【农业行业标准(NY)】 红江橙苗木繁育规程

JCS 65.020
中华人民共和国农业行业标准
NY/T795—2004
红江橙苗木繁育规程
Regulation for propagation of hongjiangcheng orange trees2004-04-16发布
中华人民共和国农业部
2004-06-01实施
本标准的附录A、附录B、附录C.附录D附录E、附录F为规范性附录本标准正中华人民共和压农业部提出本标准起节曾位：广东省湛江农垦局：本松逛安起草人:陈国璇、苏智伟、曾绍麟。NY/T 795
1范围
红江橙苗木育规程
NY/F 795—2004
本标准规定「红江橙荫木繁育的术语和定义、无病毒苗术繁有体系、九病毒原种的培芹与保存、无病毒母本园和无病毒苗木繁育技术规程.本标准适用丁各省、白治区、直辖市红汀江橙苗木产地及栽培区2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而战为在标准的条款：凡是注且期的用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版不，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准：（B5040—1985柑橘店木产地检胺规程（B9659—1988：柑嫁按苗分级及检验3术语和定义
下列术语和定义适用十本标滩：3.1
无病毒苗diseases freetrees
无病毒苗不骨黄病,衰退病碎叶病、裂皮病。3.2
无病毒苗水繁育体系diseases free nursery tree propagating syst.em经农业部或省、白治区、直辖市农业行政主管部门核准，士完成无病苗木生产各环节任务的不同单位组成的整体。包括原种保存圃、无病毒母本园及无病等苗木繁育角一个环节3.3
无病毒原种discasesfreeprimaryplant红江橙优良株系、经过Ⅲ间选拔、脱毒处理、直接引进检测后，碗认不带指定病害的原始植株3.4
无病毒母本园diseases free mother hlock采白病毒原种保存厕的接穗所建立的红江橙采穗同和木采种3.5
无病霉苗木攀育围diseusesTreeretprupagatingnursery使用无病毒母本园提供的接穗和站木种子或经脱毒处班的站木种子所建立的红江橙站圃.4无病毒苗木繁育体系
4.1无病毒红江橙原种保存围
4.1.1无病帮红汇橙原种保存血承扣儿病毒原种的筛选，脱毒培育、保仁的任务，并尚无病毒母本园提供无病再红江橙接穗，协助母本单位建立无病毒红纠江橙采穗逝和码木种园。4.1.2无病幕原种保存由农业部确认：4.2无病毒母本园
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4.2.1无摘毒母本园色括疯毒红江汇橙采圃，无病毒砖木采种园4.2.2无病毒丹本同负责间无病毒苗木繁育间提供无病红江遵接穗，砖木种子改砖术苗4.2.3无病毒母本园的繁殖材料出原种保存圖提供，并接爱省级植物检疫机构指定的病毒检测单位的定期病毒检测，口发现繁殖材料带病立邸销毁4.2.4无病青母本园由省农业行政主管部门核准4.3无病毒苗木繁育圃
4.3.1繁有的木和按穗必须求自,无病毒用本园。不充许从当木工采穗进行以苗繁节。4.3.2无病毒红江橙木繁育面负责向生产若提低无病毒红江橙嫁接前木：4.3.3无病毒红江橙苗木繁育函出雀业行政土管部门认定.领政无纳封红江橙苗不生产诈可证和经常许可并接受主菩部的指寻利些留5无病毒原种培育与保存
5.1待脱毒材料
5.1.1待脱毒处理的品种系利砖术成内专业技术人员进行选择。5.1.2选取树龄6年以工、品种纯正、优质高产，且无指定病害的健康优良单株作为待脱需材料的母本树,采集接穗作为脱持材料
5.1.3待脱毒材料的病寺检测先按附求A舰定的方法鉴别主要病毒类等病害，然后按附录B方法检逊柑稀黄龙病病原物：
5.2脱毒处理
