【商检行业标准(SN)】 进出口食品中伏马毒素B1残留量检测方法 酶联免疫吸附法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1958--2007
进出口食品中伏马毒素B，残留量检测方法酶联免疫吸附法
Screening methodl of furnonisin B, residues in foodsturf forimport and expori-Enzyme linked immunosorbent assay method2007-08-06发布
中华人民共和国
数码防决
国家质量监督检验检疫总局
2008-03-01实施
本标难附录A、附录B和附录C均为资料性附录。本标雅内国家认证认可监督暂理委员会提出并归口。本标超草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、大津科技大学。本标准主要起毕人：郑文杰，王硕、张宏伟、姚霞、魏亚东，刘炬、张燕、张骏。本标难系首饮发布的出入境检验检疫行业标准。TYKAONKAca
SN/T 1958--2007
进出口食品中伏马毒素B1残留量检测方法酶联免疫吸附法
本标谁规定了食品中伙马声素B，残留量的邮联免疫圾附测定方法，SN/T 1958--2007
本标谁适用于玉米、大米、黄米、燕麦、大麦及花牛中伏马毒素B，残留景的筛选检测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过木标罹的孔历丽成为本标准的条款。凡趋注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或餐订版均不适用于本标准，然面，鼓刷根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本风整不鞋明H期的引用义件：其墩新版本适用于本标准。GH/6682分析实验空用水规格和试验楼3测定方法
3.1方法提要
用甲醇/水提取样品中伏马索B，用竞争性酶联免疫吸附法进行检测。3.2试剂和材料
除另有要求外，所有试剂马为拆纯水为GB工出682规定的级水。3.2.1伏马索B，腾联免疫吸附测定试剂盒\（参见附录小3.2.2中醇。
3.2.3磷酸氢二钠(Na2HPO,
3.2.4磷酸二氯钠(NaHPO.H,O)
3.2.5氯化钠。
：20，休积比稽择，于使用时配制3.2.6拾凝剂稀释波：掩蔽剂：囊骏盐级冲液（3.2.7溶液T中喜：掩殿剂稻教液（110
3.2.8伏马毒素标品（英
积比）。
名称;fimronisin B
AS代码：1635-83-0)：纯度人于等于99.5%mg/L甲醇型备液/
3.2.9标准品忙备液：配制成10
20%保存，有效期3个月，
低温保存试剂，放署于究温不要超过4h，使用时，各辫额应达到空湿。3.3仪器和设备
3. 3. 1 粉碎机。
3.3.2天平（精确到0.001 g)。
3.3.3旋祸泥合器。
3.3.4气浴抵床。
3.3.5酵标仪（测定波长150 In）。3. 3. 6洗板机。
3.3.7单道微加样器：20μl，100L，200μl。1）伏马毒索B.酶联免疫吸附定武剂盒是由关津生物芯片技术有限责任公可提供的产品的商品名你，给出这一信息为广方使本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果共他尝效产品具有相的效果，则可使用这些等效产品，
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3.3.8多通道微量加样器：200uT。3.4试样制备
取样品约50混句，均分成两份，装人洁净容器内作为试样，案封，并标明标记。3.5试样保存
HTYKAONKACa
将试样于4℃冷蔽保存。在制样的操作过程巾，应阶止样品受到污染或发生残留物含量的变化。3.6提取
将下米等谷物样品各取25g充分粉碎，从中取样品各5g，加入20ml.甲醇/水（3：1，休积比），报荡萃取15min，静置5min，取部分上清液用掩蔽剂稀释15倍后逊行F.1.ISA检测：3.7酶联免疫法检测
3.7.1标准曲线的制备
用溶液I稀释10mg/L.的伏马持索B核推济液储备液至109g/L，用溶液1对1001g/L的伏码毒素B标准溶液进行1：3梯度稀释，得到一系列不同浓度的伏马毒素B1标准溶液（100/L，33, 3 pg/1., 11. 1 μg/l.,3. 7 μg/1.,1. 2 μg/L,0. 4 μg/L)。3.7.2样品测定
在酵标板中分别加人10,不同浓度的优马毒素B标准溶液和样品特测液。在空自和对照孔分别加人100aL的水。每个标准溶液、样品待测液、空凹和对照孔均做平行。空白孔中加入100L磷酸盐缓冲液。除空白孔外，在每个孔中则加人100ul.的降标记物稀释液。轻拍混匀，用黏胶纸封微孔以防溶滋挥发，室温孵育 60 min弃掉酶标板中的液体,用洗液洗板二次。加入混合好的底物液150qL，轻轻混勾，空温放胃30)min后，每个孔加入50μL的悠止液，轻轻晃动酶标板，10min内在酶标仪上读小每孔450nm吸光值。
