【农业行业标准(NY)】 饲料中苏丹红染料的测定 高效液相色谱法

ICS65.120
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1258--2007
饲料中苏丹红染料的测定
高效液相色谱法
Determination of sudandyes in feedHigh-performance liquid chromatography2007-01-19发布
2007-01-19实施
中华人民共和国农业部
本标准附录A为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。前言
本标准由全国饲料汇业标准化技术委员会闷I。本标准起草单：国家饲料质量监臀捡验中心（北京）本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、闫惠文、刘庆生。httn-/
NY/T1258-2007
1范围
NY/T 1258—2007
饲料中苏丹红染料的测定、高效液相色谱法本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中的苏丹红染料，方法定量限为0.05/kg本标准造用于配合饲料、浓缩制料及漆加剂顶混合饲料苏红工、苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅱ的测定。
2规范性引用文件
下列文件的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用一本标准，然而，鼓励根据不标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡足不注口期的引用文件，其最新版不适用于本标准，GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法GB/T14699.1饲料采样
3原理
试样巾中赤丹红染料经乙腊振荡提取后，氮气吹下浓缩，注人高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器和二极管矩阵检测器进行定性、定量测定：4试剂和溶液
除非另有规定，在分析中仅使月确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的级用水。4.1乙崩：色谱纯。
4.2乙崩：分析纯。
4.3流动相：溶剂A-Z；辫剂B—水。4.4苏丹红染料标准品：苏丹红I苏丹红Ⅱ、苏丹红、苏丹红V的纯度均成大丁95%。4.5苏丹红染料标准溶液
4.5.1苏丹红染料标准贮备液：分别准硫称取已知纯度的苏丹红标准品苏丹红T、苏丹红Ⅱ、苏丹红川，苏丹红V各10mg，精确至0.0001g，分别置」100ml.棕色容量瓶中，加乙（4.1)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇勾。该溶液中苏丹红」、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红IV浓度均为100g/mL，于4℃:裸存可使月3个月。
4.5.2办丹染料标准中+间液：分州准确移最苏丹红I、苏外红、苏丹红Ⅲ、苏丹红标准忙备液(4.5.1)各5ml,置于50mL棕位容量瓶巾用乙睛(4.1)定容至刻度。该溶液中苏丹红染料浓度为10g/ml，手4℃保存可使用1个月。4.5.3苏丹红染料标准工作液：准确移取苏月红染料标准中间液（4.5.2)0.5mL.1.0mL、2.5mL、5.mL、10.0mL于50mL棕色容量瓶中，用乙情(4.1)定容垒刻度。此时，游液F苏月红染料的浓度分别为0.1g/mL、0.2μ/rrl0.5热/mL、1.0μg/ml.2.0g/mL，十4保存使用一周5仪器和设备
除实验室常用仪器利设备外，还包括：5.1电子大平：精度为万分之一和下分之各1NY/T1258—2007
5.2振荡器。
5.3高效液相色谱仪：紫外检测器（多波长）利：极管短阵检测器。5.4针头过滤器：备孔径为0.45um有机微孔滤膜。5.5离心机：5000/min。
5.6氮吹仪：50
5.7涡轮混个器：2500r/ina
6试样的选取和制备免费标准下载网bzxz
6.1按GB/T14699.1采样
6.2选取有代表性料样品至少500g，叫分法缩减至100g，粉碎，全部通过孔径为0.42mm的试验筛，混，装人密闭容器中，避光低温保存，备用。7分析步骤
7.1试液的制备
7.1.1提取　
移起合饲料10g；浓缩饲料，添加剂预混合饲料样品5g（梢确至0.001g），置十150mL具塞链形瓶中，圳人50ml.的乙睛（4.2），丁振荡器（5.2)振荡提取30min，离心，上清液备用。7.1.2准确吸取试液(7.1.1)中配合饲料提取液10mL，氮气吹干，人2mI.乙腈（4.1)涡轮混合器(5.7)混合30s，过孔径为0.45um的有机滤膜，滤液上机测定：7.1.3浓缩饲料、添加剂预混合料提取液直接上液相色谱仪测定。7.2色谱条件
7.2.1色谱柱
具有Cl填料的柱了（粒度为5urr）性长250mm,内轻4.6mmc7.2.2流动相[4.3]
以1.0mL/min流速梯度洗脱。梯度条件见表1。表1洗脱梯度表
时间（mir）
7.2.3进样量
50 prle
7.2.4检测器
济剂(A%）
济剂(B%）
紧外检测器和二极管矩阵检测器，检测波长苏红1为478nm；苏丹纪目、苏丹红亚、苏丹红N均为520mm
7.3测定
7.3.1定性测定
二极管矩阵检测器定性。样品峰只有满足下述条件，才能证实是苏丹红染料：NY/T1258—2007
a）样品峰的保留时间与标准峰的保留时闻柑同（差异土5%）。如有怀疑，需做标准物添加（邸将标准物加到样品中)实验：
b）波长大于220irn、样品的光谱图应与标准品光谱图无明显差别，样品峰与标准峰的最大吸收波长相同，即其差异不大于检测系统分辩率决定的范围（般是2m～4nm).7.3.2定量测定
7.3.2.1按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。问液相色谱柱中汁入待测苏丹幻染料标准液（4.5.3)及试液（7.1).得色谱峰间积响应值，用外标达定量。7.3.2.2结果计算
试样中每种苏丹红染料的含量按式(1)分别计算：W,_PxVxxy
pixmxV:
式中：
试伴中每种苏丹红的含量，单位为毫克每下克（/kg)；W.
P：——试样溶液峰面积值;
V一样品的总稀释体积，单位为宝升（mL）；C-标准溶液浓度，单位为微克每毫升（增/mI.)：Vt——标准浴溶液进样休积，单位为微升(L)：P&——标推落液峰训积平均值；m—试样质量，单位为克(g)：
V.-试样溶液进样体积，单位为薇升(uI.)。平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。8重复性
同一分析省对同试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大折10%。(1)
NY/T1258—2007
（资料性附录）
苏丹红标准色谱图
DAD1 If,Sig=520,4 Ref=off(200612181SLG0.00(KG.D)mAu
wh+tn:
苏月红
NY7T 1258-2007
中华人民共和国
农业行业标准
饲料中苏丹红染料的测定高效液相色谱法NX T 1258--2007
中国农业出版社出版
（北京市朗阳区建子店街18号楼）（邮政编码：1010026
网址：cap.com.cn)
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开本880um×1230mm1/16
2(7年1月第「版
学数了下学
2007年1月北京第1次印划
书号：16109：190
印效：1·-500所
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