【SN商检标准】 甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4181-2015 甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Ramularia beticola 2015-02-09发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2015-09-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨立群、张洪祥、刘忠梅、程阳、严进、刘洪义、孟玉芹、文革。 1 范围 甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法 本标准规定了甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定方法。本标准适用于甜菜种子、植株中甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定。 2 基本信息 中文名称：甜菜叶斑病菌 拉丁学名：Ramularia beticola 分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），座囊菌纲（Dothideomycetes），煤目（Capnodiales），球腔菌科（Mycosphaerellaceae），柱隔孢属（Ramularia） 传播途径：该病菌依靠风雨等近距离传播，以病株的组织尤其是叶片、种子远距离传播。该病菌的其他信息参见附录A。 3 方法原理 甜菜叶斑病菌具有分生孢子梗和分生孢子，其在寄主上危害的症状及形态特征是鉴定该病菌的主要依据。 4 仪器设备 4.1 仪器 实体显微镜、生物显微镜、超净工作台、离心机等。 4.2 实验用具 电子天平（1/1000）、冰箱、三角瓶（250mL、500mL）、培养皿（9cm）、烧杯、剪刀、解剖针、解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、白瓷盘等。 5 现场检查 检查种子中是否有可疑病粒（没有种衣剂的情况下）以及植物的病残体，并把可疑样品送到实验室做进一步鉴定。 6 实验室检验 6.1 非种衣剂种子检验 6.1.1 洗涤检验 取50g种子样品放入灭菌的三角瓶中，加入300mL无菌水，在振荡器中震荡5min～10min，然后将震荡液在1500r/min下离心5min，倒掉上清液留下1mL左右沉淀液，在显微镜下观察。 6.1.2 保湿培养 将种子样品倒入灭菌培养皿中，检查病残体和可疑的病粒、孢粒，然后用灭菌的镊子在无菌的情况下将其放入已灭菌的、具三层滤纸的培养皿中（直径9cm），加3mL的无菌水，每皿约35粒，放入10个培养皿。将培养皿封闭在透明塑料袋中或用透明胶条封口，在16℃～20℃条件下光暗交替培养5d后用实体显微镜开始观察，也可肉眼观察是否有真菌长出。将可疑病粒轻轻移放在另一个灭菌的培养皿中继续培养，3d后在显微镜下观察。 6.2 种衣剂种子检验 将带有种衣剂的种子直接放入灭菌的培养皿中，进行保湿培养（方法同6.1.2）。 6.3 植株检验 6.3.1 显微镜检查 采集的病叶，如果病部有霉层，可直接用灭菌解剖针挑取霉层，或者用透明胶带直接粘取霉层后镜检，观察病菌形态特征。 6.3.2 保湿培养 将病叶用无菌水冲洗3次后，在无菌条件下用灭菌解剖刀在病斑的病健交界处切取4cm左右放入灭菌培养皿中，培养方法同6.1.2。长出菌后，用显微镜检查。 7 隔离种植检验 种子经过实验室检疫后，必须进行田间隔离种植检疫，这是不可缺少的重要检疫手段。甜菜叶斑病一般可选择6月份和7月份调查。甜菜褐斑病（Cercospora beticola）与甜菜叶斑病（Ramularia beticola）是甜菜叶片上最重要的两种病害，危害症状有些相近，但病原菌有明显的区别。可参见附录A和附录B。根据所描述的症状，采集可疑病叶，带回实验室，检验方法同6.3。 8 病原菌形态鉴定特征 菌丝无色有隔，分枝；分生孢子梗无色，常成簇从寄主气孔穿出；分生孢子梗短小不分枝，产孢梗顶端曲膝状；分生孢子卵形、长椭圆形至圆柱状，单胞或双胞；单细胞孢子（8μm～12μm）×（3μm～4μm），双细胞孢子（15μm~25μm）×（2μm~4μm）。参见图A.2。 9 结果评定 9.1 种子检验 如果在种子及其病残体中检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相一致的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。 9.2 植株检验 如果在病叶中观察到附录A中相类似的症状，且检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相一致的病原菌，则判定为甜菜叶斑病菌。 10 结果记录 记录样品信息及各项检测数据，包括样品来源、采集时间、地点、方法、结果等信息，并保存病原菌显微摄影、叶片症状等相关照片。 11 样品保存 检出甜菜叶斑病菌的样品应保持在冷藏箱中；分离...