【农业行业标准(NY)】 农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验 平皿法

ICS65.100
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1156.2—2006
农药室内生物测定试验准则
杀菌剂
第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平血法
Pesticides guidelines for laboratory bioactivity testsPart 2: Petri plate test for determining fungicide inhibition of mycelial growth2006-07-10发布
2006-10-01实施
中华人民共和国农业部发布
《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》为系列标准。本部分是《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》的第2部分。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部农药检定所。本标准主要起草人：朱春雨、吴新平、徐文平、张弘、邱涧平、李钟华。本标准由农业部农药检定所负责解释。NY/T1156.2—2006
1范围
农药室内生物测定试验准则杀菌剂NY/T1156.22006
第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平血法本部分规定了平血法测定杀菌剂抑制病原真菌菌丝生长试验的基本要求和方法本部分适用于杀菌剂对病原真菌菌丝在平板表面生长抑制作用测定的农药登记室内试验，其他试验参照本部分执行。
2试验条件
2.1试验靶标
试验靶标应选择在人工固体培养基上菌丝能水平方向、有一定生长速率且周缘生长较整齐的真菌，如番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea）、水稻纹枯病菌（Rhizoctomia solani）、小麦赤霉病菌（Fusariumgraminearum）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）辣椒炭疽病菌（Colletotrichurncapsici）和番茄早疫病菌（Alterneriasolani）等。记录菌种来源。2.2仪器设备
2.2.1电子天平（感量0.1mg）；2.2.2生物培养箱；
2.2.3培养皿；
2.2.4移液管或移液器：
2.2.5接种器；
2.2.6打孔器：
2.2.7卡尺等。
3试验设计
3.1试材准备
试验用病原真菌在适宜的培养基上培养备用。锥形瓶、玻璃棒、移液管、培养血、打孔器、接种器等灭菌后备用。3.2药剂
3.2.1试验药剂
试验药剂采用原药（母药），并注明通用名、商品名或代号、含量和生产厂家。3.2.2对照药剂
对照药剂采用已登记注册且生产上常用的原药。对照药剂的化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。
3.3试验步骤
3.3.1药剂配制
水溶性药剂直接用水溶解稀释。其他药剂选用合适的溶剂(如甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚矾等)溶解，用0.1%的吐温80水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个~7个系列质量浓度，有机溶剂1
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最终含量不超过2%。
3.3.2药剂处理
在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌培养基定量加人无菌锥形瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加人上述锥形瓶中，充分摇勾。然后等量倒人3个以上直径为9cm的培养皿中，制成相应浓度的含药平板。试验设不含药剂的处理作空白对照，每处理不少于3个重复3.3.3接种
将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上皿盖，置适宜温度的培养箱中培养。4调查
根据空白对照培养Ⅲ中菌的生长情况调查病原菌菌丝生长情况。用卡尺测量菌落直径，单位为毫米（mm）。每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次，取其平均值。5数据统计与分析
5.1计算方法
根据调查结果，按公式（1）（2）计算各处理浓度对供试靶标菌的菌丝生长抑制率，单位为百分率（%），计算结果保留小数点后两位。D=Di-D2
式中：
茵落增长直径：
Di—菌落直径：
Dz菌饼直径。
式中：
菌丝生长抑制率；
Do—空白对照菌落增长直径；
药剂处理菌落增长直径。
5.2统计分析
（2）
根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析，计算各药剂的ECsO、ECo等值及其95%置信限。
进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法或孙云沛法计算混剂的增效系数（SR）或共毒系数（CTC）评价混剂的联合作用类型。Wadley法：根据增效系数SR）来评价药剂混用的增效作用，即SR<0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用,SR>1.5为增效作用。增效系数(SR）按式(3)、式(4)计算：PA+PB
XIPA/A+Pg/B×100
式中：
X混剂的ECso理论值，单位为毫克每升（mg/L)：PA—混剂中A的百分含量，单位为百分率（%）；PB——混剂中B的百分含量,单位为百分率（%）；2
A——混剂中A的ECso值，单位为毫克每升（mg/L）B-
一混剂中B的ECso值，单位为毫克每升（mg/L）。SR=
式中：
SR—混剂的增效系数：
X—混剂ECso理论值，单位为毫克每升（mg/L）：Xz—混剂ECso实测值，单位为毫克每升（mg/L）。NY/T1156.2—2006
孙云沛法：根据共毒系数（CTC）来评价药剂混用的增效作用即CTC80为拮抗作用.80式中：
混剂实测的毒力指数；
标准药剂的ECsp，单位为毫克每升（mg/L）；供试混剂的EC50，单位为毫克每升（mg/L）。M
TTI=TIAXPA+TIBXPB
式中：
混剂的理论毒力指数：
A药剂毒力指数；
-A药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率（%）；B药剂毒力指数；
PB——B药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率（%）。CTC=TI×100
式中：
一共毒系数：
一混剂实测毒力指数；
6结果
混剂理论毒力指数。
根据统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。(5)
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