15min.加人终浓度为0.01%的硫柳末作防腐剂。6.2制备方法
6.2.1灭菌
将试验用的移液吸头、移液管、带盖玻璃瓶、样品管、过滤器等逃行121℃，15min~20min灭菌待「燥后备用。
6.2.2稀释
对HIV阳性血清或制品进行EIISA法检测，根据其光密度值以正常人血清进行系列的借比稀释并检测结果，根据实验室内部质量控制要求确定质控血清最终稀释度。以正常人血清为稀释液.将HIV阳性血清或制品按最终稀释度进行稀释。可以配制成强阳性或弱阳性质控血清，弱阳性质控通滑选择所用试剂盒临界值(cut off value)的 2倍~-3倍，6.2.3除黄
用除菌过滤器或针筒式滤膜过滤器将稀释后的血清进行抽滤除菌·盛于玻璃瓶内。6.2.4分装
按实验室1周用量等量分装到1.5ml.样品管中，冻存丁一20℃以下低温冰箱备用。6.2.5检验
质控血清分装后成进行均匀性检验（见附录A）；在规定的贮存条件下，可根据需要设定时间间隔进行稳定性检验（参见附录3)。
生物安全及防护措施
制备质控血清的实验室生物安全及防护措施按“全国艾滋病检测技术规范》中第八章的规定。质控血清的使用
8.1使用方法
使用方法如下：
从冰箱联出质控血清片待完全融化且平衡至温：轻轻颠倒使其充分混勾；
一加样时按待测样木对待，依试剂盒说明书进行操作：质控血清的应用按全国斐滋病捡测技术规范》第一章中9.1的规定；使用完毕，及时盖上瓶盖，放置2 ℃～8℃贮存，1周后应弃去，避免反复冻型！，8.2注意事项
注意事项包括：
-rrKAoNirkAca
SN/r3951—2014
一本标准中质控血清仅用于实验室内部体外诊断试剂检测时的质量控制，不得用作校准品；每一次试验应使用质控血清：
质控血清都经过灭活处理，但仍应按有潜在生物传染性样本对待；使用后应按GB19489和《消毒技术规范》相关规定对废弃物逊行处理。9质控脏清的保存
质控血清末开封在一20“以下密闭贮存稳定1年。9.2质控血清开瓶后在2℃~8℃贮存稳定1周。-TTKAONKAca
A.1方法
附录A
（规范性附录）
质控血清均匀性检验
A.1.1确定抽取样品量，按JJG1006中4.1和4.2的规定2确定取样方式，按JJG10065.1和52的规定A.1.2
SN/T3951—2014
A.1.3按抽取数量抽取当天分装
好的质控血清按随机次序进行ELISA检测，每瓶检测1次，按式（A.1）、式（A.2）计算测定的S/CO值的平均值（X）、标准差（S，）：另用用上述血清中的1瓶在重复性条
件下连续检测相同次数，按式（A.1）式（A.2)计算测定的S/CO值的平均值（X，）、标准差（S2）。A.1.4按式(A.3)、式(A.4)计算瓶间均匀性CV应满足CV<20%的要求。A.2统计指标计算
统计指标计算见式（A1)～式（A.4）中
S瓶间
式中：
平均值；
测量次数；
指定参数第1次测量值；
标准差；
变异系数，%。
X100%
(A.1)
..(A.2)
CA.3)
（A.4）
KAoNKAca
SN/T 3951—2014
B.1方法
附录B
（资料性附录）
质控血清稳定性检验
B.1.1稳定性检验应准相同的条件下进行（统一~的检测方法、检测环境、检测人员、仪器），承严格遵照质控血消的使用和保存方法。
B.1,2确定抛取样品量，按3J61006中4.1和2.2的规定。B.1.3确定取样方式.按JJG1006中5.1和5.2的规定。B.1.4按抽取数景抽取当天分装好的质控血清，进行EI.1SA检测，计算测定的反应OT）值（样本（D)值一阴性())值)的均值(X)作为稳定性检验中质控血清的参考值。R.1.5稳定性检验应包括开瓶(1周)稳定性和长期(1年)稳定性检验：开瓶稳定性：按抽报数量从一70“C冰箱中抽取制备保存的质控而清，在1周开瓶有效期内驾天进行FI.ISA检测自至到期斥1天（万瓶后放置2℃~8C忙存），计算每天测定的反应（F值的平均(X)和标准差(S)。
长期稳定性:采用個计时方式,将检测[期定为第』天,假如预定在某一温度下保存时间为 N人，则在（天前的第N天从--70℃箱中按抽取数量抽收制备保存的质挖血清，置十特定温度下保存，O天统进行FI.ISA检测·测定反应（>D值，计算每个保存时反应O）值的均值（X)和标准差（S）：其体设定条作：保存温度为一20 ℃,保存时问分别为3.6、9、12、18个月，
B.1.6采用：检验泌分析各时间点样木平均值与参考值之间是否存在显荠性差另作为质控血清稳定的依书。
B.2统计指标计算
平均值（X）计算见（A,1）、标准差（S)计算见式（A,2)、t检验法按CNAS-1.03中5.2的规定，TiKAoNiKAca
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WS/T 124—1999
寮考文献
临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则CNASGL031
能力验证样品均勾性和稳定性评价指南CNAS-GL29
SN/3951-2014
标准物质/标准样品定值的一般原则利统计方法（IS()GUIDE35：2006）
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