【商检行业标准(SN)】 进出口危险化学品安全试验方法 第11部分：种系突变试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2497.11-2010
进出口危险化学品安全试验方法第11部分：种系突变试验
Test method of import and export dangerous chemicals-Part11:Germ-linemutation
2010-03-02发布
中华人民共和国
数码防伤
国家质量监督检验检疫总局
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型强繁殖试验；
第4部分：酿酒醇母有丝分裂重组试验；一第5部分：睾丸细胞UDS试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
第8部分：窝淋巴结试验；
-第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；一第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497.系列标准的第11部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2497.11—2010
本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。
本部分主要起草人，张园、王利兵、熊中强、赵琢、李学洋、庞震。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法第11部分：种系突变试验
SN/T2497.11—2010
SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中种系突变试验的试剂和器材、试验方法、试验步骤、试验结果和试验报告。本部分适用于进出口危险化学品种系突变试验。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14925实验动物环境及实施
消毒技术规范
3试剂和器材
3.1试剂
3.1.10.9%氯化钠溶液。
3.1.20.075mol/L氯化钾溶液。
3.1.31%高碘酸溶液：1g高碘酸溶解在100mL二次水中，4℃冰箱保存。3.1.4磷酸缓盐冲液（pH7.4)：配制方法见《消毒技术规范》2.3.8.2.2(9)。3.1.5睾丸细胞分离液（TIM)：取NaCI6.0g，KCl3.3g，CaCl·2H,O0.18g，MgSO。·7H,O0.3gNazHPO0.85g，KH，PO，0.09g，葡萄糖10g，0.5%酚红溶液0.8mL，加蒸馏水溶解至1L，pH为7.2～7.3，4℃保存。
3.1.6Zenkert液：称量K，Cr?O,25g，NazSO，·10Hz010g，加H0溶解至1000mL。3.1.7Helley氏固定液：临用前，加人甲醛溶液（36%40%)50mL到950mLZenkert液中。3.1.810%甲醛固定液：1份甲醛溶液（36%～40%)与3份双蒸水混合。3.1.9Schiffs液：1g碱性品红溶于200mL刚沸腾过的蒸馅水中（注意放碱性品红时不要在沸腾时放人），震荡5min，待溶液冷却至50℃，粗滤纸过滤，在滤液中加人1mol/L盐酸20mL，待冷却到25℃时，加人1g偏重亚硫酸钠，溶解后冷却至室温，室温避光24h，加新鲜活性碳2g充分摇荡数分钟，滤纸过滤，于4℃冰箱保存。
3.1.10哈瑞氏苏木素液：甲液（1g苏木精溶于无水酒精10mL中），乙液（钾明钒20g溶于200mL蒸馏水中），先将乙液煮沸后去火，缓侵加人已溶解的甲液，后立即缓慢加人0.5g氧化汞，再次煮沸，迅速冷却后加入纯冰醋酸8mL过滤使用（注意：在加人氧化汞和钾明钒时要缓慢，注意安全）。3.2仪器和器材
实验室常用设备、生物显微镜、恒温水浴箱37℃土5℃、离心机、解剖剪、镀子、注射器、灌胃针头、离心管、吸管、滴管、试管架、载玻片、塑料吸瓶、干净纱布、滤纸等。1
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4试验方法
4.1试验动物
成年小鼠（体重25g～30g），或大鼠（体重180g～220g）。动物总数不少于30只，雌雄各半。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定。4.2受试物
溶剂通常采用蒸馏水、等渗盐水、植物油、食用淀粉、羧甲基纤维素钠等。如使用特殊溶剂或载体，应有参考资料说明其成分。
