【行业标准】 微生物肥料产品检验规程

ICS 65.080
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2321--2013
微生物肥料产品检验规程
Code of practice for inspection of microbial fertilizers2013-05-20发布
2013-08-01实施
中华人民共和国农业部
本标准按照GB/T1.12009给阳的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并用口本标准起草单位：农业部微生物肥料和金用源与农业区划研究所。
LSTANDARD
本标准主要起草人：姜菲
瑞华、于古华
NY/T2321-2013
是监督检验测试中心、中国农业科学院农业资SBLISHINGA
明、美大伟杨小红、葛凡、冯
GRESEARON ENTER
微生物肥料产品检验规程
本标泄规是了微生翻肥料样品墨求、试群冬科粉测方决卡标近用于微生物肥料品的质量检捡。2规范性引用文件
NY/T2321—2013
下列义件对于本件的应是必不可少约，凡是注口期的引而文件·仅注日所的版本适川丁本件。凡是不注日期的引文件，龙最新版本（包拓所有的修改单)适用十本文件。GL3/ 1 GG82分析实验宰川水规格和试验方法CB/T8170数伍修约规贝与级银数值的衣示和判定（-B/T952.1肥科龚大肠菊群的测19624-2肥料中山卵死亡率的测定NY 525有机北料
微牛物肥料态语
NYT 1736
微生物料菌种鉴定技术规范
NY/T1978肥料 汞,种、镉、铅,铬含量的测微生物肥生产菌株的整别聚合酶链式反应（PR）法Y/T 2066
3术语和定义
NY/T=113界定的以及下列术语和定义适用于云文件。3.1
微生物肥料microbial fertilizer含有特定微生物活体的制比.应用」农业生产，还过其中所含微生物的牛命活动，增训殖物养分的洪应量或促讲携物生长，提高t量改善衣产品品质及衣业生态境，微生物肥料包含农用微生物菌剂（即微生物接种剂）复合微丝物肥料动牛物有机肥。3.2
有效菌funetional micrnrganismcffcetive:microrgnnism样品山的月的微兰物群体。
有效(活 数 nurmiber of unctional microorganism每克或每毫升样品十有效菌的数堂34
东菌contaminated mieroorganism群毕中有效菊以外的其他菌，
亲菌数 number uf cun laninaled micrurganism每克或每牵Ⅱ样品中在效菌以外的其他南的数量，3.6
NY/T2321—2D13
杂菌率percentageof contaminatedmicroorganism样品中案菌数占有效菌数与杂菌数之和的自分数。3.7
菌落colony
微生物在固体基质上生长繁殖形成的肉眼可见的，具有一定形态特征的细胞聚集体3.8
总养分totalprimarynutrient
总氮N)、磷（P.O）和钟（KO）食量之4样品要求及试样制备
4.1样品要求
4.1.1样品信息记录
对行检样品进行
LRSTAN
（拉丁文学名）、取（
、执行标准、检测方
记录信息应齐全
41.2样品管理
样晶应按产
染、变质、丢失
执行：仲裁检验
告发出后一个
求处置。
4.2试样的制
试样应从汇
式样制备，应按
5检测方法
5.1有效活菌数
5.1.1通则
根据样品中有效菌印
法平板计数法包指培养基
长及其特情
保质期、菌种名称
及保密等信息
SEARCH
生混灌、污
安相美规定
留至检验报
录，并按要
CENTER
参数检测的
飞机生数法取最用能究
加程技培不能牌识别和
板制备、系动饰房
可能数(MPN法采用5管法
5.1.2培养基
MPN5管测定光合菌数按附
常用培养基配方及具制备要求遵照附录的5.1.3仪器设备
