【行业标准】 植物病原真菌检测规范

中华人民共和国人意检验检安标雅GN/ 2589-2010
植物病原真菌检测规范
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行业标滩
植物编原烹菌检测规范
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精物嘴广惠菌格测规器
$N/H 2583--2510
不标准现定植物病原真苗检测的收样，检测方法、检测过程中的防散技准和防污染指施，结果州定、给果录、结共友核以及萧科和标太制备与保年等力商的要求标期范本标准适片工证出境植物及其产病所工商检测定2规范性引用京件
下列件对不文件的应生是心不可少，汁期的门文件仪注期的版本用本交件凡是不注口期的引用文件，其报新版本点作所有的修政单适用于本文件：2122进中境杭物及物产品检投加荐pMNO.27限定性有客物格测：提的纳定(hagmosprntorelsforresuletedpasts)
宠忍和术语
下须术游和定义适用于本文件
夏蘭az
真陷是其有细用该，无片绿累的真核牛额，一股者班行性或无件紧殖，能够产生恼子，并带分枝或分随的效状菌丝体，真的具有工丁质细听整，3.2.
状symptom
植物变为源物成不以必境因意的优内都的牛现新动外测或生长签育新品尔的就种只学欢
菊原物在寄主的发病部位所衰现出能特3,4
子实体Tnigbody
真菌的产饱维构，与圈的独了产生全头“外信特性的产孢结构上，无论是无性警娟成右性牛随、构葡单复的通称为子件，
于spore
真菌繁殖单位的乱统称分为有性抱平和性的了两天类3.6
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形态学定
限据真菌的生物形态学特红，对其资的进行整累和判定的运程http:
NN/T 2589..-201C
致病性测定athogeniiy1ea
对病服物兵有的得染主物准范费零能力的测究3.8
用一科学研究或比校鉴定仿征何牛物内所分成全部养取样及接收样品
4.1取梓
4.1.1取样原则
根据样品的特以及样品川能心的病原点能在生注更中不同阶段装现山的特点、在奇：的傻染部位，侵架痘状等情短识，确定取格人法、取样方法、取样数导、取伴1具、保存力汰等对实验空检将整定发现期微检妆性菌：们还不能故出询划家，需要工彩样品进行确认时·需车新微定更为合适的圾举门划，迷行次缺样，4.1.2现场取样
及样人员地S>/12122的，有对性的对样品避行检查和取样，并填得机关记录单（如来样闻、数树、采样人，翠样标雅等息：4.2样品传递
样品应放在向受性好、宠闪、防渗滞、具有防交叉污染的样品袋中。在样品袋外部要贴有标签（举品编号，资物名秘，取栏！取样寸间等信息），对需要低湖保存和适输的样品应求收必要施，保证样品在传避过怪中能够保持原存影态，防正而验含有的有育生潮逃遵、护做，确保样品真实，安个、及时传遵实验室、随检样品应微有送检单，检羊一样品分放登。对运输样品的运输工具书激进行消处熙
4.3样品接收
核对样品与送检单，检有包裁容器及样品的融润情理有无污效，对不符合要求的应重新敢样。真写样品接收单。
5检测鉴定方法
5.1检测鉴定方法的选用bzxZ.net
根证不同实验空检测能力，样约具依惯沉，序逆择种成多为法迅行检测鉴定（参见附录A）该方法成已发表：并经过用已知的炳原典阅变参考物质最祛准物质验证无误。5.2形态学检测鉴定方法
