【商检行业标准(SN)】 进出口危险化学品安全试验方法 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2497.14—2010
进出口危险化学品安全试验方法第14部分：SDS-聚丙烯酰胺
凝胶电泳试验
Test method of import and export dangerous chemicals-Part 14:Determination of sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electropheresis2010-03-02发布
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中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-09-16实施
SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验第2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型涵繁殖试验；
第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第5部分：睾丸细胞（UDS)试验；第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；
第8部分：窝淋巴结试验；
第9部分：血清溶血素测定试验；第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；
第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；
第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；第19部分：NorthernBlot实验：第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分：DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；第24部分：细胞免疫功能体外检测方法，第25部分：体液免疫功能试验；第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测调亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T2497系列标准的第14部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。SN/T2497.14—2010
本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国潮南出人境检验检疫局。
本部分主要起草人：张园、王利兵、赵琢、王华、李学洋、徐斌。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
进出口危险化学品安全试验方法第14部分：SDS-聚丙烯酰胺
凝胶电泳试验
SN/T 2497.14—2010
SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验的主要试剂、试验步骤和试验结果。
本部分适用于进出口危险化学品SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验。2原理
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SodiumDodecylSulfatePolyacrylamideGelElectropheresis），在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS)，蛋白质样品就会与SDS结合形成带负电荷的复合物，由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量也不同，在电泳中反映出不同的迁移率。根据标准蛋白质样品在电泳中的迁移率和相对分子质量所作出的标准曲线就可以推算出蛋白质样品相对分子质量的近似值。3主要试剂
3.130%丙烯酰胺
取丙烯酰胺29g和1gN，N\-亚甲双丙烯酰胺溶于60mL水中，加热至37C溶解，补加水至终体积为100mL，过滤除菌，避光，4℃保存。3.21mol/LTris溶液(pH6.8)
称取12.1gTris碱加水至接近100mL，用0.1mol/L的HCl调pH值至6.8，补水至100mL，4℃保存。
3.31.5mol/LTris溶液(pH8.8)
称取18.2gTris加水至接近100mL，用0.1mol/L的HCI调pH值至8.8，补水至100mL，4C保存。
3.410%过硫酸铵贮存液
用去离子水配制小量10%的贮存液保存于4℃，1周内使用3.55×甘氨酸电泳缓冲液
15.1gTris碱，94g甘氨酸，再加入50mL10%的SDS，补水至1000mL，室温保存。3.61XSDS凝胶加样缓冲液
50mmol/LTris·Cl(pH6.8），100mmol/L二硫苏糖醇（DTT），2%SDS（电泳级），0.1%溴酚蓝10%甘油，DTT临用时现加。
3.7染色液
先将0.25g考马斯亮蓝R-250溶于90mL甲醇水溶液（体积比为1：1)和10mL冰乙酸的混合液中，过滤。
3.8脱色液
90mL甲醇与水(体积比为1：1)和10mL冰乙酸的混合液。1
SN/T\2497.14—2010
试验步骤
4.1变性
将样品置于1×SDS样品缓冲液中，于100℃加热3min使蛋白质变性。4.2
根据蛋白质相对分子质量大小选择相应的SDS聚丙烯酰胺凝胶浓度，见表1和表2。表1配制10mL不同浓度Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液单位为毫升
液成分
30%丙烯酰胺溶液
1. 5 mol/L Tris(pH8. 8)
10%SDS
10%过硫酸铵
胶浓度
：配制5mL5%
6Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳积层胶所用溶液表2
30%丙烯酰胺溶液
1. 0 mol/L Tris(pH6.8)
10%SDS
10%过硫酸铵
4.3上样
单位为旁升
取处理好的待测蛋白样品各（10~20)μL上样，未加蛋白样品的齿道应加上等体积1×SDS样品缓冲液。
4.-4电泳
凝胶上所加电压为8V/cm，当染料进人分离胶后，把电压提高到15V/cm，继续电泳直到溴酚蓝达到分离胶底部，然后关闭电源。4.5染色
将凝胶置于5倍体积的染色液中，平板摇床上室温染色4h以上。4.6脱色
将凝胶置于脱色液中，平板摇床上脱色（4～8)h，其间更换脱色液(3～4)次。5
试验结果
将脱色后的胶拍照后，剪一块比胶稍大的滤纸，将胶置于滤纸之上，用干胶机干胶后保存。SN/T2497.14-2010
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凝胶电泳试验
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中国标准出版社秦皇岛印剧厂印刷*
开本880×12301/16印张0.5字数6千字2010年6月第一版
2010年6月第一次印剧
印数1-1 600
书号：155066·2-20947
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