【商检行业标准(SN)】 鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法 高效液相色谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1965—2007
鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法
高效液相色谱法
Determination of sulfonamides residues in ceis and eel products-High performance liguid chromatographic method2007-08-06发布
中华人民共利国
、羧鹤防份
润家质量蓝督检验检疫总局
2008-03-01实施
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可督管理委员会提山并归口。本标准由中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。SN/T19652007
本标准主要起卓人：林海丹、林峰、谢守新、仲怀宁、吴映璇、黄华军、孙良娟、李红权。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。丨范围
鳗鱼及其制品中磺胺类药物残留量测定方法高效液相色谱法
SN/T 1965—2007
本标崔规定了鳗敏及其制品中磺胺密啶、横胺甲基密啶、磺胺二甲基噻啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间中缸嘧啶.磺胺问二平氧嘧啶、磺胺唑晰残创量检验的制样和商效液机色谱测是力法。本标准适用于懿血和烤鲍巾碟胺嘧啶、磁胺甲基嘧晓、磺胺二中基嘧啶、磁胺对甲氧嘧啶、磺胺问甲氧嘧啶、磺胺闻二甲氧嘧啶、磺胺喹嗯崃戏留括的检测，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而明为本标让的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括划误的内容）或修订版均不适用于木标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的敌新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版在适用于今标准。GB/T6682分析实验室用水规格利试验仿法3样品的制备与保存
取鳗毁血样品约500.烤蟹样品去除表面酱汁后联约500g，用肉类组织粉碎机绞碎，装入沿净容器作为试样，密封，并标明标记，制样的操作过中，应防止样品污染或发生残留物含的变化。试样置于一18℃以下保存。
4方法提要
暖鱼和烤鳗中磺胺类约物二氧中烷摄取提最液浓缩后，泄用乙睛和E%乙酸水溶液溶解，经正己烷液液分配脱脂，烤鳗样品需经阳离了交固相萃取柱静化，配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定、外称法定量。
5试剂和材料
除另有规定外.所行试剂均为分析纯，水为B/T6682规定的一级水。5.1二短甲烷：商效液拍色谱纯。5.2中醇：高效液相色谱纯。
5.3乙睛：效微相色谱纯。
5.4正包烷。
5.5球乙酸。
5.6盐酸。
5.72酸偿，
5.8乙脂饱和正己婉：正己炕与足够的乙腩泥仓，至饱和，容器底部清晰可见一层乙睛层。5.9乙酸水溶液：1%（体积分数），双冰乙酸（4.)10mL，用水定容至11.。过0.45μm水相意膜备用。5.10乙酸水游液：5%（体积分数），收冰乙酸50mL，用水定容至100mL乙腩十水（11.体积比），取50ml乙睛，加人50ml.水，混勾。5.11
盐水溶液：0.1mol/L，取9mL浓盐酸，加人适量的水，定容至1L5. 12
SN/T 1965-~2007
5.13乙酸铵水溶液，5110l/1.，称瑕38.5g的乙酸铵，用水落解.定容至100mL。5.14洗脱液：甲醇+乙脂+5mol/L乙酸铵水溶液（47.5+47.5+5，体积分数），取47.5ml.甲醇，47. 5 mL乙腈和5 ml. 5 Inol/l.乙酸铵水搭凝混匀备用。5.15OasisMCx相萃取柱（或相当者）:150mg/6ml使用前用5mL中醇活化5mL0.1mol./L盐酸水济液平衡。
5. 16无水硫酸钠,经 650℃灼烧 4 b,置于干燥器内斧而。5.17滤膜：水相、有机相,0, 15粒m。5.18 脱脂棉。
5.19标准物质：磺胺瞻啶纯度大于等于99%（CASNo，68-35-9），磺胺甲基嘧啶纯度大下等于99%（CASNo，127.797），磺胺二甲嘧啶纯度大于等于99%（CASNo，57-68-1)，磺胺对甲氧嘧啶纯度大于等于99%（CASNo651-06-9），磺胺间甲氧噻纯度大王筑于99%（CASNo，1220-83-3），磁胺间二甲氧嘧啶纯度火于等于99%（然SN22.11-2)，磺滋峰隧咻纯库大于等于93%（CASNo,59-40-5)。5.20硕胺类标准储备溶液100在，准磷陈胶造基的逐种磺胺标准物质，用甲醇分别配成100mg/1的标准循备落液，该图滋保在保存期器不月！5.21磺胺混合标准工作溶液：根据每种磺胺必灵敏度和仪器线性范围，用乙睛十水（5.11)配战不同浓度的混合标准工作溶液。
6仪器和设备
6.1液相色谱仪：配有紫外检翻器6.2分析天平。
6.3肉类组织粉碎机。
6.4勾浆机。
6.5 离心机:3 500 r/mim。
减迁旋转蒸发仪。
超声液水浴。
6.8旋涡振荡器。
6.9真空录，
固相萃取装置。
棕色裂形瓶：100 mL
棕色鸡心瓶:25 mL.
