【商检行业标准(SN)】 非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1559.2—2005
非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程Protocol of indirect immunofluorescent assay for African swine fever2005-02-17发布
华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2005-07-01实施
SN/T1559.2—2005
本标雅参腹了国际乱场工生组织（F)公有的诊断流验和疫用标范手所（204年版）关丁非渐猪瘟诊断中的间接免疫荧光抗体试验方法。本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并力口本标准起草单位：中华人民共和区广东出入境检验检疫局负夷起草。本标雅主要起草人：刘中勇、周芳、许如苏、游洪。本标摊系肯次发布的出人境检验检疫行业标准。范围
非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程本标准规定了间接免疫荧光试验检测评洲猪痘抗体的方法。本标准适用一非洲猪瘟抗体哟检测。2仪器设备
2.1荧光显微镜。
2.2到置最微镜。
2.3二氙化碳培养箱和普道恒流培养箱，2.4冰箱.
3试验材料
3. 1非洲猪痴标雅毒株。
3.2非洲猪瘟标准朔性心消和阳性血清。3.3抗猪荧光抗体。
3.4PK 15 细胞(猪肾组胞)或Vero 纸胞(非洲绿猴肾细胞）：3. 5 胎牛而清。
3.6被检血清：56火洁30mi
3.7蒸馏水(pl17.4).胎制方法参贝录A，3.8细胞基础培养液、纸袍生长培养液和细胞维诗液.配制方法参贝附录A，3.90.01=nol/L Pl1 7.1 PBS(磷酸盐缓冲液）、制方法参见附录 A-3.1℃缓冲甘油：使用中性尤发荧光的卡油(分析纯)制，配制方法参见附录A。3.11丙嗣：使用前置冰箱预冷
4操作方法
4.1病毒培养
SN/T 1559.2—2005
用细胞生长液培养 PK 15细咆或 Veru细袍,待纸胞长成单层后,充去培养液,加人非洲猪癌标滩母株，使病母液刚好完全覆盖细把。于37%一瓦化磁培养箱中吸附0.5上~-21：充去病母液：唤以新鲜的细胞维诗液·置于37℃5%一氧化碳培养箱内培养-遂H观察，待50%以1:纸胞出现CPE（细胞病变)吋收获。同时培养末感染病每的细袍、供对照億用4.2制备抗原片
将收获的非洲猪疯病毒感裂细胞配制或浓度为5×_0°/ImL的胞悬液,滴2~3滴于载皱片.1涂成的垒薄片，室温下多懿氮二，用砸冷丙谢固定10 IIir后，制成拉原片：置一2C℃保存：4.3制备细胞对照片
将长成细胞单层的 PK 15 纸胞或 Ver 纸胞按 4. 2 哟方法制备细胞对照片,4.4加样www.bzxz.net
用PBS将被检门消作 1：10 释释后,取遍兰加一抗原片和细胞对照片「:,分别制成得检标本和纽胞对照标本，将标本人凝盒内.置于37恒湿培养箱内温育1h.SN/T 1559.2—2005
各取「块抗原片和继胞对照片,离川1作浓度的非洲猪瘟病毒标准阳性血清,制成阳性刘照标本另取流原片和细跑对照片各片，滴加工作浓度的非洲猪瘟病毒标准阴性心清，制成阴性对照标本，4.5
用PBs分别标尽3次.每欲5rrin，最后用蒸镶水源漂洗3rmin：加抗猪荧光抗体
收出标本，沥：水分，分别滴剂1作浓度的抗猜炎光充体，将标本放入湿食，置于37忙温庞养籍内温行1
4.7漂洗
重复骤4.5操作，白然风干
4.8镜检
在标木分别滴矾缀冲［油「滴，置荧光显微镜下观察。结果判定
当即性对照标本的纸抱胞浆出现荧光·低阴性对照标本和细胞对照标本的细胞胞浆无荧光时，对照成立，川逊行结果判定，
疱胞浆出现光的被检标本判为阳性。纽胞胞浆无荧光的被检标本判为阴性。2
A. 1 pH 7. 4 蒸馏水
用盐酸最氨氢化钠调蒸馏水PII值A.2细胞基础培养液
碳酸氨钠（NaHCO）
加双蒸水率
附录A
(资料性附录）
试剂配制
1 000 mL
币0.22微孔滤膜过滤菌，分装，二保存备爪，A,3细胞生长培养液
士细胞苯础培养液穴加入[杀胎牛血清即咸细胸生长培养液A.4细胞维持液
在细胞基础培养液户加入5%胎牛而清即成细胞维诗液，A. 50. C1 mol/L pH 7. 4 PRS(磷酸盐缓冲液)磷酸二氢钙(KHPO)
磷酸氧二钠(NaHPO.·12H,O)
鼠化钠（NaCI)）
加蒸馏水至
A.6 缓冲甘油
川油(分析纯）
0,01 r1o./L pH 7.4PBS
1000 ml
SN/T 1559.2—2005
SN/T 1559.2-2005
中华人天共和函人境检验检疫
行业标滩
非洲猪瘟间接免疫荧光试验操作规程SV/T 1559.2 2005
中国标准出版社出版发行
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