52「要选门适当方法，以获皮可贝进行形态华将定的病原真菌（餐刚录），5.2.2要视兵体情况进行规察记求：对有完然的单品，要汇行症款欢繁，并求病症和病状（参见陷录）；对需要迹行分离培养的：则费进行离培择，产计录分离养结兴，对带要逊行敏病性测定的，期2
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要退行接种制致病性测定，并记录接护方然和激性测定结采（参见隔素D），对应用广多照物进行对照签定的，要记录所采用的参照物类单真实菌标术，成片成菌种，要精述参照物来源，了刘病源真术的指述，成视儿分炎情况加以进行（程州附设3，要措述中义名称、英文名陈、阅种兄名、拉工学名，分炎地位，必要时宏效病原菌图，要述与适似种或机关种进行比较的情况。52.4必要时公对病原具菌的性量锁然。5.3分7牛物学检测鉴定方法
5.3.1要档速样品前处！片法（如：CTA13达.设达、试剂盒法等），x制备的核酸要测定其纯度与液度，R缴DAA溶液的DO信为9
53.2要据述单品检浏方法（：清规6实表光R，港因您片和核序列测定与比对等），要设文求照：包活阳空对照、性对照和空自对照，计注明方然的灵敏度，特异性和可重复性S.4点要学检测鉴定方法
5.4.1鉴捐注栏品前处现方汰包矫离心添渐有桃试剂据等。5.4.2要插述样晶检领方法，如凝集流成法、流淀反励法、Wlem法.FI.BA法，股体金检测法等，费设立业治性对照、竭隔生对照、门性炎照和空山对照，汁明方法的灵缴度聘异性、量发性。6检测愿定过程中的防扩散措施和防污染措施在样品检测过释，费采猎施，以防正病原真菌扩散和防正样品被染（参见附录）？骑爆判定
7。1有国家标滋或行业标滩的病原真菌高百接采用间家标准变行业标准进祥特采判定。7.2无国家标准或行业标准的病原真菌2.2。1对采用影态常进行鉴定的，如该病原真菌的形态学鉴定结果与科内外公认，可鞋的真菌分类检索态中的某展成某科岗一政的判为该虞或该种鼠。7.之？对如采月分了生物学检测行检测的，视所加的以下具律方法进行组果判定a）如属实规PR.在阅长对照阴书对照和空日对黑结果均正常的情说下，如样品的扩治产生特外性条带，该系节与志种真菌列长离：致.则判定检浏结果量引性，好该样出特望护增条则判定检测车果单阳件
如质实时荧光PR.则在明性对照，对照、空自对照均正带的情况下，根据实时费光Rh
的Ct值进别签，在进行10个错不的面提下如CL俏小于35的，判定为阳性，始1等于或人于的，判定为引年：介4实的为可凝阳性，如可疑性需操逃行市实验，或出其他方运进行验证：
如属景因芯片险测，测不阅性刘照、性对照、空主对照的管的情况下。如检测群品倍喂比值大于最等于网性质腔信噪比检测带县判为阻件，妇检测样品信噪比伯小丁即性对照待噪比值检测结系判定为订性安检测祥品信噪比介谢性对照信噪比和阳性质控信噪比值之间为可数阳相，需要求周其他检测方装加以验评；（）如揭测序检测，则提测序所得创的钱营龄列：流！知学列进行比对，如果与已知的某种真菌相原的特只核酸子列宝个：一敏则判点检测件果性，不一致购需果其他方法还检测http
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7.2、3对采川免疫学方运边行检视新英用的以下只仅方法进结果判定：如属凝集反成检测，，购所方报生对照，买将对账统黑动止常的情况下，如系凝集反应，在有适置电解成行在下，形成肉限可思的净小康，州习多详品所性：则判楚为码性。如条集抑制试验不形成桌小实削为侧为为降理：如需沉凝皮成检测，则非分汇性对照即生照给来必止常的情况下，如尚现肉眼可见的沉淀条带则判定为性香斯判为闻件如展隐联免疫吸数试验E！长：指测、则朵所有拍性对照、弱医性对照、開件对照和空白列智果常的情下逆过P游行计算。果了值在雅学的闲性判定标准范围内，则判定为阳生栏品：如尚雄荐的示称落尚内则判定为可样品如架N省向推撑的阴性判宠标准范国内圳判尔达创性品：d）“划避党疫胶体金检测则案胶床之来飞心惑京理，车质控线（线成的情况下，间时在C线和下线出现两条检测或则当完生·只现条质控线则灯定为院件样品。8结果说录