除微生物实验室常规灭菌及培养仪器设备外，其他仪器设备如下。5.1.3.1超净1作台或清净室：洁净室的洁净等级为1030级~100级5.1.3.2恒温培养箱：温度分辨率不低于c,5℃，温度波动允差二1℃5.1.3.3振荡辉（摇味）
5.1.3.4电子天平：感量为9.001g5.1.3.5pH计
显微镜。
ableNumberMPN)
计数5个操作步骤。最
的规定执行。
NY/T2321—2013
5.1.3.7刻度吸管：0.5ml度吸管（具0.C1mL刻度）5mL刻度吸管（具0.1mL刻度）租10ml刻度吸管（具0.1ml刻度）等
51.3.8罐形瓶：容量500mL150ml5.1.3.9培养Ⅲ：09cm
5.1.4操作步骤
5.1.4.1培养基平板制备
根据有效菌的种类远用适宜的培养基。将配制并经灭菌（或除菌）的培养基温度保持在45~50℃，在无菌条件下倒人无菌培养血基平板，检测用平板应无污架
5.1.4.2系列稀释
周体试样称取1
胶塞）锥形瓶中，静
锥形瓶中，在掘
管吸取5.cml
11×10°的百
菌蒸液。系列
准确暇
培养。每个
更换无菌浴
培养综
色，在显微气
时，应采用生
菌落时，检测
加，水平放置，待其凝固后即制备成培养PUBL
Blnspa
电D加
液达有
现家菌
5.1.4.5菌落
荣落计数范
菌落计数范围内
个稀释度的菌落平
算两者的平均数；若人
美愿菜
在计数范
制以低稀
差按式（1）计算，并符合表
式中：
规定，
45mL.无菌水的
标准差.单位为个每（个Ⅲ）：
同一稀释度平板的菌落数，单位为个年Ⅲ（个/Ⅲ）：的500mL具室（棉塞或硅
无菌水的500mL具塞
BRESEAA
或1Cml.无菌刻度吸
充分扳荡播勺.得到
101稀释度的
美英型
的条件下倒置
稀释度之间应
进行涂片和案
天能确认有效菌
对照平板上出现
300个/Ⅲ。选取在
菌落平均数。若有两
值决定
同稀释度平板的菌落平均数，单位为个每Ⅲ（个/血）；重复次数。
其比值小于等于2应计
平板菊落数之间的标准
NY/T 2321—2013
平版国游数
5. 1. 5 结果计算
表1平板上有效菌菌落数对应的充许称准差绝状真菌
充计标准关
平板工荫落效
51~130
H他微生物
分诈称准差
有效活闲数以质单有效活茵数或体积有效活菌数，计，数值以亿个每克（亿个/)或亿个每室亿个/m）表示按式（2)或式（3用算。22.
式市：
谋落平均数，单位为个；
-桥释倍数.为稀释度的例数：
：液体积单为毫升（m）：
固体试择量，单位为克区）：
菌悬液加样量.单位为毫ml)
式中：
转换！较单位m的换算系数。
-液体试样量，单位为毫升（mL）(2)
计算结果的报出值应比对成的产品标准指标要求多保留一位小数：数字修约与数据处理应符合GL-810的规定。
5.2杂菌率
5.2.1培养基
细菌杂阐测定采用附录B中营养肉汤琼脂培养基；寄菊及其他真菌杂菌的测定采川马丁培养基或PDA培关基
5.2.2仪器设备
按5.1.3的规定热行。
5.2.3操作步骤
细茵杀菌、霉茵及式他真菌杂菌的测片同。斗的现定5.2.4结果计算
细茵杂菌数、霉菌及其他真菌杂菌数的算同5..5中式<2)或式（3）。杂菌率以计，数值以%表示，按式(1)计算。
细菌东菌数，单位为亿个每克(亿个/)或亿个每毫升（亿个/m)：…一霉茵及其他真菌杂菌总数，单位为亿个克（亿个/g）或亿每毫升亿个/m）；有效活菌数，单位为亿个克（亿个/)或亿个每毫升（亿个/㎡L）计算结果保留到小数点后两位，数字修约与数据处理应符合GB/T817的规定(1)
5.3有机质
有机底的测定>Y25的规定执行，5.4总养分含量
NY/T 232°—2013
总氮(N)磷(PO含量的测定NY2的规定热行、钾(K含的测可按附录（中规准的净法或VY25内舰定执行，
5.5水分
5.5.1仪器设备
5.5.1.1×T燥：(165±2℃
5.5.1.2电天三，感量为0.co1#，5.5.1.3铝盒
5.5.2操作步骤