4.3剂量分组
应进行预试验以选择最高剂量，为避免出现假阴性结果应适当增大剂量范围。如果受试样品具有毒性，应在第一个采样时间点设三介剂量，设置的剂量应包括从最大毒性至最小毒性或无毒性的范围。第二次采样时问点仅需设置最高剂量。按等比级数2向下设置中、低剂量组。5试验步骤
5.1.1限度试验
如果单次染毒剂量不小于2000mg/kg，未出现毒性效应，且根据资料预期受试物无遗传毒性，则不需要进行其他染毒剂量的试验。5.1.2染毒
一般情况下染毒一次，或者为便于大容量给药，也可分散剂量染薪，即同一日染毒两次，其间隔时间不超过几小时。
高剂量组动物分为A、B两个亚组，分两次采集样品啮齿类动物采样时间一般为1.5个正常期中的间隔期，即A组于木次染毒后12hz18h采集品。B组于末次染毒后36h～42h采集样品；中、低剂量组均于末次染毒后12h～18采集样品。如果采用多次染毒方式，只需在最后一次染毒后12h～18h采一次样。
5.1.3制备细胞混悬液
用颈椎脱白法处死动物，迅速摘取侧睾丸，用TIM液冲去血污，置于小平Ⅲ中，去除白膜，将曲细精管剪成碎段，加入3mLTIM腋的反复吹打后，经铜网过滤倒5ml离心管中，以1500r/min离心5min，弃上清，加TIM液洗涤细胞2次，再加1:5m的TIM液制成细胞混悬液。5.1.4固定
取细胞混悬液于洁净玻片上滴发，每只动物制片两张，静置5min后，滴加Helly氏固定液数滴预固定10min，染缸中Helly氏液再固定y-h.用-76%乙醇冲选儿次后，放到70%乙醇待染。5.1.5染色
将有细胞的玻片用蒸馏水冲洗几次后，1%高碘酸浸泡10min，Schiff's液浸泡10min，自来水冲洗5min，蒸馏水冲洗2次，15%苏木素染色5min，自来水冲洗5min，蒸馏水冲洗2次，用1%盐酸酒精中分色70s，白来水浸泡10min，蒸馏水冲洗2次，依次用50%、75%、80%、90%、95%、95%、100%、100%酒精脱水，酒精二甲苯透明，二甲苯透明，树胶封片，镜检。6试验结果
6.1阅片
所有玻片，包括阳性对照和阴性对照，在镜检前要分别编号。在低倍镜下检查制片质量，制片应全部染色体较集中，而各个染色体分散、互不重叠、长短收缩适中、两单体分开、清晰地显示出着丝点位置、染色体呈红紫色。用油镜进行细胞染色体中期分析。
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确定有丝分裂指数：包括所有处理组、阴性对照组和阳性对照组（每只动物计数1000个细胞）。
计数畸变细胞：用双盲法阅片。每只动物至少分析100个分散良好的中期分裂相细胞，每个剂量组不少于1000个中期分裂相细胞。在阅片时应记录每一观察细胞的染色体数目，对于畸变细胞还应记录显微镜视野的坐标位置及畸变类型。6.2观察项目
染色体数目的改变：非整倍体(亚二倍体或超二倍体），多倍体，内复制。染色体结构的改变：断裂、微小体、有着丝点环、无着丝点环、单体互换、双微小体、裂隙和非特定性型变化（如粉碎化、着丝点细长化、粘着等)。
7试验报告
试验报告应包括以下内容：
受试物：鉴定资料和CAS编号（如已知）；物理性质和纯度；与进行本试验有关的物理化学性质，受试物的稳定性（如已知)。溶剂/赋形剂：溶剂/赋形剂选择依据；受试物在溶剂/赋形剂中的溶解性和稳定性（如已知）。试验动物；所用动物的品系；动物的数量、畜龄和性别；来源、饲养条件、饲料等；在试验开始时动物的个体体重，包括每组的体重范围、均数和标准差。试验条件：阳性对照和阴性(溶剂/赋形剂)对照；有关剂量设置的预试验资料(如进行)；剂量水平选择的理由；受试物染毒的细节；染毒途径的选择理由；细胞悬液的制备方法；制片的方法；阅片观察记录；评价标准；结果判断的标准。结果：畸变细胞数目；染色体数目改变；染色体结构的改变。一结果讨论。
结论。
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中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
进出口危险化学品安全试验方法第11部分：种系突变试验
SN/T2497.112010
中国标准出版社出版
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中国标准出版社秦皇岛印剧厂印剧*Www.bzxZ.net
开本880×12301/16
印张0.5字数8千字
2010年6月第一版
2010年6月第一次印刷
印数1-1600
书号：155066·2-20944
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