【国家标准(GB)】 苹果无病毒母本树和苗木检疫规程

ICS65.020
中华人民共和国国家标准
GB/T 12943--2007
代替（B12943—1991
苹果无病毒母本树和苗木检疫规程Plant quarantine rules for virus-free mother tree and seedling of apple2007-10-16发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01 实施
GB/T12943—2007
本标准息实施之回起代替GB12943—1991苹果无病毒母本树和苗木检疫规程》.本标准与G372943--1991相比主要变化如下：修改了标准类义称、标准结构、部分术语；对苹果无病毒母木园、无病毒苗木繁育圃.报检母本树等逊行广补充规定；苹果尤病毒苗术检测增加「酶联免疫吸附法和本本指示植物温室检测法。本标准的附示A、附录B、附录C、附录D、附录H、附录G、附录H、附录I.附录J和附录K为规范性附录，附录王为资料性附录。
本标雅由中华人民共和国农业部提山，本标准由全国植物检疫标准化技术委员会归口本标准起卓单位：中国农业科学院巢树研究所（兴城）、全国农业技术推广服务中心、辽宁省植保站。本标淮主要起草人：董雅风、张尊平、刘凤之、工福祥、周宗山、杨俊玲、蔡明、吴立蜂、何峻本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB12943—1991。
1范围
苹果无病毒母本树和苗水检疫规程本标准规定了苹果尤病毒母本树和苗本的检疫规程。木标准适用干培骨节果无病毒接穗和黏木的母本树及繁育的无病海苹果苗木。2规范性引用文件
GB/I12943—2007
下列文件中的条款通过本标雅的用前成为本标推的条款。凡是注期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各力研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注H期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB8370--1987苹果苗本产地检疫规程3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
苹果无病毒母本树virus-frec mother tree if apple不带木标雄製定的检疫对象、用于提供苯果品种或营养系砧木繁殖材料的母株。3.2
苹果无病毒苗木virus-free seedling orapple不带本标准见定的检疫对象的苹果苗本。4病毒检疫性有害生物
4. 1苹果缘铍果病 apple green ctinkle disease4.2苹果锈果类病毒applc scar skin virus4.3苹果花叶病毒applemosaicvirus4.4苹果褪绿叶斑病毒applechlororieleafspotvirus4.5苹果茎痘病毒applestempittingvirus4.6苹果茎沟病萨applestcmgroovingvirua5苹果无病毒母本树的检疫
5.1雅备建立苹果无病毒序本园的单位或个人·应向当地植物检捡疫机构申报（申报单见附录A），获得批准后方可建园：
5.2：苹果无病青母本园与普通仁果类、核果类果园和凿谢的距离应大于100m；5.3苹果无病毒母本园应建在5年之内未裁植过果树的地段上，株行距不小于4m×5m，修剪工具专管专用。
5. 4苹果无病毒母本树的病荷检测5. 4. 1舟本厕内所有母本树均应过行病毒检测。5.4.2报检母本树必须品种纯正，生长健壮，不带有GB8701987中规定的检疫对象和择制对象。5.4.3盘本树的病毒检测由省毁以上植物检疫机构指定的检测单位行，5.4.4取样时间、部位和数量根据不同检测方法的只体要求确定。各样品绑练上有母本树编号的标签GB/T12943--2007
后·送检。
5.4.5病毒检测方法
5.4.5.1用间症状观察法
苹果绿皱果病、苹果锈果类病毒和苹果花叶病毒在节果栽培品种上有明显症状（见附录B)，可点接在四间进行观察。
5.4.5.2未求指示植物检测法
苹果褪缘叶斑病毒、苹果笨痘病毒、果茎沟病瓣、苹果花叫病毒、苹果锈果类病蒜等5种病毒及类病毒可在间或温弃内采用木本指示植物检测法进行检测，见附录（和附录D。5种病而及类病毒在木本指示植物上的主要症状表现见附录E5.4.5.3酶联免疫吸附法