将铝盒胃于下操箱中105℃烘3min,冷却后称量并汇录铅念的质比。而绍盒中加人20g精雍到0.)试样并记录质虽；将有试样的铝金登于十燃箱中105（下烘上取出，放人十焕器冷20min后进行称量并已录。每个试样两次平行，5.5.3结果计算
分含星以：让数值以为表示，按式5)计算。n
铅盒的质量.单位为克《；
-试样排盒的质量，单位为克（）：mz .100
：一烘干后试样和铅盒的质旦，单位为克（g）。...{5)
计算结只保留到小数点后：位,改平行果的算术平均值为测定结果：两次平行结果拍缔对差牟届不大十1.の.数字修药与数括处理应符合（3/T8170内规定：5.6细度
5.6.1般要求
颗拉剂型宠以麸皮、米糠、豆料精杆等为载体的微尘物北料产品的纤度测定川+筋法、他产品细度测定采用湿筛法
5.6.2仪器设备
5.6. 2. 1 鼓风T燥箱:(10; .2)℃5.6.2.2电子人平：感是为0.c1g.5.6.2.3试验筛：径c. 18 mm.d1.0mm,2. 0mm和d4.75mm等。5.6.3操作步骤与结果计算
5.6.3.1湿筛法
称取50桔确到.->试样放入烧杯中，加200ml.白来水浸泡:0rin30mn例人试验筛中然示用水冲洗.并月刷子轻利筛间上的试样，直至筛下流正清水为山，将试验筛连同筛上试样改人工燥箱中，作105℃热5上。冷去户称量筛上比栏质量。试栏细度以筛下试样质压分数：计，数传以%表示，按式(6)计算
试群质毕，单位为克（
ma( te)x l
NY/T2321—2013
键）试样水分含量，单位为百分率（%）)：终烘丁后筛上试样质量单位为克（g）。计算结果保留到小数点后一位，数字修约与数据处理应符合GB/T8170的规定。5.6.3.2干筛法
5.6.3.2.1颗粒剂型试样
称取0（精确到01名）试样，将小孔径缸径的试验筛依次叠放在底盘上。试样倒人人孔径试RUBLISHING
验筛内轻筛，直至筛上试样不再下然届你量小乱格试验上的试样质量。颗粒细度以计，数值以岁表示，按式（7）计算
ANDARD
计算结果
5.6.3.2.2
称取59
量筛下低样
式中：
下试群
羊质量
计算结
5.7.1试剂与
水应符合
5.7.1.1 pH 4.
5.7.1.2pH6.86
5.7.1.3pH9.18(25
5.7.2仪器设备
5.7.2.1PH计
拍标准落
5.7.2.2电子天平：感量为0.1g。5.7.3操作步骤
5.7.3.1.打升H计电源预热30mim.用标准溶液校准。RESEARCHG
样不再下落，称
5.7.3.2用量简量取40ml液体试样放入烧杯中，用pH计测定·仪器读数稳定后记录。每个试样两次平行
5.7.3.3称取15g同体试样敢人烧杯中，根据基质类型按1：（2~5)（试样：水）的质量比加人无离子水，搅拌均匀、放置30min用pH计测定，仪器读数稳定后记录，每个试样两次平行57.4结果计算
计算结果保留到小数点后位，取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次测定结果的绝对差值应不大丁0.1，数字修约与数据处理应符合GB/工8176的规定，5.8粪大肠菌群数
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按GB/T19524.1的规定执行：粪大肠菌群数测定流程及最可能数（MPN）检紧表参见附录D5.9虫卵死亡率
按GB/T1952.2的规定执行。
5.10汞(Hg)、砷(As)、镐（Cd)、铅(Pb)、铬(Cr)接NY/T1978的规定执行。
5.11纤维素酶活力
接E.1的规定执行
5.12蛋白酶活力
按E2的规定执行
NY/T 2321-2013
A.1试剂和材料
附录A
（规范性附录】
MPN5管法
常川增养基配力及其制备要求衍合闲求B的规定，A.2仪器设备
亲微正物实验室常规灭菌培养仪器设备外，专他仪器没备如下，A2.1超净「作台或洁净审：洁净室的洁净等级为1c09～103级A.2.2元照培养销。
A.2.3报满器控床）
A.2.4 pH+.
