【国家标准(GB)】 动物源性饲料中生物胺的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T23884--2009
动物源性饲料中生物胺的测定
高效液相色谱法
Determination of biogenic amines in animal-derived feeds-High performance liguid chromatography2009-05-26发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-10-01 实施
水标的附录A和附录B为资料性附录本标准用全国饲料T业标准化技术委员会(SAC/1C75)提出并归口。GB/T23884—2009
本标准负责起常单位：中国农业大学、农业部泻料效价与安企监督检验测试中心（北京）。本标准主要起草人：杨文军、张丽英、正宗义。1范圈
动物源性饲料中生物胺的测定
高效液相色谱法
GB/T 23884--2009
本标准规定了以高效液相色谱测定鱼粉和肉骨粉中的组胺、腐胺、尸胺、酪胺、精胺和亚精胺的方法，6种生物胺的化学名称，分了式和相对存了质量（接1999国际相对原了质量）参见附录A。本标推用于动物源性饲料鱼粉和肉骨粉中组胺、腐胺、尸胶胺、酪胺、精胺和亚精胺的测定，检测限y 0. 5 mg/kgs
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而，鼓勋根本标谁达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注H期的引用文件.其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验案用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样中的组胺、腐胺、尸胺、酪胺、精胺和亚精胺以5%三氯乙酸溶液提取，经碱化,苯中酰氯衍生化后，乙醛萃取，氮气吹于，甲醇济解残渣，反相液相色谱杜分离测定，紫外检測器检测，外标法定量分析。4试剂和材料
除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级用水规定。4.1苯甲酰氯。
4.2艺腈（色谱纯）。
4.3三氯乙酸。
4.4乙酸铵。
4.5氢氧化钠。
4.6Z醚。
4.75%三氯乙酸提取液:称取 50 g三氯乙酸,用水溶解,并定容至 1 000 mL。4.8c(CH,COONH4)=0.02mu1/L乙酸铵溶液：称取1.54&乙酸铵，用水溶解，并定容至1000mI4. 9c(NaOH)=2 Iol/L 氧氧化钠溶液:称取 80 g氢氧化钠,用水溶解,并延容至 1 000 ml.。4.10标准储备液：分别雅确称取组胺、腐胺、户胺、酪胺、精胺和亚精胺标准品适量（含量≥99.0%），于棕色容量瓶中，用水溶解，定容至刻度，摇勾，使其溶液浓度为1mg/ml，存于4℃冰箱中，有效期为一个月，
4. 11标准上作液：准硫量取标准储备液(4.10)于容量瓶中,用水稀释,依次配制成浓度为0.1μg/mL，1.0μg/mL、5.0μg/mL、1G.0μg/mL、20.0μg/mI.50.0pg/inL的标准落液，现配现用5仪器
5.1分析天乎（精度0.1mg）。
GB/T 23884-2009
5.2超声波清洗器
5.3微孔有机相滤膜：孔径0.45μm。5.4恒温水浴锅。
5.5涡旋振荡器。
5.6氮吹仪。
5.7摇珠。
高效液相色谱：配置紫外检测器。试样制备
按GB/T20195的规定制备试样，粉碎过孔径0.45mm筛，充分混勾，装瓶，备用。7分析步骤
7.1试液的制备
7.1.1提取
称取 1. 00 书～2. 00 g试样(准确至 0. l mg)于 50 mL. 螺口离心管中,准确加人 20. 00 InL 提取濑(4.7)，据床中报荡提取，转速为120r/min，振播30min。提取液在3000r/rnin离心10min，上清液作为衍生化使用，
7.1.2衍生化
准确移取2.00mL上清液（7.1.1)于10ml.离心管巾，加人2.00mL2mol/L氢氧化钠溶液（4.9），播句，再加人20.UμL苯甲酰氯（4.1），涡旋振荡30s，置于37.5℃水浴锅甲20min，舒隔5min振蕨30 $。
7.1.3萃取
离心管中加人2. 00 g氯化钠，涡旋振荡 30 s，再加人 2. 00 mL 乙醚(4. 6),涡旋振荡 30 s,静置2min，在3000r/min离心10min
7.1.4氮吹
将离心管上层的乙醚层移取至另外10.00mL离心管中，氮气吹干，向钱漆中准确加入1.00mL甲醇，甲醇液通过0.45μm有机相滤膜，滤液上机测定。7.2标准工作液的衍生化、萃取和氮吹同时移取标准工作液，衔生化、萃取利氟吹，步骤同7.1.2、7.1.3和7.1.1。7.3色谱条件
7.3.1色谱柱：具有Cl填料的柱子(粒度为5im）：柱长150mm，内径4.6mm。7. 3. 2
流动相及洗脱程序（如表1）：
表1梯度洗脱程序
时间/
7. 3.3 流速:1. 0 mL/min.
7.3.4进样体积：10μL～20 μL。7.3.5检测波长：254nm。
0. 02 mol/L乙酸铵溶液/
乙崩/
8定量测定
GB/T 23884-2009
向液相色谱柱中注人待测定组胺、腐胺、户胺、酪胺、精胺和业精胺标准.1作液及试样溶液（7.1.4)，得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。6种生物胺标准色谱图参见附录13。9结果计算
9.1试样中组胺、腐胺、口胺、略胺、精胺和业精胺含量以质量分数\（mg/kg)计1分别按式(1)计算：P XVxc. xV.
式中：
试样溶液峰面积值；
试样的总稀释体积,单位为毫开(mL)；-标准浒液浓度,单位为微克每毫升（μg/mL）：C,
-标准溶液进样体积，单位为微升(u)；P.----标溶液峰面积平均值；
m--试样质量,单位为克(g)；
试样溶液样体积，单位为升(）Www.bzxZ.net
9.2平-行测结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。10重复性
在重复性条件下，成的两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。(
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附录A
【资料性附录】
6种生物胺的化学名称、分子式和相对分子质量6种生物胺的化学名称、分子式和相对分子质量见表A.1。表A.16种生物胺的化学名称.分子式和相对分子质量名称
亚精胺
化学名称
2(4咪唑基)乙胶
1,4-丁二矮
1,5-成二鞍
2-对羟率乙胺
NN\-双(3-氨内基)-1,4-丁.二胺N(3·氨丙湛)-1,4-T-胺
分了式
CyHr,N;
相对分子质虽
6 种生物胺标准色谱图,见图B.1.2.00
腐胺；
2H胺·
一亚精胺，
精胶；
一组胺；
一酪胺。
附录B
(资料性附录）
6种生物胺标准色谱图
图.16种生物胺的色谱圈
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打印日期：2009年10月14
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动物源性饲料中生物胺的测定
高效液相色谱法
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