【国家标准(GB)】 红曲类产品中桔青霉素的测定

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.222—2008
红曲类产品中桔青霉素的测定
Determination of citrinin in Monascus products2008-12-03发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、江南人学。本标主要起草人：李凤琴、许赣荣、李玉伟、陈蕴，http：//foodmate.netGB/T 5009.222—2008
1范围
红曲类产品中桔青霉素的测定
本标准规定了红曲类产品中桔青霉素的测定方法，GB/T 5009.222—2008
本标准适用丁红曲米、红曲红（态、液态）、红曲发酵液和用红曲菌生产的保健食品中青霉素的测定。
本标准对液态样品中桔育霉素的定量限为50μg/L，对固态样品中桔青露素的定晟限为1mg/kg。2原理
液态红曲类样品经乙醇提取、离心.过滤后经高效液相色谱仪(HPLC)分析；固态红曲类样品经中苯-乙酸乙酯-甲酸提取、超声波萃取,离心、过滤后经 HPLC分析,外标法定量，3试剂
除非另有规定，本标摊中所用试剂均为分析纯。桔青霉素(Ci;H1O,)标准品：纯度>99%。3.1
3.2 乙(CH,CN):色谱纯。
磷酸(HPO.）：色谱纯。
中醇(CH,OH)：色谱纯
3.5 甲苯(C,H,CH,)。
乙酸乙酯(C, HO)。
甲酸(CH2O,)。
超纯水(H.0)：电阻率≥18.3Mn/cm3.8
无水乙醇(C,HO)：色谱纯。
3.10复合苯取剂（TEF)：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（71311).配制方法将7份体积的中苯（3.5）、3份体积乙酸乙酷（3.6)和1份体积的中酸(3.)混合而成。3.11桔青霉素标准溶液：准确称取 0.005 0g的桔青霉素标准品(3.1)于100 mI.容量瓶中,用甲醇溶解并定容，制成50mg/l.的桔青露素标准储备液。取一定量的储备液用甲醇稀释10倍，制成5mg/L的标准工作液。储备液和工作液密封后4℃冰箱避光保存，工作液现用现配。工作液从冰箱取出后应于室温下至少放置10min，涡旋混匀后方可使用。将标准储备液用甲醇系列稀释后，配成质量浓度为0.1mg/L.0.25mg/L、lmg/1.、5mg/L、10mg/L的标准工作溶液用于制作标推曲线。4仪器和设备
配有碳光检激器的高效相谱系统4.2
超声波细胞破碎仪。
4.3电子天平（感量0.0001g）。4.4 pH计(精度 0.01)。
4.5匀浆器。此内容来自标准下载网
4.6离心机。
旋转蒸发仪。
微孔有机滤膜（孔径0.45 μm），GB/T 5009.222—2008
4.9数显恒温水浴锅（温度精度土1℃）。4.10涡旋混勾器。
4.11磁力搅拌器。
5分析步
5.1样品提取
5.1.1液态红曲样品
将带有菌丝体的液态发酵红曲样品勾浆后用吸量管吸取10mL（液态红曲红样品直接取样10ml),置于50 mI.具塞试替中，加入20ml.无水乙醇，60℃水浴热1h（期间不断振摇）冷却至室温后转入塑料离心管中,3 000 r/min离心 15 min，上清液经 0. 45 μm滤膜过滤后进行 IIPLC分析5.1.2固态红曲制品
用电子天平（4.3)谁确称取一定量固态红曲样品（色素用红也米为2g，用红曲南生产的保健食品为3 g,酿酒用曲为 3 g)于50 ml.具塞比色管中,加人 20 rmL TEF溶液（3.10),超声提取 10 min(强度40%工作5，间隔5s）,30001/min离心20min，上清液转人50ml具塞试管中,残渣用15ml.TEF溶液（3.10）同上述步骤再提取两次，合并=次提收上清液于50mL其塞比色管中，40℃真空浓缩（4.7）至于后加人30mL甲醇溶解，经微孔有机滤膜(4.8)过滤后进行HPLC分析。推确称取1g粉状红曲红或红曲黄色素样晶，在磁力搅拌下缓缓加到盛有20mLTEF溶液（3.10）的烧杯中，继续搅拌30min后，3(00r/min离心20mi，以下按固态红曲样品间样的方法自“上清液转人50 mL具案试管中\起，依法操作。5.2测定
5.2.1液相色谱分析条件
色谱柱:Cs色谱柱(150 mmX4. 6 mm,粒度 5 μm)：柱温:28 ℃ :
流动相：乙腈（3.2)十水（3.8）一35+65，水用色谱纯磷酸（3.3)调pH至2.5；流速:l.0 tnl/min;
检测器：荧光检测器，激发波长331nm，发射波长500nm进样最;20 μL。
5.2.2色谱分析
分别将20μL不质量浓度（0.1mg/L0.25mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L）的桔青霉素标准溶液（3.11)及制备后的样品溶液（5.1)注人液相色谱仪中，以保留时间定性，以桔青需案质量液度与相对应的峰面积绘制二.作曲线，获得线性回归方程及相关系数，以此计算样品中的楷青霉素含量。由下HPILC分析中采用了荧光检测器，样品中的杂质对桔肯霉素的出峰基本尤十扰，因此一般情况下尤需确证，必要时用液相色谱-质谱进行确证，条件如下：a）毛细臂电压：3,78kV;
h）锥孔电压：30V;
c）射频透镜电压：0.5V;
d）苯取锥孔电压：5V；
e）离了源温度;100℃；
）脱溶剂气温度：250℃；
脱溶剂气流量：320L/h；
h）电子倍增电压：650V；
i）相对分了质量范围：100～500。桔青霉索的液相色谱图参见附录A，质谱图参见附录13。2
6结果计算
固态样品中桔青霉素的含量按式(1)计算：EXV
式中：
样品中桔青霉素含量，单位为毫克每下克（mg/kg)；仪器检测的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；V.最终定容体积，单位为毫升（mL），样品质量，单位为克（g）。
腋态红曲样品中桔青霉素的浓度按式(2)计算：6.2
式中：
液态样品中桔青露素浓度，单位为毫克每升（mg/1.)；仪器检测的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)样品定容体积，单位为毫升（mL）；移取的样品体积，单位为毫升（InL）。计算结果保留两位有效数字。
7精密度
GB/T 5009.222-2008
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平值的10%。3
品成伴网httn：
GB/T 5009.222—2008
附录A
（资料性附录）
桔青舜素的液相色谱图
A. 1 枯背霉素标准液相色谱图见图 A. 1。120. 00
注：标雅液浓度为2. 5 ng/L,注射10pL,机当于25ng，保时间约为10.00 rnit1。图A,1桔青霉素标准液相色谱图
红曲样品中桔青霉素液相色谱图见图A.2。160. 00 -
140. 00 -
100. 00 -
红曲样品中桔青霉素液相色谱图图 A.2
ht
B. 1 枯青霉素标准质谱图见图 B. 1。100-
附录B
(资料性附录）
桔青霉素质谱阁
2A4 268.5
GB/T 5009.222-—2008
160180200 220 240260280300920 340 360380400420注；桔青霍素相对分子质射为250。图 B. 1 桔青霉素标准质谱图
红曲样品中桔青鑫素质谱图见图B.2。100-
249.5 267.5
20.5268.5
160180 200 220240260280300 320'340860380 400420m/0+
红曲样品中桔青霉素质谱图
http:/
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红曲类产品中桔青霉素的测定
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