5.2.1整炎嫁接脱毒接照附录的规定执行，5.2.2热处坐尖嫁接脱毒按附录)的规定执行，5.3脱毒材料的病毒检测
5.3.1经脱毒处理获得的材料，采用指示植物进行整定：指示植物检测方法按附录F.的规定返行5.3.2指示植物的症状鉴别.按附录F的规定执行5.4无病毒原种的保存
5.4.1红江橙接穗经过脱处理和病毒检测,确认无病毒后力可作为无病毒原种,经繁育后保行在5.4.2用间保存圃，源种要种在前作为作恶香类植物地段，杆橙园相隔3k1以上并用50游出网保护，
5.4.3无病毒原种树每两行成进行·次病毒检测.发现病害单株应立即淘法：检测单估要将病量·结果技告主管部门
6无病毒母本园的建立
6.1园地的选择与基础建设
6.1.1因地应选择前作5年以上为非芸香类枯物地带.丘陵地带选择距离柑橘园3km-..二丝洗择距离柑橘园5klm以上：清除周围香类物6.1.2园地水源丰掌，环境避风,交遍方使，6，1.3四地士壤肥沃，并进行士壤病虫消处理，6.1.4园地周围设置铁丝网防止人为及性蓄「扰。6.1.5国地内设置防虫网保扩.防止传病昆虫侵人：2
6.2无病毒红江橙采穗圃
6.2.1种子处理按GB5040—1985中3.2.1的规定执行NY/T 795—2004bZxz.net
6.2.2粘木种子经播种，培育至高10cm以工移裁：前木签下离地8cm以上、径料0.6rm嫁接：6.2.3采穗雨接穗内无病毒原种保存提供，详细记载原种接穗抹系、米源、脱毒、检测的单位及时间，6.2.4采穗通接穗按株系成行裁植，株即80cmm--10cm，行距10mr-150cm：同-株系连续种植，按顺序线号，绘制采穗圃株系分布图，并做好标记6.2.5加强肥水管理保证树势壮叫牛产充实的接穗和结果.以规察果实的园艺性状，出现非纯红肉果植株立即淘汰。
6.3无病毒砧木采种园
6.3.1砧木品种接各产区造用的站本确定，可采红橘、酸楼和红柠檬等。不同品种要隔离种植6.3.2所采川种了必须在健康棺下采集，种广消声处理接（G5040--1985中3.2.1的规定执行土壤处理按7.2.1.2的方法进行。6.3.3神了播种、移裁按6.2.2的方法进行。6.3.4小采种园的接愁，定采白经过优选的果人、种了多、籽粒饥满的柏株，并剪穗嫁接成苗后，置于玻离箱中利用夏季407·50几温，续培准304以上脱聋：6.4无病毒母本园的病毒检测
6.4.1月本园据毒检测，田问检测按附录A的规定拟行，货龙病病原检测接阅录3的规定批行：发现摘株带病意，立即披除销殿并消程树穴土囊6.4.2年两年随机抽样进行病导检测次：6.5母本园的技术档案
6.5.1年记载各辟种、株系的牛长量，花期、果期、产量，果实大小种了数、果实品质等！6.5.2记录丹本园向外提供的红江橙接的数和接收单位：7无病毒苗木繁育圃的建立
7.1苗圃的建立
7.1.1苗谢地的选择，在黄龙病区，苗面地州马芸否类植物之间距离3krm以上：有高，大河、湖泣等天然屏障的也区，其问隔15km以上.丘水源十富、小壤肥沃、酸度适中，前作5个以上为非芸香类物地段，交通方便。
7.1.2苗商地的规划和建设，划分为十小区，铺设防出网，是网四同安装铁丝网，防1人为被以及性贫进人：
7.2实生砧木培育
7.2.1实生苗床
7.2.1.1站木种子采无病毒木采种园或经病毒检测确认无病毒的种子7.2.1.2播前应施足有机肥，并进行十囊消声，7.2.1.3种子处理按GB5040—1985中3.2.1的规定执行7.2.2实生砧木苗移栽管理
7.2.2.1实生砧木苗移裁，苗10crn~15cm时移裁：移裁时淘汰变异弱小主板和根颈弯曲的小弱苗。
7.2.2.2移裁前睦面的整理按7.2.1.2的要求：间管班与常规牛产管理相同：7.3苗圃的嫁接与管理