6. 13玻璃离心管:50 πL。
测定步螺
7.1提取
称取5g（植确到0.01g）勺浆样品和5g无水硫酸钠（5.16）于50mL玻璃离心管中，加入20ml二氯甲烷，匀质提取30s，以3500r/min离心5min，上清液经漏斗（用脱脂棉垫底，加1名无水硫酸钠）过滤到100ml.棕色梨形瓶，另取一只50mL玻璃离心管划入20ml，二氯甲烷，洗涤句浆刀头105，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒搅动残渣，超声波振荡提取5min，以3500r/min离心5min，上清液经上述斗过滤合并至 100 mL棕色梨形瓶中，38℃减压旋转蒸发至干。7.2净化
7.2.1鳗鱼
棕色梨形瓶中的残渣用750μ1.乙肺溶解，旋涡握荡混勾，超声10s，再加人750u1.5%乙酸水裕液，旋祸振荡混匀，将样晶游液转移至玻璃试管中，加人3mL乙饱和正已烷（5.8)旋涡振荡混命30s，2
SN/T 1965-—2007
以3500r/min离心5min，弃掉上层的正已烷，原玻璃试管中再加3mL乙膜饱和正已烷旋涡荡泥合30s，以3500z/min离心5min，弃掉上层的正已烷，下层过0.15μn有机相滤膜后供液相色谱测定。7.2.2烤鳗
棕色架形瓶中的残渣用1.50nl.乙溶解，旋涡振荡混匀，超卢10s，再加人1.50ml.5%乙酸水溶液溶解，旋涡振荡混勾，将样品落液转移至玻璃试管中，加人3mL.乙睛饱和正已烷旋涡振荡混合30 s,以 3 5U0 r/min 离心5 min,弃掉,F层的正亡烷,原坡璃试管中再加 3 ml,乙肺饱和正已烷旋涡振荡混合30s,以3500z/nin离心51min,取下层1.50nL加5mL0.1mol/L盐酸水溶液，过阳离了交换固相举取柱(5.15),控制流速小于0.4ml./min依次用2ml.0.1mnl/1.盐酸水溶液、2ml.甲醇淋洗，12mL艺睛+甲醇+5mol/1.乙酸铵水液液（5.14)洗脱，抢制洗脱液流逆小于0.6mL/min，收集洗脱液开转移到 25 mL 棕色鸡心瓶,38℃减压旋转蒸发近干,用乙膊十水(G.1T)定穿至 1,00 切L,过0.45μm有机相滤膜后供液相色谱测定7.3测定
7. 3. 1测定液相色谱条件
7.3.1. 1色谱糕：C柱,5mm添mmx4fmm内径)7.3.1.2流动相
7. 3. 1.2. 1鳗血测定流动剂
A为甲,H为1为乙酸水游液·霞洗服程疗显表1表1流动相为甲醇-1断艺酸水溶液时的搓度洗脱程序时间/min
7.3.1.2.2烤鳗测定流动相
A为乙腈.B为1%乙酸水
向/min
7.3.1.3流速：1.0 mL/min，
7.3.1.4检测波长：265 nm
7.3.1.5柱温：35℃。
7.3. 1. 6进样垒:30 μL。
7. 3. 2色谱测定
液，邦度洗脱理疗见表2，
魔动相为乙腾-1%艺轻水溶波时的梯度洗脱程序Ay%
根据样液中胺类药物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液，标准工作溶液和待测样液中磺胺类药物的响应值均应在仪器线性范围内：对标准工作溶液和样液等体积奏插逆样测定。在上述色3
SN/T 1965—2007
谱条件下，七种磺胺的参考保留时间见表3和表4，标催物质色谱图见附录A中的图A，1和图A.2.表3流动相为甲醇-1%乙酸水溶液时七种磺胺的参考保留时间药物名称
磺胺嘧啶
碘胺二甲苯喹啶
磺腰对甲氧嘧啶
磺峨喹咯啦
保留时间/nin
药物名称
磺胺甲坚察啶
瓒胺甲氧嘧啶
磺胺间二氧嘧啶
表4流动相为乙腈-1%乙酸水溶液时七种磺胺的参考保留时间药韧名称
胺密啶
磺酸二甲基嘧啶
磺胺对甲氧嘧啶
磺胶啥腰咪
7.3.3空白试验
保解时问：tnin
除不加样品外，均按上述测定步骤进行。8结果计算和表述
药物名称
磺胺甲基嗪啶
胺间印氧础嚏
磺胺间二甲氧嘧啶
保留时问/min
保留时问/min
用色谱数据处现机或按式(1)计算试样中磺胺类药物的残留含量，计算结果打除穿俏。X--AxexV
武中：
X一一试样中磺胺类药物含量，单位为毫克每下克(nag/kg）样液中磺胺类药物峰面积：
A---标雅工作液中碟胺峰面积；一标准工作液中磺胺类药物的浓度，单位为毫克每升（mg/I.)，V一样液最终定容体积，单位为毫开(mL)：2
一最终样滋代表的试样质量，单位为克(g)。9测定低限,回收率