A.2.5电子天平感量为0.03-g
A2.6刻度吸管：）.5：山刻吸管（其0.0lml刻度）、5ml刻度吸管（具0.1mi.数度）和.0ml.别度吸管（具0.1 ml.刻度)等。
A.2.7锥形：容量0l15L
A.2.8螺11试管：穿量101L
A.3操作步骤
A.3.1稀释
历体样称取二0（精确到0.C1g），人带坡埃口装有J0，元案水的500m只案（棉案或硅胶塞形瓶户.静巴20n：液体试栏取10.m.加人带玫璃殊且装有0ml.无菌水5C0mL具寒锥形册中，在录葛器上20:1/min充分派流30：m:,即得例1：1×10的菌悬液。吸取5.0ml上述菌悬液，加人装ml.无菌水约150mL寒形瓶中，充分振流摇匀：得到1：1×13的菌总液：按1：10进行系列稀程依次得到1：【×10°1：1入0°、1：1×10·…..稀释度空菌息液。系列稀释过租中。各个稀释度之间应史换无菌殁管A.3.2加样
选择适的一连续烯释度的菌悬液分别吸取二，心不同稀彝变的菌悬液无菌螺试管中：开用无菌培养岸允满，每一稀释度重复，次，不同释度川更换无剂吸管。同时以无茵水栏空白对黑，A.3.3培养
力样严紧塑料性升摇与.将端厂试誉放到适行的涤件下培择，A4结乘计算
根据山现光合细菌生长的阳试管数，查“MPW最大可能数）.gMPX表”（表A.1)即可计算出光细菌的有效活深数以数有以亿个每总个/之个每宝（亿个/)表示，按式（A.1) -k 1-*..
....... (A. 1)
利数证假值
数车指标笋一位数的端释信数；1c.a
转换成单位为亿/ml.的摸算系数NY/T2321—2013
计算果的报出值保留位或两位小数，数字修约马数据处现应符会（T317的规定。A.5计数规则
在稀释系列中必统最后·个释度所有重复间都没有微生物丝长，定数量指标系取矫释系列啡！所有重复均为阳性的段高稀释度为数量挡标的第位效产，总共取一个注稀群管的结果食太，A.5.1在个部支试管中均出现生长的稀释度巾，把山现牛长的稀释度倍数最高约邢·级放入数列示例：
为：号-0-(耐,则放5-3-0数列
4.5.2在全部5支试台中均不用现生长的稀释度户把辞释度借数最低的邮-级放人数列。示例：
对元-3 -0-0 -0 时,则反 5-3-0 数列。4.5.3如果应川上连两条观，会出现采川如，--4-?-（这样的4个等级物称度的情说，此时，叫先能面的54数列.后取43·数列，分别求山-gMN,然后算H真数的平均值。在此到牛，数列5-4-3的1gMPY为1.447.数列430的IgMPN为0.43十1（后-数列与前数列相应码释了10.枚要1并行校），1.447-1.451)/2=1，239,所以MFN=27，表A.1 MPN,IgMPN表
阿性试管数
烯释管
稀释普
《当于第-
烯释管 1 tL)
0. 255 - 1
0.602-』
0. 653 - 1
e. 835 - 1
0. 838 -1
0. 892 - 1
县试管数
稀深管
稀释管
(牵当于第一
稀率管1ml)
NY/T2321—2013www.bzxz.net
附录B
（规范性附录）
常用检测培养基
PUBLISHING
STANDARD
营养肉汤琼脂培养基
B.1.1成分
蛋白陈
SRESEARCH
牛肉膏
氯化钠N
蒸馏水
将各利
温需过滤
硫酸镁
清节PH
氯化钠(N
碳酸钙（Cne
共喜CH
硫酸钙（CaSo
蒸馏水
B.2.2配制要点
同B.1.2.
B.3根瘤菌培养基
B.3.1成分
磷酸氢二钾(K.IPO·3H.O)
硫酸镁（MgSO7H.O）
氯化钠NaC
甘露醇（CO)
酵母浸膏或醇母浸粉
0.高%刚果红溶液
CENTER
1.0g或0.8g
min，不耐高
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