8，1基本信息：报检中号、委控总代，年配、接栏门期、地、单品编号限中即证等8.2检验检疫依据：网家标准或行业准或家验会1标等.明标准编号8，3检测方法形态学检测为运·分一牛物学法别法·免学检测方法等彩种方法。4所伙用的仪器设衍如，直微镜索心机，R议学8.5检测统果描述，必要时发支齿照片、可：R剂求图，免装学检测图等，8.6检度员/拟满人复核/核人、测期等8.7论划属形态学鉴定结论要驾贵研玲测的出阅是创美其尚改何积真，如属分了牛物学检测域免疫学检测结论要制为闻栏还右流件S结果复核
必要性，要对检测结集进行复核，复核片致怎核报古10样品、菌种与标本的保瘾
10.「样品的保箍
10，1.1保截样品数标时样品缆号、样品沟称、你城人除微期和到斯期，10.1.2对卡发项冷疫性真菌闪性品要识爽！个！对发乳检疫叫真需的品要保藏【年，对有资易纷的样品成保存至少1年以备鼓验如落及完罚易约给则应供列多纷解决完半。10.1.3样品保藏划程要防业.防焕活案10.1.4安记录保藏空书温度和影规10.1.5样品保存期店，成经火膜处点in.2菌种保藏
成根诺不同的点菌选川不问的方然（容时求）10.3标本的制作与保藏
应印刘不间的病原克菌采用不同的标本制作大法革供说方法（参附录所）品伙伴欧ht
SN/T2589--2010
惰物病原离菌检测医烷流程菌
（游料性附家）
制定理控计点
技体及密收递
分了生物学验测
疫学检测
免玻胶体金检润法
联疫感防训家
潮资成应
凝炭反府
分离增茶
探湿库
洗涨怡险
试饰检
向滋检验
温疾规察
列测油出对
四校测
欧时炎北FCR格
常规检测
养检验
整线头极者读险率检训能可及样品情品择合的其中，格或儿和检测方学....:
图A，1消场病原食蘭检测流程
格汇摄告
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9.1直接检验
、衡科附蒙
植物病微真南检验力法
过通陶眼放镜限微意能的英，原们左进格龄。限2洗涤检验
对着干植物神子衰而病菌的高菌，制说为法逛行检验。该方洪好将试验样品例入维形瓶内加大九蒸馈水含袁而活生商），煎于普味上！：转速振荡，…腋光补的独振蕊tui和萌！振荡1Cm将志浮液转移到九荫密心管中，离心-仗孢行全沉淀在离心管底部，小心弃太清没。加人活量的浮线剂重新态汗心管底的沉淀，将各支离心管的暴严液约，凝容·制片，镜检。3保湿培养检验
对种了表和内部、析物H他器宫等材料携带的嘉商，深用该方法进行检验。该点法是用0。（%升表或70%含解对种子者物紫科、叶片等材特别，消是，儿菌水冲洗3淡用3层无菌吸水纸吸始儿菌水后，液人在菌的增养血内断种子签杆度瘟…宗的距离排列在吸水纸」，一殿不得少丁？cm丁适的温度、尚度和光周期的培养中法尔，在培举期川根据待检点标生物学药性府制定是体观穿计划记录规察结果，非对培养箱的1作状汇检查：.4病组织分离培养检验
对有症状但未产牛疾行的点萌·或射有元性态但仍带实产生有性态选行鉴楚的点菌，戒复合使架具茵，或潜伏夜染真葩，采用该为法进行给验，孩方法部法择其有典型症状的病组织作为材料用0.1界求或7℃牙艺醇表而避行夜而消舞，无菌水波洗3次，将树料忍浮于少虽无菌水中，用剪川在块料的病健交界区剪段约5u的小块，在页菌强学工许：风被月无菌吸水纸吸干水后置于相应的培养基」，再将培养Ⅲ骨于适当的溢度、源烹考光周供的培系箱中养，现察·然后进行纯化都镜检品伙伴网ht