能获得抗而清的萃果病毒采用A蛋密悔联觉双吸附法（PAS-FA)或双抗灾心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA)逊行检测，具体作步綫参见附录F或试剂盒崔州说明。菌票G)。当地植物检疫机构根据革巢无病母本树检测报对经检5.5检测单位出具拾测批
测不带本标谁规是的6上
树检疫度警格证附录H）
厨象的品
5.6母本树每5年复熬
6苹果无病毒苗木
苹果无病毒不繁者须向兰
果无病毒苗木的繁
6.2古围周因500国内不应找
6.3繁育常果无靓
素木的接穗位
6.4繁仔苹果无
重木的破木
应随有无病毒母
证复印件
6.5嫁接按苹果无病露母亦树编生6.6苹果尤病毒鼠病声检测
6.6.1日间调查
苹果无病毒苗木
录J。如发现 GB 837离
6.6.2抽检
间中植
苹果死
，即撤微其无病群丹本树资格。手机构握
甜录1）获得批程后，方可开展苹果无病母本格证复印件，
营蓉蔡砧
无新群营养系站木
1进行间调查，记录项口见附
6.6.2.1分品种进行抽税
最髓机抽样方达。以666.6m1拍检株为塞数.每增加6j6.6m，增检5株，不足666.6㎡的孩计。6.6.2.2病声测方法可采用酶联免疫设渐法（参见附录E或.本指示物温室检测法（见附录ID)，6.6.3一口发现某株苗术带有求标摊规定的检疫对象，则来源于同不发给无病毒苗木合格证
母本树的所有嫁按禹或经培苗均6.6.4四间调查和抽检均合格的荫木而当地植物检疫机构签发求果无病毒苗木检按合格证（见附录K），作按苗木数量发给苹果无痣苗木标等。标签内容包括繁驾者，品种、站木类型、签发单位、签发期：
7调运检疫
向外地调运的苹果儿病每母本树和苗不，需当地植物检疫机构检疫，不带不标准及G1383701987现定的检疫对象者·方叫谢运.1)666.6m=1宝
母本园
母本树
申报单位(或个人)
雨积/hn
问谢尽树裁培情沉
数量/
树龄/年
附录A
（规范性附录）
苹果无病毒母本园建园申报单
表A.1苹果无病毒母本园建园申报单度机构（等）：
植物验感机构静抵意见
注：本申报单www.bzxz.net
.份送检测
GB/T 12943—2007
植检字第
CB/T 12943-—2007
附录B
(规范性附录）
苹果绿皱果病、苹果锈果类病毒和苹果花叶病毒在苹果栽培品种上的主要症状H.t
苹果绿皱果病
幼果表面出现水渍状斑块，逐渐发展为凹凸不乎畸形果，病部果皮遂渐不栓化，呈铁锈色，B.2苹果锈果类病毒
H.2. 1 锈果型症状
先从幼果果顶部出现淡绿色水溃状斑块，而后向果梗扩展成本释化锈斑与纵纹、B.2.2花脸型症状
病果在着色前无明显变化，着色后果面表现红绿相间的花脸状。B.2.3锈果-花脸复合型症状
呈现既有锈斑义有花脸的复合症状。H,3苹果花叶病毒
B.3、1斑驳型症状
从小叶脉开始发生鲜黄色病斑，病斑形状不规则、大小不一B.3.2环斑型症状
叶片上产生圆形、圆形或近圆形贯色环差，或近似环状的纹B. 3. 3 花叶型症状
病斑不规则，有较大的深绿与浅缘相间色变，边缘不清晰。B.3.4条斑型症状
时片沿叶咏失绿黄化，并蔓延至附近的叶肉组织。B.3.5镶边型症状
叶片边缘发生黄化，形成很窄的黄色镶边。附录C
(规范性附录）
木本指示植物田间检测法
GB/T12943—2007
C.1春季，挑选前-年播种的生长整齐一致的砧木实生芭，定楂于检测渊内，行50株100株，株行距不小丁:15 cm×60 cI1。
C.28月中旬从待检株上剪取发育的新梢作为待检接稳，其饱满芽数量不少于20个，并刘待检株逃行编导和记录，写好标牌，绑缚在待检按穗上。C.3从指示植物母本树上剪取当年生枝条，作为检测接穗。C4采用二重芽接法，先把待检接穗的芽片嫁接在站基部，每嫁接1个持检来。每个待检样品在同一行木上重复嫁接1株5株，挂好标牌。C.5别取指求植物的芽片嫁接在待检劳的上方，两芽相1.0cm-2.0cm，每行帖不嫁接同一种指示植物。
C.6第一年苗木发穿前，在指示植物接芽的上方约1.0cm~1.=cm处剪涂站1。剪黏后，及时除荫，保证待检芽和措示植物芽剪发，并用摘心的方法控制待检芽的生长。同时加强肥水管理和病虫害防治。C.7从5月中下有开始至9月末，定期观察指示植物的症状表现：作好观察记录，根据指示植物的症状表现明确带肯状况。
附录D
（规范性附录）
木本指示植物温室检测法
