【国家标准(GB)】 饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T23882—2009
饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法
Determination of L-ascorbyl-2-monophusphate in feeds-High performance liquid chromatography2009-05-26 发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-10-01实施
中华人民共和园
国家标雅
饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法
GB/T238822009
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开本880×12301/16印张0.5字数8千字2009年8月第--版
2C09 年 8 月第一次印刷
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本标的附录A为资料性附录：
本标准由全国饲料.L业标推化技术委员会(SAC/TC76)提出并归GB/T23882-2009
本标准起草单位：国家饲料质监督检验中心（武汉）、北京桑普生物化学技术有限公司、帝斯曼维生素(上海)有限公司。
本标准主要起草人届利文、施文嫦、虞哲高杨海、何风琴、黄婷。ht
1范围
饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的测定高效液相色谱法
本标雅规定了饲料中L-抗坏血酸-2-磷酸酯的高效液相谱检测方法，GB/T 23882--2009
本标准适用于水产用配合何料、浓编饲料、添加剂预混合饲料中L-抗坏血酸-2磷酸酪含量的测定，方法检出限为2 tng/kg(以 L-抗坏面酸计),定量限为 10 mg/kg(以 L-抗坏血酸计)。2规范性引用文件
下列文件中的条款过本标准的引用也成为本标推的条款。凡是注且期的引扭文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标推，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注门期的引用文件，其最新版水适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样
CB/T20195动物饲料试样的制备
3原理
试样中的L-抗坏酸-2-磷酸酯用磷酸盐缓冲溶液提取，离心，过滤.过滤液用高效液相色谱仪进行测定,外标法定量。
4试剂和溶液
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水的水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2磷酸。
4.3磷酸二氢钾。
4.4四丁基硫酸氢铵。
4.5磷酸盐缓冲溶液:54 g磷酸一氢钾溶于 900 mL水中，用磷酸(4.2)调至 pH3.0 庐，用水稀释至1 000 mL。
4. 6 流动相:称取 6. 8 g磷酸二氨钾(4. 3),0. 5 g 四基硫酸氢铵(4. 4),置于 1 000 mL 容量瓶中,加入约700 mI水，待全部溶解后,加人75mL甲醇(4.1),用水定容至刻度，摇匀，过0.45 μI滤膜，超声脱气。
4. 7 T-抗坏血酸-2-磷酸酯标准储备液(以 L-抗坏血酸计=100 pg /mL)：准确称取三-环已胺-抗坏血酸-2-磷酸酯［tris-（cyclohexyl-ammonium）ascorbicacid-2-phosphatcJ(CuH4gN,O,P纯度>99.0%）标品 0. 015 8 g(标雅品以 L-抗坏血酸计,换算因于为 0. 318 1)用磷酸盐缓冲溶波(4. 5)溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中保存在4‘℃冰箱中，有效期-个月。4.8L抗坏血酸2磷酸酯标准工作液：分别移取L-抗坏血酸-2-磷酸配标准催备液（4.7)0.50mL，1.00 mL,2.00 mL,5.00 mL,10.0 mL置50 mL 棕色容量瓶中,用磷酸盐缓冲溶液（4.5)定容，以L-抗坏血酸计浓度为1.00g/mL，2.00μg/mL，4.00μg/tml.10.0μg/ml.,20.0μg/mL标证工作液。当配制。
合品伙网ht
GB/T 23882—2009
5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪，配有紫外或二极管阵列检测器。5.2离心机：3500r/min.
5.3超声波水浴。
6菜样
按照GB/T14699，1的规定执行。7试样制备
按GB/r20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，混句，装人密闭穿器中，避光低温保存备用。8分析步骤
8.1提取
称取一定量的试样[含 I-抗坏I酸-2-磷酸酪(以 L-抗坏血酸计)药 1 mg],精确至 0. 1 tg:置于100mL容量瓶中，加人约70mL酸盐缓冲溶液（4.5），了超波水浴中超声处理15min，用磷酸缀冲落液（4.5)定容至刻度（V）。取适量溶液3500r/min离心5min，离心后上清液经过0.45μm滤膜过滤，滤液用于高效液相色谱分析。8.2測定
8.2.1液相色谱参考条件
色谱柱：C柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5um.或性能相当者。柱窦温。
流速l.心ml./min。
检测波长;250 nm。
进样量：20ML
8.2.2标准曲线的绘制
向基线平稳的HPI.C分析仪连续注入L抗坏血酸-2-磷酸酯标准T.作液（4.8)，浓度由低到高，以峰面积-浓度作图，得到标谁曲线回归方程。8.2.3定量测定
注入待测样液（8.1），其中抗坏血酸-2-磷酸酯的峰面积响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。依据峰面积，从标准曲线中得到待测样液中L-抗坏血酸-2-磷酸醋的浓度(C)。有关色谱图参见附录A。9结果计算
试样中L-抗坏而酸2磷酸酯的含量（以L-抗坏血酸计)X，以质最分数表示，单位为毫克每干克(mg/kg),按式(1)计算：
式中：
（1）
山标准曲线而得的试样液L-抗坏血酸-2-磷酸酯的浓度（以I-抗坏血酸计），单位为微克每亳升（g/mL）：
试样定容体积，单位为毫升（mL）；金日伴网
m-试样质鼠，单位为克(g)；免费标准bzxz.net
n一稀释倍数。
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。10重复性
GB/T23882—2009
同实验室由同一操作人员使用同-仪器完成的两个平行测定结果的相对偏差不大于15%。http：//foodmate.netGB/T 23882—2009
附录A
(资料性附录）
L-抗坏血酸-2-磷酸酯色谱图
A. 1三·环已胺-L-抗坏血酸-2-磷酸醋标准I作液的色谱图见图A.1。my
2.7903.440
图A,1三-环已胺-L-抗坏血酸-2-磷酸酯标准工作液的色谱图A.2L-抗坏血酸-2-磷酸醋样品试液的色谱图见图A.2。mv
1-抗坏血酸-2-磷酸酯样品试液的色谱图图A.2
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打印日期：2009年10月14口
数-8-件-7
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毕号：155066 -1-38470
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