1骑浓观察方法
（料性随教）
物病原点离游最潮康疗法
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.1.1群品属整课植物的，要对整探植物训行整年双案，环对根、爸、计等器宫进行送纠检价。1？样晶属报的，婴对根部迎件：顽紧是有商烂、环碰哟形等症状。、！3格叫毕的，婴刘活部进行检合，观察否有离拦、费色，环死等症状必要时割开维管策，检香是否有变血现家或南核
1.4样品属川片的，要对低片进行检备，现察是1在变产、计斑、环死，格费、崎形等症状，15、详贴属花的，紫对花试行检查，燃繁花、花警等是游有变色、斑点、坏死相萎瞬形等症状。，6样品鸿录实的，要对来进行检售密鼠再坏死腐尴、清形等症状。6，1.7样品滤种子的。岁对种子进行梭：迎察种一的颜位外形大小总否让带、是舍存在特媒气索，是个有闲瘦，
？涵征观察方法
双于生长在值物病部表而的消丝休、创广拍中视独了器等，亲用微了切片，在显微镜一进行规察产对不同的病行选以个尚的舒片方然：年对需状物，向粉菌的闲菜光，思将鼠及病部的菊丝休，采用针取创氏镜检对不能养清的密层用小片副取制片缘检：例对梢物的分壮泡可器、分牛剂了息，子，核等，采用识片搅检创对真菌常层较厚或教源的标求，来儿双闻数惑单面峻，精最真萄，进行镜检http
5/T2589--2010
13.1予实体摘述方法
【盗科性阴鼎】
植病原离菌锅述方法
1如俩+鞭毛菌赛插述纯合资实了送大小、眼，断色，产在方式游新雅广的人小形状和颜色，器和媒卵器的大形和者生在武所独的大小本颜色，菊丝体特征等21.2如属于楼菌，则要持忘在性阶没的偿个跑子大小形状颜色：无性阶段的独了特征，着生存式及疤粪炮于的大小影状等持征。现3如高于魔菊测夏述了囊和子干天小形状颜色隔顺，整单层或双层及予攀顶部特征：子粪兴的人小、形状和颜色善牛分式辨。旗14如满于！！菌，则要描述冬了的大小多就、您，排武（对于馈菌和黑粉离）御施子人小形状，颠乌；扣“人小形状色；起了果的大小态，衰价特征等，D，1.5如遇于半知菌，则妥描述牛六小形状，就色怕子产抱方式，分三独了顿的形态特征，分生离于器或分生孢下盘的大小、形状和额鱼等？对病原茵如需要进行分离培养，训应摘培涨真21墨描述所使用的培养基的牌装.PA.、V8.选杯半格养英等，22描述所使用的培养正种失·如点璃产齐一还温塑料训23、要据述路养的条件包托：地养箱汽及流益范围、培养时门、有光光照、光照强度光照周期必要时还要描述培案度，
2.4、费描速增养结果，包拆荣降劳、天小菌郝颜鱼，格形状边缘是雷光滑装而起平干燥有无特殊气味、菊蒋右生情说;病原菌小形状颜心等。伙伴网ht
（州性附录）
植物源度蘭教种方法
3-/T 2589--2010
对不司的病除真菌采出不回法接种方法乱行数猛性测定：一学楼和法：用六菊独了我闲将种“理，环播。对寄宝的生长状院进行视察没种接种法，引满菌抢了感深浪没治神，产在没泡品的种了倒在含在实的在了的吸小纸的容露内课报，收市放在您中自然滋片悠行榕种，规察：整株喷等法：将真菌拍子器评液片喷多格喷染率尚保1，来形保湿膜或保湿机保湿24h规察
注射：配制读菌独了教浮液川射品物片其供部位注射，白单有注射凝漆出为正//uwwfoodmate.net
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