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7.3.1接穗的采集：接穗必须从无病毒红江惜采穗面采集，剪下的接穗立即除去叶片.按株系分扎成捆、川趣布包好,并登记本树株系名称(编号)和采集时问：7.3.2嫁接：每次嫁接前用0.5%次氯酸钠溶液对工其进行消毒，嫁接位置离地8cm以「.c7.3.3嫁接苗的管理。嫁接凿的管理与常规牛产普理相同，发现尺常植株应立即清除。7.4红江橙嫁接苗分级标准及检验按GB9659-1988第丘章的规定执行7.5红江橙嫁接苗的检查、签证、出圃按（B5040一1985第四章规定执行。出面前，主要病毒类病害的签定，先按附录八的方法普查，然底抽样检查，按附录B的方法检测柑橘黄龙病的病原物有Aristezal
A.1衰退病
附录A
（规范性附录）
田间目测鉴定柑橘病毒病的症状NY/T 795-2004
速衰型以酸橙件贴木的橙叶片突然菱「枯.或地下无新根或植株矮化：苗黄型叶脉黄化或叶片似缺锌、锰状黄化；萃陷点型接穗主下或支下木质部有陷点和沟纹，川黄果小A.2黄龙病huanglongbing
新梢在长过程小停止转绿，叶片均勾黄化或叶片转绿后从土、侧脉附近和叶片赫部开始黄化，黄化部分扩展形成黄绿柜间的斑驳，叶片变小变硬。A.3裂皮病
exocorlis
以积、积橙、莱檬作木，其砧木部树皮纵向开裂，裂皮下流胶，再者树皮剂落，黑根外露，植株矮化，新梢少而弱，易落叶：
A.4碎叶病
tatter leaf
植株砧穗接合处环缢，接口上部接穗肘大，植矮化，叶脉黄化，后期植株黄化，甚至桔死NY/T 795—2004
B.1待测样品的采集
附录B
（规范性附录）
聚合酶链式反应PCR)技术检测柑黄龙病病原法在用间采集待测村橘植株的川片20片--3）片，装在时保湿期料袋中，送创指定的检测单位进行检测：若不能两上送到检测单位，须放置于4的冰箱中保存15.2待测样品模板IDNA的制备
妆待测叶片的脉0.5g.剪碎，训液氮磨成粉未状；如人2倍~3倍体积的INA油提缓冲液（2%CTA.1%1V1100mmol/.Tris-HC.1,20numnl/.FDTA混.分装于Eppcridorf管中：65C水浴h；用架氮伤氯伤/异醇抽提两次，取上清液，加人1A0体！3Iml/a0AI.0）及2倍体积水乙.胃20℃冰箱过夜：于4下14（00g离心20min，弃上清液，分别用70%及95%2.配洗沉淀齐-次;吹下.加人100l.TF10 mmel/.T1Cl,1 mmol/F1YEA);取2l.在1.2%琼脂榜凝胶[电泳，紫外灯下观察1NA的纯度并估其浓度，其杀置于一20℃冰箱保存备用。B.3PCR特异引物的设计
根据档橘黄龙病病原亚洲株系的DNA序列设计并合成川十检测相橘黄龙病病原的特性小物1和引物2。引物1(P)的碱基序列为：5-GCGXTACCAATACAGXGCA-3：引物2（P)的碱基序列为：5GT(YACTICGCAACCCAT-3，共扩增片段大小为1160bp3.4待测样品的1CR扩增反应
PCR扩增反应体系的总体积为50L：应体系包括：10×PCR反成缓冲疫5pL.2mmol/dNTP:5，P和P各1L（物质的量为25pmol)，测样品的模板INA2T..双蒸灭肉水35L.坡后加人1aNA聚合酶1（3/征）各种反成物混划后，置于R矿增仪上进行扩增支应：反应条件为：94预变性5mir:后，依94变性1min—65返火1mim—72℃延伸111ia，进行35次循坏，72？再划伸1min，使PCR的产物得到充分扩增：每次扩增反成均设清水空对照、健康植株样品负对照及含柑橘克龙涡游原TNA的正对照各-个，衔个试验均进行两次重复。B.5待测样品的检测结果判晰
PCR扩增反应完毕后，取10l.扩增物，川1.2%琼脂糖凝胶电泳40min，电泳完毕后，！254mm的紫外灯下观察，在含柑橘黄龙病病原DNA的正对照样品小，能齐到条长度为1！出持并性中泳区带，为树橘黄龙病病原的1DNA片段，而在清水?白对照，键康植株负对照的样-增不到这条待异性的电减区带。如果在待检测的样品中能扩塔出长度为1160bp的特异性虚.一.则证明该检测样品带有柑横黄龙病病原反之，如果在待检测的样品中不能扩增山长度为【1的持别性电泳区，则证明该检测样品中不带柑橘黄龙病病原。6
c.1砧木种子处理
附录℃
[规范性附录]】
茎尖嫁接脱毒法