3.8空白试验
除不试样外，均按上述测定步骤进行：3. 9 结果的计算
3.9.1计算抑制率值
不同浓度伏率素B，对抗原抗体结合反应的抑制率计算见式(1)：IC =[1 ~A二A2血]×100%
式中：
-伏马毒索B，对抗原抗休结合反应的抑制率，%;不服人伏马卖索B标准波，仅加人标记稀释物和磷酸盐绥冲液，在45011tI1下测得的平均吸光度值：
伏马毒素B，标准液或样效在450nm下的平均吸光度值：不加人醛标记稀释物及伏马毒素R标准液，仅加人水和磷酸盐缓油液·在45Unm下测得的平均吸光度值。
3.9.2绘制标准曲线
以抑制率为纵坐标，伏马萨素B，浓度为横坐标(横坐标取对数刻度)绘制标准曲线。知次试验均应重新绘制标谁曲线，参见附录C。3.9.3结果计算
从标推曲线上读取样液抑制率所对应的伏马毒素B，浓度（c），按式（2)计算试样中的伏乃寿素B残留量：
武中：
X试中伏马奇素5，死留量，单位为微克每T克（ug/kg）：2
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-根据样品孔的抑制牵得试样中伏马毒素B，浓度，单位为微克每升（g/L）：R样品换算系数，其数值为60。
检测低，回收率
4.1检测低限
本方法检谢低限为12g/kgs
4.2回收率
优马谨素B，添加浓度和回收率的实验数据参见附录3。实验结果为阳性应用仪器方法逆行确证，3
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附录A
（资料性附录）
伏马毒素所酶联免疫测定试剂盒KNrKca
本标准酶联免疫测定步骤中使用的试剂盒为天津生物芯片技术有限责任公用产品？，试剂盒包括：a）96孔酶标板：
优马凝素B 酶标记物溶波；
底物液A于4℃探存.使用时需达到室温；底物液B:使用前室温避光保存。使用时,按底物液A底物液为3211(体积比)混合候用：
反拉终止获；
掩蔽剂：于4℃保存；
磷酸盐缓冲液：于4C保存一读历耐落液疯达到密温，用水1：5稀释；洗涤液:使月时,用水 1 ：5稀释。2）给出该信息是为了方便本标准的候用者，并不表示对某一产品的认可，如果其他产品其有同的效果，需经实验评估后使月这些等效产品。
附录B
(资料性附录）
伏马毒素B，添加浓度和平均回收率表 B.1伏马毒案 B,添加浓度和平均回收率添灿浓度/μg/kg）
SN/T·1958-2007
平均回妆率/光
SN/T1958—2007
% /的
(资料性附录）
伏马毒素B.标准曲线
FB:苯度/(n2/mL)
伏马毒素 B 标准曲线
TTKAONKACA-
Foreword
Annex A, B and C of this standard are all infarmative annexes.SN/T1958—2007
This standard was proposed by and is under the charge of Certification and Accrediration Administra-tion of the People's Republic of China.This standard was drafted by Tianjin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Re-public of China. , Tianjin University of Seience and Technologuy.This standard was mainly drafted by Wenjie Zheng, Shuo Wang, Hongwei Zhang. Xia Yao, YadongWei,XuanLiu,YanZhang,JunZhang.This standard is a professional standard for entry-exit inspection and quarantine promulgated for thefirst time.
SN/T1958—2007
Screening method of fumonisin B, residues in foodstuff forimport and export -Enzyme linked immunosorbentassaymethod
1 Scope
This standard specifies the methgu'of tetererirition Ey ELisA 'method of fumonisin B, residues infoodstuff.