D.11春取工年播种的破木种了实生，裁植于直径151、高2cm的花流中作为检测用砧不。D.2第二年2片上，将花盆移人温室内，温空温度白关20℃～28℃，夜间9℃15℃，待础木开始发后，先将待检穿触穿接在站木基部，再用切接法代该芽上办嫁接指示植物接穗（带2个-3个饱满芽）。每一待检样本与指示植物组合嫁接4盆，各盆均按编号挂好标签：D.3嫁接后，温室温度控制在18℃～26℃.同时注意断治虫和控制荫掌生长，得指示植物发牙长出嫩叶片后，每周观察一饮，记载症状表现。GB/T 12943---2007
病毒及类病
附录E
（规范性附录）
5种苹果病毒及类病毒在水本指示植物上的主要症状表E.15种苹果病毒及类病毒在木本指示植物上的主要症状指示枯物
苹果娠绿叶斑病带
苯果茎症病龄
苹果鉴沟病毒
果花叶病毒
艾果锈术类病毒
苏俄举果【R E2740-7A）
光辉(Redinta
弗亚小市思
ti.otd la.mhorne)
主要症状
褪续斑植谜矮化，月能叶
片爱卷，桃毯化
本质部产生纵向叫陷繁物：有的症案像接门用田肿胀，接今部内有深竭琶赫然斑；在爆室鉴定中.叶片有时还产十让斑或环状玩，并扭睡恋形
叶片[产生黄斑,拓叶脉密现条活卷、变
，往律致叶片脱熔，并在茎
溶液配制(均用蒸馏水)
附录F
(资料性附录）
酶联免疫吸附法（ELISA)
F.1.1包被缓冲液(pH9.6100mL)
F. 1, 2冲洗缓冲液(PRST
N,HIPO +12H,0
Nal,PO. .2H.O
Twcen-20
F.1.3抗原提取缓鼎额
PBST+2%聚囊喀烧醇
F. 1. 4底物缓冲凝(pH.0
柠像酸
Na,HPO,
底物（用
10mL底物缘J4mg
F. 1.终止液(2是 H,SO.
36%浓硫
A蛋白酶联：
包被A蛋苣
100μL.28保温2h
F.2.2加第抗血清：
附法（PAS
被綫冲
1O0ormL
EAs02 g
GB/T12943—2007
度为1 双g/m嘎~5μg/ml..每孔
mins mi
爆温和解洗方法同F.2.1。
PT稀释至工作限度，每孔加10%
一年生休眠枝条内皮层，每克样此拓人三1抗原提取液，研磨后F.2.3加抗原样品：取
4.0001/nin离心5min，双清加louuL，每样品孔，每个微孔板需同时设阳性、阴性和空白。2.1第一次冲洗液不得签呢。
对照，4℃冰箱过夜，冲洗方法降下F.2.4加第一抗血清：抗血清用P了稀释率工作浓度，每孔加190L，保温和冲洗力法同I.2.1F.2.5 加酶标A盐户:商售辣根过氧化物标A蛋口用FBT稀释至T作浓度,每孔加100 μL,保温和计方法同上.2,1.
F.2.6加底物：孔Ⅲ100μl.黑陪中室温放置15min-30minF,2. 7终[l:反应;每孔加25 μ1 终止液，F.2.8结果判断：以举凹对照孔调签，测定反应液在<92nm波长处吸光值，以待检样品2孔平均吸光值/阴性对照平均吸光值2视为阳性.F.3双抗卖心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA)F.3.1加抗血清：病毒特异抗血清1gG用包被缓冲液稀释至工作涨度，每孔加100uL，28℃保温2h后,用 PI3ST 洗板 3次-~4 次,每次静置 3 min~-5 min:7
GH/T 12943—2007
F.3.2加抗原样品：方法尚F.2.3。F.3.3加酶标抗体：将辣根过氧化物酶标特异抗血消JgC（H尺PTgG)用PBST翻释至工作浓度，孔加100L保温，洗板同F.3.1.
F.3.4加底物：孔100μL.黑暗中静置15min~30min。F.3.5终止反应：每孔加25ul.2mol/L硫酸。结果判断:方法同F.2. 8。
送检单位(或个人)
再本树
樟测方法
检结果
附录G
（规范性附录）
苹果无病毒母本树检测报告
苹果无病毒母本树检测报告
检测单位（签）
注：本报告一试三份：检测单位、主管检疫机构和送检者各一份。GB/T12943--2007
报告编号：
送检时间
GB/T12943—2007
经检测·该母树
寺果然沟萄毒，为
附录Ⅱ
（规范性附录）
苹果无病毒母本树检疫合格证
表II.1苹果无病要母本树检疫合格证苹宋绿皱
鼎无病游母
注：本含格证
,第一联交
酵柴类病
江书编号
，减果腿叶凝痛等，苹基粒病和晟液机精（签率
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