9.1测定低限
（1）
本方法中测定毁鱼中磺胺辫啶、磺胺甲基啶，磺胺二用指嘧啶、碳胺对甲氧嘧啶、磺胺间中氧嘧啶,磺胺叫中氧嘧啶和磺胺喹恶啉的测定低限均为0.,010 tg/kg。测定烤颤巾磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二基嘧啶胺对中氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺竖哗的测定低限均为 0. 020 mg/kg.
9.2回收率
毁鱼中磺胺啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嗪啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间中氧嘧啶、磺胺间二甲薇嘧噬和磺胺唑嗯晰的游浓度及问收率的实验数扰见表5。烤鳗中磺胺嘧啶、磁胺甲基密啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺对中氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶和磺胺喹嘎啉的添加浓度及回收率的实验数据见表6。
药物名称
酶腰嘧啶
磺胺甲基喀啶
磺胺二甲基嘧啶
磺鞍对甲氧难
磺胺间氧密啶
磁胺间二甲氧嘧啶
磺胺唑恶啡
表5鳗鱼中七种磺胺回收率的实验数据浓加浓度/（mg/kg）
0,c50 0
0, 150
SN/T 1965—2007
回收率/%
86. 5~94. 4
88. 4 -~97, 8
85. 6---102
90.7--100
82,0--101
87. 6-- 97. 6
88.6--105
84.9--103
93. R~-11G
82. 5-- 107
85.0-~98.0
90. 4-- 1c3
96.7~-105
01. 7.~104
85,8-98.8
85, [--102
88. 7~98.7
88. 0~102
92. 8~102
85. 0~-104
93. 3--103
84. 2--93, 2
80.2~-93.2
89. 3--97. 3
SN/T 1965—2007
药物名称
磺胺瑶
磺胶基密啶
磺胺甲苯嘧啶
磺肢对甲氧嘧啶
磁胺间甲氧瑶啶
磺胺问二甲氧嘧啶
碘嘻呕咪
表6烤鳗中七种磺胺回收率的实验数据添加瘀度/(mg/kg）
5,02n 0
0:0236
回收率/%
88. 1 --97. 5
91.2~~97.8
94. 4--98. 7
82. 5 ~ 95. 5
83. 0~-98, 8
91. 5~99, 0
94, 5 -- 95. 5
80.3~98.8
86.9-99.1
85. 5 -~ 96. 5
80.1--98. 4
95. 9 -98. 9
82.5-~95.0
81. 6~99. 8
81. 3--99.0
80. 5-~97. 0
80. 6-98. 0
86. 6~96. 5
83, 0-- 06. 5
81,5~~94.0
82, 5-- 93. 4
SD——磺胺嘧啶;
磺胺甲啮啶
-磺胺对甲氧嘧啶F
磺胺二甲基嘧啶
磺胺匝氧嘧斑;
磺胺间二甲氧嘧啶，
胺喹感碟。
ST)——磺胺嘧啶;
豌胺甲嘧啶1
附录A
（资料性附）
标准物质的液相色谱图
价00-
FMinuteg
SN/T1965-2007
流动相为甲醇-1%乙酸水溶液耐磺磁粪标准物质的液相色谱图5.a0
磺胺对甲氧嘧啶，
磺胺二甲基嘧啶，
胺甲斑嘧啶！
磺胺问二甲睾嘧啶：
璞胺噬唔咪。免费标准下载网bzxz
Minutes
流动相为乙睛-1%乙酸水溶液时磺胺类标准物质的液相色谱图图A.2
SN/T1965-2007
Foreword
Annex A of this standard was an informative annex.This standard was proposed by and was under the charged of National Regulatory Cammission forCertification and Accreditation.This standard was drafted by Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China.
