【国家标准】 显性致死试验

1CS07.100
中华人民共和国国家标准
GB15193.9--2003
代替GB15193.9-1994
显性致死
Dominantlethal test
2003-09-24发布
2004-05-01实施
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
GB15193.9—2003
本标准全文强制。
本标准代替GB15193.9-1994《显性致死试验》。本标准与GB15193.9-1994相比主要修改如下：在“范国”中增加了受试物的具体内容：食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消萨剂、农药残留、普药残留、食品工业用微生物等；在“实验动物\中：将“成年小鼠（体重30g以上）或大鼠（体重200g以上）\改为\成年小鼠（性成熟，体重30g以上或大鼠（性成熟，体重200g以上）”，“动物数量”雄性动物每组不少于10～15只，雌性动物每组不少于20只～30只，改为雄性动物每组不少于15只，雌性动物每组不少于30只受孕鼠；
将“分组”下的两项内容“组数”和”动物数量”合并改为“剂量及分组”，高剂量组的设计方法增加一条“急性毒性试验给予受试物最大给予剂量（段大使用浓度和最大灌胃容量）测不到LD。时，则以10g/kg体重、人的可能摄入量的100倍、或受试物最大耐受量为最高剂量\；“一增加“结果判定\内容。
自本标准实施之口起，GB15193.9—1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起总单位：同济医科大学，上海医科大学。本标准主要起草人：朱清华、柳启沛。本标准于1991年首次发布，本次为第一次修订。66
1范围
显性致死试验
GB15193.9—2003
本标准规定了显性致死试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的致突变作用和对人体可能产生的危害（检测染色体结构和数量的损伤，但不能检测基因突变和毒性作用），检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。
2原理
致突变物可引起哺乳动物生殖细胞染色体畸变，以致不能与异性生殖细胞结合或导致受精卵在着床前死亡，或导致班胎早期死亡。3试验动物
选用健康动物，符合试验规格，且有合格证号。经生殖能力预试，受孕率应在70%以上者。雄性成年小鼠（性成熟，体重30g以上）或大鼠（性成熟，体重200g以上），预先接触受试物，再进行交配。交配用的成年雌鼠，不接触受试物。雌性鼠为雄性鼠的5～6倍量。每组雄鼠一般不少于15只，雄鼠与雌鼠交配，使每组产生至少30只受孕雌鼠。4剂量及分组
试验至少设3个受试物剂录组。高剂量组应引起动物生育力轻度下降。各组受试物剂量可在1/10～1/3LD，之间。急性毒性试验给予受试物最大剂（最大使用浓度和圾大灌胃容量）求不出IL.D时，则以10g/kg体重、人的可能摄人量的100倍、或受试物最大给予剂量为最高剂量，再下设2个剂低组，另设溶剂对照组和阳性对照。阳性对照物可用环磷酰胺（40mg/kg体重）。雌性动物每组不少于30只受孕鼠。一般应同时做阳性和溶剂对照组。5操作步骤
5.1给予受试物
5.1.1给予途径：应采用灌胃法，或用喂饲法。5.1.2给予受试物的方法：灌胃法一般一日一次，或一日两次，连续6天或3个月。5.2交配
给予雄鼠变试物后，按雌雄鼠2：1比例同笼交配6天后，取出雌鼠另行饲养。雄鼠则于1天后，再以同样数量的另一批雌鼠同笼交配，如此共进行5批～6批。5.3胚胎检查
以雌雄鼠同笼日算起第15天～17天，采用颈椎脱白法处死雌鼠后，立即剖股取出子宫，仔细检查、计数，分别记录每一雌鼠的活胎数、早期死亡胚胎数与晚期死亡胚胎数。5.4胚胎鉴别
活胎：完整成形，色鲜红，有自然运动，机械刺激后有运动反应。早期死亡胚胎：胚胎形体较小，外形不完整，胎盘较小或不明显。最早期死亡胚胎会在子宫内膜上67
GB15193.9—2003
隆起如一小瘤。如已完全被吸收，仅在子宫内膜上留一隆起暗褐色点状物。晚期死亡胚胎：成形，色泽暗淡，无自然运动，机械刺激后无运动反应。6数据处理
受孕率（%）=
孕鼠数
交配雌鼠数bzxz.net
总着床数活胎数+单期胚胎死亡数+晚期胚胎死亡数总着床数
平均着床数=
受孕雌鼠数
早晚期胚胎死亡率（%）=早(晚）期胚胎死亡数、X100
总着床数
早期胚胎死亡数
平均早期胚胎死亡数一
受孕雌鼠数
+·（2)
（3）
......(4)
按试验组与对照组动物的上述指标分别用X检验、单因素方差分析或秩和检验法，进行统计分析，以评定受试物的致突变性。7结果判定
根据以上计算出的受孕率、总着床数、早期和晚期胚胎死亡率予以评价。试验组与对照组相比，受孕率或总差床数明显低于对照组，早期或晚期胚胎死亡率明显高于对照组，有明显的剂量反应关系并有统计学意义时，即可确认为阳性结果。若统计学上差异有显著性，但无剂基反应关系时，则须进行重复试验，结果能重复者可确定为阳性。68
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