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选饱满的砧木品种种子泌于净，剥去种度，在无菌条件下.用（.5%饮氯酸钠液漫泡10 min,用无菌水洗干净片潘种装有 MS培养基的试管中，在黑暗中培养2周。C.2接穗处理
从预先准备好的脱毒母株(小苗),取刚抽出1～2cm长的红江橙新梢，掉较大叶片。在无菌条件卜.用0.25%饮氯酸钠液没5rair,冉川丸菌水洗+净备用。.3茎尖嫁接
将经消毒处理好的接穗切取0.14mm--0.18 mm 的蒸尖(2个-3个原基)嫁接于木上,并移人MS液体培养基中，在光强10001Ix,光照12 h--14h溢度26 ℃=2C条件下培养，及时层除码水不定芽，待嫁接苗长出3片5片卧店,再移于网窒消毒士坨育。按嫁接成活的芽系进行编号。C.4病毒检测
按芽系烷弓，采川指示植物进行鉴定：保存无病毒的芽系，将带病毒的芽系溯汰。NY/T 795—2004
1).1接穗的准备和热处理
（规范性附录）
热处理一茎尖嫁接脱毒法
预先将准备好的红江橙母株（盆栽小苗)肾）人丁气候箱中进行热处理35d（白大用40℃、光照16h.黑夜30光照8h）.或置丁破璃箱中利用夏季40～50口温，持续8小培养30d以上D,2种学处理和砧木准备
站不品种的种子.在无菌条件下，用（.5%次氯酸钠液浸泡10 min,用无菌水冲洗T净,播下MS琼脂培养试微定，在黑暗中培养2周作术。JD.3茎尖嫁接
在无菌条件下，段山砧木，切去举上部，从热处理母株(小苗)嫩芽工切取0.14trrm)~0.18 mm的萃尖(2个3个川原基)嫁接}砖木上，并移入液体MS培准基中，在温度26C+2七、有光条件下培养,待鉴尖成活、长窄3片5片叶时,再移丁网宰消毒「中培育：对嫁接放活的每个牙系进行编号1.4病毒检测
按芬系编号来用指示植物进行鉴定，保存无病萨的芽系,将带病毒的芽紊淘汰8
F.1指示植物的选用
附录E
【规范性附录】
指示植物检测法
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黄龙病选彬柑实牛苗作指示植物;裂皮病选EEr呢香橡86】一S·作指示植物：碎叫纳选Rusk权避作指示植物；衰退病普通型株系用墨西哥莱檬，苗黄型株系用酸橘、葡菌种，签陷点型株系用甜密作指示植物。指示植物必须是健康的。E.2待检苗的准备
挑选线烯和碰柑硅长--致的站木实生芯,定植于检测苗圃中，每行50株100株,棵行距2011160cT1检测苗阐5001以内不得有柑橘类植物，并设暨防虫网累住，防止病也侵入：从待检样本树1:剪琅成熟枝条，嫁接于红橘砧木实牛苗上作为待检前：按照待检样本树芽系编号挂牌。1株待检样本树在同行站本上嫁接5楼。
E.3指示植物与待检苗的嫁接
待检苗粗0.5cm即可嫁接：分别剪取E.1选用的指示植物的成熟枝条，分别采取枝段枝接或牙片腹接法.接于待检苗上，并从待检样本树工剪取成熟枝段或穿片接丁村实牛苗上：按指示植物名称和待检尚葬系编号，写好标等，做好记录利牌，E.4嫁接苗的管理
接届，巩强肥水管理，随止虫等和挖皆璧牛长1.5病毒类病霉鉴别
从芽展叶开始，每周定期观察指示植物的症状表现，做好观察记求，根据指示植物的症状反成，判别待扮药是告还潜带病毒。
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附录F
【规范性附录】
病毒类病害在指示植物上的症状鉴别病毒类病害在指示植物上的症状鉴别如表上.1所示。表 F.1 病毒在指示植物上的症状病毒类病害
黄龙病
裂皮病
碎川病
逃衰型
衰退病
苗黄型
举陷点荆
指示植场
桂柑实非
Etng 香橡 8Gl--1
四菜楼甜都
葡密柑、酸橘
甜橙、葡萄灿
症状表现
新梢汁尸斑驳型黄化
爱尚叶片中肽抽黯尚叫背差曲，些叶背面叶脉黑色坏就或爪裂
春鸡或秋片出现貢斑,扭出和
叶缘缺投
功间断性半透明战4个---5个月三有挚陷点
茎陷点
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