This standard was mainly drafted by Lin Haidan, Lin Feng, Xie Shouxin,Zhong Huaining. Wu Yingxu-an, Huang Huajun, Sun Liangjuan and Li Hongquan,This standard is ar Inspection and Quarantine professional standard promulgated for the first time.90
SN/T 1965—2007
Determination of sulfonamides residues in eels andeel products---High performance liguidchromatographic method
The standard specifies the methad of sample preparatian and determtnation of sulfadiazine, suifamer-azine, sulfadimidine, sulfameter, sulfamonomethoxine. sulfadimethoxine and sulfaquinoxaline in eelsand eel products by high performance liquid chromatographic method.This standard is applicable for the determination of sulfadiazine. suifamerazine, sulfadimidine, sulfa-meter, suifamonomethoxine,sulfadimethoxine and sulfaguinoxaline in eels and roasted eels.2Normative reference
The following normative docurments contain provisions which,through reference in this text,consti-tute provisions of this standard. For dated references,subsequent amendments to.or revisions of,any of these publications do not apply. However parties to agreements based on this standard are en-couraged to investigate the possibility ot applying the most recent editions of rhe normative docu-ments indicated below. For undated references, the latest edition of the normative document referedto applies.
GB/T 6682Water foranalytical laboratory use--Specification and test methods,3 Sample preparation
3.1Preparation and staragaof testsampleAbout 5oD g representative samples should be taken from all samples, for roasted eels, soy sauceshould be scratched off the surface of the sample. Then the sample is grinded and blerded by a tissueblender to produce homogenous samples,and put in suitable clean containers.After being sealed andfabeled,the samples should be stored at below - 18c. Certain measures should be taken to preventcontamination of the samples or decomposition of the residues during the sample preparation proce-dure.
SN/T1965-2007
4Principle
The sulfonamides residues in eels and roasted eels are extracted with dichloromethane.The dichlo-romethane is evaporated todryness.The residues are dissolveed in acetonitrile-5% acetate acid andpartitioned with n-hexsne to remove lipids.For roasted eels,folfowed by a clean step on a cation ex-change SPE column. The extract is analyzed by HPLC with UV detection,and quantified by externalstandard method.
5Regents and materials
Unless specified.all regents used skould be of analyticat grade+andprescribed by GB/T 6682.
5. 1 Dichloromathane: HPLC grade.5.2 Methanol, HPLC grade.
Acetonitrile: HPLC grade.
n-Hexane.
5. 5Acetic acid.
5.6 Hydrachlor'ic acid.
Ammonium acetate,
rater is the first grade water5.8n-hexanesaturated withacetonitrile:Mixn-hexanauithsutfficient acetonitrile so that,uponsaturation,a residual acetonitrile layeris, discernabfe on the bottom of the container.5.9Acetic acid.1% solution in water:Add 10 ml of acetic acid to a1L volkumetric flask,dilute tovolurme with water and mix.to homogeneity.Filter the salution far use by O. 45 μm aqueous filter.5. 10 Acetic acid,5% solution in water; Add 5.0 mL of acetic acid to a 100 ml volumetric flask,di-lute to vofume with water and mix to homogeneity5.11Acetonitrile,50% solution in water:Add50mL acetanitrile to a 100 mL volumetric flask,di-futetovolumewithwaterandmixtohomogeneity.5, 12 Hydrochloric acid,0. 1 mol/L salution in water, Measure 9 mL HCL,add an adequate amount of10
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