This standard is applicable to the screen of fumonisin B, residues,in corn. barley, rice, oat, peanutand sorghum. Positive results should be confisef.ect by another'method.2 Norrnative references
The following standard contain povisions which,thiruugh refercnce in this text, constitute provi- sions af this standard. Parties to agreements 'based on-this-standerd ara encuraged to inveatigatethe possibility of applying the most recent editions orthe strandards indicated below.Ispecification and test methods.GB/T 6682 Water far analytical laoiatory use3Method of inspection
3. 1Principte of determinationFumonisin B, is distilled by methanol'H'o.immLnoreaction.
3. 2 Reagents and materials
s the competitive enzyme-linkedIn this standard, all the chermical reagents should be analytically pure and \water\ is the first-degreewaterasGB/T6682described.
3.2.1 Fumonisin B, detection kitl:(see Annex A))1) Fumunisin B, detection kit is the commercial name which was provided by tre Tianjin Biochip Technalogies Co. , Ltd.This information being given is convenient for the usar of thie standard and is not the confirm of some products' pro-tocol.Other products'protocol shotild be confirmed b:y experiments if any difference8
3.2.2 Methanot.
3NaHPO4-12HO.
3.2. 4NaH, PO. - 2H,0
3.2.5 Nacl.
5D.5% FG-PBS dilute.
3. 2.7 Solution I.
3. 2, 8Fumanisin B, standard.3.2.9Preparcd standard solution:10 pg/mLAll solution must be stored at low t$torage at - 20℃
kf metharnol+
SN/T1958—2007
rature and never be placed at room temperature longer than4 hours;reach room temperature,ketore Lise.3.3 Apparatus and equipment
3.3.1 Muller.
3. 3.2 Balance.
Vortex mixer.
Vibrator.
Microwell system.Www.bzxZ.net
3.3.6Plate-washing machine.
3.3.7Pipettes:20μL.100μL.200μl.3.3.B Multichannel pipette: 200 μL.3. 4 Preparation of test sampleThe combined primary sarnple is reduced to 5oo g, which is blended. homogenized thoroughly, andthen divided into two equal portions. Each portion is placed in a clean container as the test sample,which is sealed and labeled.SV/T 1958—2007
3.5Storageoftestsample
HTTKNIKAca-
The test sample should be stored at 4c. In the course of sampling and sample preparation, precaution must be taken to avoid the contamination or any factors which may cause the chang of residuecontent.
3.6Sample extraction
Samples were finely ground with a laboratary blender and actd 20 mL methanol/H,O(3 : 1, v/v) to5 g dried sample. shaking extraction for 15 min. standing for 5 min, upper clear solution sampleswera diluted 15 fold with o, 5% FG-PBs.3.7ELISAdetermination
3.7.1Manufacture of calibration curveDilute the prepared standard salution with solution I into 100 μg/L, 33. 3 μg/L, t1. 1 μg/L, 3.7 μg/L,1. 2 μg/L, 0. 4 #g/L
3. 7. 2Datection af sarmple
Insert a sufficient amount of microtitre welfs into the microwell holder for all standards and samples to be run in duplicate. Rccord standard and sample positions. add 10o uL of six kinds of prepared fu-monisin B, standard solution and sample solution to separate duplicate wells. Add 100 μL douhle wa-ter as blank.Add 1o0 μL of diluted fumonisin B, enzyme conjugate (used within 8 h) to the bottom ofeach well and atd 100 gL PBs in blank. flap lightly and mix thoroughly. Sealing all wells with adhesivepaper to avoid solutian evaporating, incubate far 6o min at roam temperature. Pour the liquid out ofthe wells and wash the wells three times with PBsT. Add 150 μL of substrate and chramogen to eachwell (Take care the substrate solution in the dark) flap lightly and mix thoroughly and incubate for 30min at room temperature. Add 50 μL af stop solution to each well, flap lightly and mix thoroughly.Measure and record the absorbance value of each wefl solution at 450 nm within 10 min.3.8 Blank test
The operation of the blank test is the same as that described in the mathod of determination butwithout accition of sample.
3, 9 Calculating the resuft and express3.9.1Calcularing inhibition value in percentagesCalculate the inhibition vatue af the combinatian of each fumonisin B, standard and antigen-antibody.the fumonisin B, standard and sample inhibition value are calculated in percentages according to the10
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